КАБИНЕТ КЛИНИЧЕСКОЙ ЦИТОЛОГИИ И КОМПЬЮТЕРНОЙ ЦИТОМЕТРИИ СП-б п

КАБИНЕТ КЛИНИЧЕСКОЙ ЦИТОЛОГИИ И КОМПЬЮТЕРНОЙ ЦИТОМЕТРИИ СП-б. п. ПАРГОЛОВО ул. БАЙКАЛЬСКАЯ д. 20 т. 942 -0 -400 www. cytovet. ru Литвинов Николай Валерьевич New York

Методы получения патологического материала для цитологического исследования

Клиническая цитология — признанный полноценный метод морфологического анализа, основанный на изучении и оценке клеточного материала, полученного различными способами из патологического очага.

N. B! • Ориентируйтесь на правильный выбор метода получения цитологического образца • Цитологический образец, направление и морфологическое заключение– юридический материал! • Уважение, взаимопонимание и грамотность – диагностический успех! • Gatter KM. The big problem of the missing cytology slides. Cyto. Journal [serial online] 2004 [cited 2016 Feb 8]; 1: 3. Available from: http: //www. cytojournal. com/text. asp? 2004/1/1/3/41273

“Диагностическая пункция является безопасным для больного методом, т. е. не вызывает ускорения роста злокачественной опухоли и ее метастазирования, технически проста, может быть применена неоднократно, занимать мало времени для обработки полученного материала”. (Петрова А. С. Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых процессов. АМН СССР. -М. : Медицина, 1985, с 7. )

Способы получения патологического материала для цитологического исследования • Эксфолиативная цитология: - отделяемое различных органов - жидкости - метод отпечатков • Пункционная цитология • Эндоскопический материал

Эксфолиативная цитология отделяемое различных органов (молочная железа и др. ). Для приготовления препарата капля отделяемого наносится на стекло и готовится мазок. Можно также делать отпечатки с места выделения (сосок молочной железы, слизистое влагалища, выходное отверстие свища и др. ). Отпечатки со слизистых и кожных покровов, если это доступно, можно делать непосредственно на стекло. В других случаях мазки готовят из соскобов шпателем, ершиков с тампонов.

Эксфолиативная цитология жидкости Жидкости и содержимое кист получают путем пункции полостей (аспирация из брюшной, плевральной и др. ) и кист. Если материала мало, то он наносится на стёкла и распределяется в виде тонкого мазка. Значительные количества жидкости предварительно центрифугируются (накопительное центрифугирование) и затем мазки готовят из осадка. Таким же образом обрабатывается материал промывных вод. Для цитологического исследования требуется 20 мл. гепаринизированной перекардиальной жидкости, собранные в 2 -а этапа, первые 10 мл. в начале аспирации и последние 10 мл. в конце. Пробы доставляются с хладоэлементом в тот же день, max. в течении 5 часов! В. В. Долгов / Выпотные жидкости. Лабораторное исследование/

Получение содержимого из желудка для исследования н HB

Эксфолиативная цитология метод отпечатков Использование для цитологического исследования мазковотпечатков с биопсийного и операционного материала значительно повышает эффективность цитологической диагностики. Отпечатки со среза биоптата или кусочка оперативно удаленной ткани наносятся прикосновением поверхности среза к стеклу. Во-первых, клетки подвергаются гораздо меньшему травматизму. Во-вторых, есть возможность расположения клеток пластами, что помогает при описании цитологического препарата характеризовать и соотношение клеток между собой. В-третьих, если материал богат кровью, его необходимо нанести на стекло и тогда выбирать оттуда "белые крупинки" и ими делать мазки. Метод отпечатков применим при использовании цитологического метода во время операционного вмешательства, а так же получении биопсии. Этот метод может быть использован как самостоятельно, так и параллельно с гистологическим анализом.

Пункционная цитология Пункция - (punctio, -onis, -f <лат. укол, прокол>) - прокалывание стенки органа или полости организма полой иглой или троакаром с диагностической или лечебной целью. Пунктат – (punctatum, -i, -n, «латинское колоть, прокалывать» ) – небольшое количество ткани или жидкости, извлеченное путем пункции. Аспирация – (aspiratio, - onis, -f «латинское надувание, вдувание» ) – 1. отсасывание жидкостей из полостей тела; 2. проникновение в дыхательные пути посторонних вещей

Пункционная цитология Необходимо отметить проведение следующих этапов: - присоединить иглу к шприцу и заполнить его на половину воздухом! - жестко фиксировать пункционируемую массу с помощью руки; - вводить иглу, надетую на шприц в новообразование под разными углами в разных направлениях; - создавать отрицательное давление в шприце с помощью поршня во время цитопункции запрещено! (в исключении при аспирации жидкостного материала). Аспирируемый материал не должен поступать в шприц, а также контаминироваться кровью. - осторожно выдавить из заполненого воздухом шприца находящееся в игле содержимое на один из концов предметного стекла, и тут же сделать мазок до того, как материал успел коагулировать. - Стекла с не высохшим отобранным материалом скреплять между собой или с бумагой, скотчем, тканью и тд. – запрещено!

Эндоскопический материал а) бронхоскопия — мазки щеточкой, трансбронхиальные пунктаты, мазки из материала щипковых биопсий, промывные воды, б) гастроскопия — мазки щеточкой, отпечатки со щипковых биопсий, в) колоноскопия, ректоскопия — мазки с ватного тампона, щеточные мазки, отпечатки с биопсий, г) цистоскопия — нативная моча, спиртовые смыв, отпечатки, с биопсийных кусочков. д) ларингоскопия — мазки с участков поражения и отпечатки с кусочков, е) и др.

Получение образцов под контролем узи

Core needle biopsy • игла той же величины, что и при цитопункции, но уже получаете биоптат ткани, который можно исследовать гистологически! • диаметр игл в разы меньше чем диаметр панча => меньше трвмирование • самая тонкая 21 > 20 > 18 > 16 > 14

Core needle biopsy - преимущества • игла той же величины, что и при цитопункции, но уже получаете биоптат ткани, который можно исследовать гистологически! • Скорая биопсия для постановки градации опухолевого процесса • диаметр игл в разы меньше чем диаметр панча => меньше трвмирование. • самая тонкая 21 > 20 > 18 > 16 > 14 • панч только с поверхности кожи, а кор можно использовать из глубины и под контролем УЗИ.

Подготовка мазка Цель данной операции - получение тонкого слоя (монослой) с утончением в конце до полного истощения материала; для получения на предметном стекле интактных униформных дисперсных клеток. В связи с этим предлагается несколько техник выполнения мазков

Шпатели и щеточки Забор и нанесение отобранного материала одноразовыми щеточками системы “Cytobrush” , ”Cervex-brush” и атравматичные щеточки”accelon combi”.

“Жидкостная” цитология liquid based cytology (LBC) обеспечивает высокую степень концентрации клеток в виде монослоя на предметном стекле, на ограниченной площади с минимальной потерей материала (“Cellprint”, “Cytospin” и т. д. ). Использование “жидкостной” цитологии особенно рекомен дуется при выполнении иммуноцитохимических исследований.

Виала Novaprep • Транспортная среда - консервант (Preserv. Cyt, Novaprep - solution preservative). Собранный клеточный материал, помещенный в виалу с консервантом (PBS, коммерческие спирто-эфирно-формалиновые смеси и др. ), препятствует повреждению клеток, позволяет отфильтровать слизь и избежать бактериального загрязнения, споспешествует в оптимальных условиях доставить пробу в лабораторию. Позволяет сделать несколько цитологических препаратов из 1 пробы.

Консервирующие растворы для цитологии и cell-block

Подготовка мазка Использование полуавтоматичес ких центрифуг (Cytospin или Diff Spin и др. ) для приготовления мазков из всеразличных смывов и других жидких материалов.

Приготовление и окрашивание препаратов в автомате BD Prep. Stain™ Автоматический перенос материала в кюветы Набор реактивов для окрашивания Гомогенизированная клеточная взвесь Operator’s Manual – Prep. Stain slide Processor – 780 -06181 -00 Rev B

Стейнеры для окраски

Успех цитологического исследования, естественно, зависит от того, насколько правильно взят материал (из самой ли опухоли из окружающих тканей, из центра опухоли или ее периферии, из участков некроза или кровоизлияний). Поэтому, если в цитологическом препарате опухоль не обнаружена, это может и не говорить о том, что ее нет. “Пустой” препарат может быть результатом неправильной, неудачной пункции, и в случае необходимости исследование надо повторить. Ваша цель Точность!

ДОСТАВКА, РЕГИСТРАЦИЯ И МАРКИРОВКА МАТЕРИАЛА - - Направление: Фамилия, имя и отчество владельца. адрес проживания, клиника или питомника. вид животного, порода, кличка, возраст и масть. откуда получен материал, и каким образом. в каком виде направляется (жидкость, стекламазки), количество. описание status localis (подробное описание выявленных местных признаков и симптомов основного заболевания). краткий анамнез с обязательным указанием на наличие и характер вредных воздействий, предшествующего лечения (в особенности гормонального, лучевого, химиотерапии и др. ) данные других методов исследования (рентген, эндоскопия и др. ) предполагаемый клинический диагноз.

Компьютерная диагностика рака (DNA ploidy) Стандарт плоидности определяется во ядрам малых лимфоцитов (их ДНК, соответствует 2 С)

Компьютерная диагностика рака (DNA ploidy) Компьютерная цитометрия позволяет сверять интегральную оптическую плотность ядер патологических клеток с выбранным стандартом что позволяет объективно дифференцировать патологию.

Компьютерная диагностика рака (DNA ploidy) Оценка 1, 5 -2, 9 с-норма и гиперплазия 3 -3, 4 с- доброкачественные опухоли 3, 5 -4, 4 -пограничные стадии (рак in situ) 4, 5 с и выше злокачественные стадии канцерогенеза-карциномы 4, 5 -5, 4 с-Высокодифференцированная степень 5, 5 -6, 4 с- умеренно дифференци. Рованные 6, 5 -7, 4 с-низкодифференцированные 7, 5 с и выше-недифференцированную.

Компьютерная диагностика рака (DNA ploidy) 1. Ранняя диагностика стадий развития новообразований 2. Степень дифференцировки карцином 3. Патоморфологический диагноз, в спорных случаях 4. Информирует о пролиферативной активности опухолевой ткани 5. Определяет эффективность терапевтических воздействий на опухоль 6. Создает надежность полученных диагностических параметров до 88, 5%.

Постаналитическое взаимодействие • http: //www. ncbi. nlm. nih. gov/pmc/articles/PMC 32554 86/ Standard IPSG (International Patient Safety Goals) Основные ошибки • • • Предварительно преаналитическая (46 -68%) Предварительно аналитические (3 -5%) Аналитический (7 -13%) Пост-аналитическая (13 -20%) Пост-пост-аналитическая (25 -46%)

Резюме • В цитологическом исследовании привлекает простота, быстрота, легкая повторяемость, динамика морфологических изменений в течение заболевания и в процессе лечения. • Кроме того, цитологическое исследование не требует больших материальных затрат, недороги реактивы и оборудование. • Цитологический диагноз требует обязательного подтверждения! • Гистологическое исследование остается эталоном правильности цитологического диагноза.

www. cytovet. ru Удачи!