ИЗОЛИРОВАНИЕ ЭТАНОЛОМ, ПОДКИСЛЕННЫМ ЩАВЕЛЕВОЙ КИСЛОТОЙ (МЕТОД СТАСА-ОТТО) ОБЩИЙ МЕТОД В настоящее время применяется, главным образом, для исследования гнилостно измененного биологического материала Длительность(8 -10 рабочих дней) и Предусматривает очистку извлечения многостадийность Сравнительная от балластных дороговизна метода веществ ( на 1 исследование тратится до 500 мл этанола) Метод универсален
• Настаивание измельченного объекта с этиловым спиртом, подкисленным щавелевой кислотой до р. Н 2 -3, в течение суток. Спиртовое извлечение сливается и вся операция повторяется трехкратно. • Упаривание объединенных спиртовых извлечений при температуре 40 -50 0 С до густого остатка, в который по каплям добавляют абсолютный этанол для коагуляции белков. Осадок отфильтровывают и всю операцию осаждения повторяют по мере необходимости до полного удаления белковых соединений. • Упаривание фильтрата при той же температуре до густого остатка и разбавление горячей водой для удаления смолистых веществ, жиров и пигментов. Осадок отфильтровывают. • Экстрагирование веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера из водного фильтрата хлороформом при р. Н=2 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием ( фракция А, «кислое» извлечение). • Подщелачивание оставшегося после разделения фаз водного слоя до р. Н 9 -10, экстрагирование веществ сильноосновного и нейтрального характера (трехкратная экстракция) хлороформом, отделение органической фазы и концентрирование упариванием (фракция Б, «щелочное» извлечение).
ИЗОЛИРОВАНИЕ ВОДОЙ, ПОДКИСЛЕННОЙ ЩАВЕЛЕВОЙ КИСЛОТОЙ (МЕТОД ВАСИЛЬЕВОЙ) ОБЩИЙ МЕТОД Обычно не применяется для исследования гнилостно измененного биологического материала Быстрота (анализ можно провести в течение одного рабочего дня) Меньшее количеством операций, меньшие потери искомых веществ Экономичность и дешевизна, т. к. дорогой спирт заменен водой Образование стойких эмульсий при экстрагировании веществ из водной фазы хлороформом, т. к. метод не предусматривает очистки извлечений
Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной щавелевой кислотой до р. Н 2 -3, в течение двух часов. Вода берется в количестве 1: 2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется. Экстрагирование веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера из водного фильтрата хлороформом при р. Н=2 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием (фракция А, «кислое» извлечение). Подщелачивание оставшегося после разделения фаз водного слоя раствором аммиака до р. Н 9 -10, экстрагирование веществ основного характера трехкратной экстракцией хлороформом, отделение органической фазы и концентрирование упариванием (фракция Б, «щелочное» извлечение).
ИЗОЛИРОВАНИЕ ПОДЩЕЛОЧЕННОЙ ВОДОЙ (МЕТОД ВАЛОВА) ЧАСТНЫЙ МЕТОД Используется для извлечения барбитуратов Выход составляет 50% и даже до 90% в зависимости от вида барбитурата. Метод дает достаточно чистые извлечения, т. к. включает стадию очистки (осаждение белков вольфраматом натрия), что повышает качество последующего анализа. Соосаждение барбитуратов с белками при обработке вольфраматом натрия. В последней модификации метода Н 2 SO 4 заменена Na. HSO 4, что увеличивает выход искомых веществ.
Настаивание измельченного объекта с водой, подщелоченной 20% Na. OH до р. Н 10 и более, в течение 30 минут Очистка водного извлечения путем насыщения вольфраматом натрия в кислой среде (Н 2 SO 4 до р. Н 2), фильтрование раствора Экстрагирование эфиром, концентрирование эфирного извлечения упариванием
ИЗОЛИРОВАНИЕ ВОДОЙ, ПОДКИСЛЕННОЙ СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ (МЕТОД КРАМАРЕНКО) ЧАСТНЫЙ МЕТОД Используется для извлечения алкалоидов Метод применим и для изолирования других Nсодержащих веществ основного характера (синтетических лекарственных средств). Метод достаточно быстрый. Хорошая очистка извлечений от соэкстрактивных веществ. Потеря искомых веществ изза соэкстракции на стадии очистки
Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной 20% H 2 SO 4 до р. Н 2 -3, в течение 2 ч. Вода берется в количестве 1: 2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется. Операция повторяется двукратно. Очистка водного извлечения от белковых соединений путем насыщения его (NH 4)2 SO 4, настаивания в течение часа и фильтрования образовавшегося осадка Очистка фильтрата от жиров, смол, пигментов путем экстракции эфиром. Эфирное извлечение отбрасывают Подщелачивание водного извлечения 20% раствором гидроксида натрия и экстрагирование веществ основного характера хлороформом при р. Н=9 -10 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием
Скачать презентацию ИЗОЛИРОВАНИЕ ЭТАНОЛОМ ПОДКИСЛЕННЫМ ЩАВЕЛЕВОЙ КИСЛОТОЙ МЕТОД СТАСА-ОТТО ОБЩИЙ
МЕТОДЫ ИЗОЛИРОВАНИЯ.pptx