Исследование спермы В настоящее время ни

Исследование спермы

В настоящее время ни один квалифицированный гинеколог не приступает к обследованию и лечению женщины в бесплодном браке, не получив сведений о способности ее мужа к оплодотворению. Согласно статистике, каждая десятая супружеская пара оказывается бесплодной. Заболевания женщины становятся причиной бесплодия лишь у 40% супружеских пар. В 45 % случаев «виновником» оказывается мужчина. Остальные 15% приходятся на случаи несовместимости организмов супругов, так называемую иммунологическую форму бесплодия и другие редкие формы.

Существует 2 основные формы мужского бесплодия Секреторное бесплодие (нарушено образование сперматозоидов в извитых канальцах яичек) Обтурационное бесплодие (имеется препятствие на их пути к мочеиспускательному каналу)

К мужской половой системе относятся: Яичко (1) Придаток яичка (2) Семенной канатик (3) Семенные пузырьки (4) Предстательная железа (5) Некоторые мелкие железы Половой член

Яичко (1) Орган, в котором вырабатываются сперматозоиды и тестостерон – мужской половой гормон. Яички находятся в мошонке – многослойном кожном мешочке, которая регулирует температуру в яичках и предотвращает их от травм.

Придаток яичка (2) Прилегает к верхней поверхности яичек Содержит выносящие канальцы сливающиеся в проток придатка Проходя через придаток яичка сперматозоиды дозревают и приобретают свое основное качество подвижность

От придатка яичка отходит длинная узкая трубка, окруженная кровеносными сосудами. Трубка называется семявыносящим протоком, а вместе с сосудами – семенным канатиком. Семенной канатик (3) начинается от нижнего конца (хвоста) придатка затем идет вверх через паховый канал в брюшную полость. Здесь достигает шейки мочевого пузыря и впадает в верхнюю предстательную часть мочеиспускательного канала. От каждого яичка отходит свой семенной канатик. Основное его назначение – выведение из яичек и продвижение созревших сперматозоидов.

Семенные пузырьки (4) Семявыносящие протоки, подойдя к шейке мочевого пузыря, расширяются и образуют семенные пузырьки. В них накапливаются сперматозоиды и хранятся до того момента, как будут выведены из организма. Семенные пузырьки секретируют жидкость, богатую фруктозой. Фруктоза является источником питания сперматозоидов.

Предстательная железа (5) Находится под дном мочевого пузыря и охватывает кольцом шейку мочевого пузыря и самое начало мочеиспускательного канала. Размеры ее в норме 2 х3 х3, 5 см. Простата является одновременно мышечным и железистым органом и представляет собой совокупность отдельных железок, окруженных мышечной и соединительнотканной стромой. Как экзокринная железа простата продуцирует секрет, пополняюший жидкую часть спермы. Мышечные элементы простаты во время эякуляции выбрасывают секрет из железок и образуют непроизвольный сфинктер мочеиспускательного канала.

бульбоуретральные железы (6) Две небольшие железки, величиной с горошину, которые открываются в мочеиспускательный канал и секретируют слизистую (и потому вязкую) жидкость, которая защищает стенки мочеиспускательного канала от раздражения мочой и спермой.

Существует 2 основные формы мужского бесплодия Секреторное бесплодие (возникает из-за нарушений деятельности яичек, когда яички не производят достаточного количества сперматозоидов, или у сперматозоидов нарушена подвижность, или большинство из них имеют дефекты строения (может быть при варикоцеле, крипторхизме, водянке, опухолях, травмах яичка, недостатке тестостерона, после перенесенного паротита, при воспалительных заболеваниях мочеполовой системы) Обтурационное бесплодие (продвижение сперматозоидов по семявыносящим путям невозможно (чаще развивается после перенесенного воспаления придатка яичка в следствие образования спаек в его протоках, травмы, сдавление семявыносящих протоков опухолью, сифилис, туберкулез)

Повреждение сперматогенного эпителия могут вызвать: Длительное воздействие проникающей радиации Значительные по интенсивности или продолжительности электромагнитные колебания Действие высоких температур Велосипедные тренировки Наличие в анамнезе сифилиса, туберкулеза, гормональных нарушений, длительного приема противоопухолевых, противоэпилептических препаратов, некоторых антибиотиков, стероидных гормонов, антиандрогенов Длительный стресс, недостаток белков и витаминов в пище, хроническое недосыпание, злоупотребление никотином, алкоголем, наркотиками

Строение яичка Яички разделены тонкими соединительнотканными перегородками на отдельные дольки Каждая долька содержит семенных канальца В извитых канальцах протекает сперматогенез и каждую минуту в норме образуется около 50000 новых сперматозоидов Извитой каналец представлен клетками сперматогенного эпителия, лежацего на базальной мембране. Среди клеток сперматогенного эпителия располагаются поддерживающие клетки Сертоли. В цитоплазме этих клеток содержатся многочисленные жировые и белковые трофические включения, благодаря которым обеспечивается питание сперматогенного эпителия. Кроме того клетки Сертоли участвуют в фагоцитозе погибших клеток В соединительнотканных перегородках располагаются скопления железистых клеток, вырабатывающих тестостерон - клеток Лейдига Яички снаружи покрыты серозной оболочкой. На каждом яичке сверху расположен придаток, который переходит в семявыносящий проток. 1 -2 извитых

Подготовка к анализу Для получения достоверного результата нужно: Несколько дней полового воздержания (от 2 до 7 дней, в среднем 3 дня). Меньший срок приводит к занижению объема спермы и количества сперматозоидов, а больший – к снижению подвижности и увеличению аномальных сперматозоидов в связи с «постарением» спермы. Столько же дней воздержания от употребления алкогольных напитков, лекарственных препаратов, большого количества кофеина. Столько же дней воздержания от тепловых процедур – сауны, горячие ванны, горячий душ, солярий, солнечные ванны.

В последствии, если возникает необходимость в повторении спермограммы для сравнения результатов, подготовка к анализу должна быть точно такой же, как для первого анализа – в частности половое воздержание с точностью до 1 дня. Повторную спермограмму нужно делать в той же лаборатории, что и первую, если качеству работы этой лаборатории можно доверять. В идеале сперма должна быть получена непосредственно в лаборатории и сразу же исследована. Допускается транспортировка пробы из дома в тепле в пределах 1, 5 часов после получения.

Сперма (синонимы - семенная жидкость, эякулят), смесь выделяемых во время эякуляции продуктов секреции мужских половых органов: яичек и их придатков, предстательной железы, семенных пузырьков, куперовых желез, уретры. Состав спермы: Жидкость из семенных пузырьков (65%) Жидкость из простаты (30%) Сперматозоиды (5%)

Исследование спермы включает Макроскопическое исследование Микроскопическое исследование Биохимическое исследование

Разжиженность. Сразу после эякуляции сперма имеет густую консистенцию. Под влиянием ферментов предстательной железы через 10 -30 минут обычно происходит полное разжижение спермы (норма до 60 минут). Если эякулят длительное время не разжижается, то следует думать о воспалении предстательной железы или семенных пузырьков. В результате увеличения времени разжижения сперматозоиды дольше набирают свою полноценную подвижность. Это приводит к их более длительному контакту с кислой средой влагалища, что резко снижает их шансы на проникновение в матку и на оплодотворение. Этот показатель спермограммы имеет прямую связь с вероятностью зачатия.

Вязкость спермы Вязкость эякулята устанавливалась по методу Хотчкисса в полностью разжиженном эякуляте. В размешанный эякулят опускают стеклянную палочку, затем поднимают ее и приблизительно визуально измеряют длину образовавшейся нити. Такую процедуру выполняют несколько раз. В каждом случае отмечается минимальная и максимальная длина такой слизистой нити, и затем определяется ее среднее значение. Длина нити измеряется в сантиметрах. В норме вязкость до 2 см. Если в эякуляте присутствуют тяжи слизи, вязкость оценивается в свободных от слизи участках.

Отклонение от нормы показателей вязкости эякулята называется "вискозипатия эякулята". Увеличение вязкости спермы чаще всего бывает связано с хроническим воспалением половых желез - простатитом и везикулитом, но, кроме того, может быть обусловлено патологическими изменениями и в самих яичках или их придатках. Повышенная вязкость спермы ведет к затруднению передвижения сперматозоидов во влагалище, к более длительному контакту с кислой средой влагалища, что значительно снижает шансы на оплодотворение. Этот показатель спермограммы напрямую связан с вероятность зачатия.

Объем эякулята. Объем эякулята в норме 2 -6 мл. Его измеряют сразу после разжижения. Полиспермия – увеличение объема семенной жидкости более 10 мл. Олигоспермия – снижение объема семенной жидкости менее 2 мл. И олиго- и поли- спермия обусловлены заболеваниями предстательной железы и семенных пузырьков. Уменьшение объема эякулята менее 1 мл всегда связано с атрофией яичек. Такой эякулят не содержит сперматозоидов.

Цвет. В норме белый, сероватый, желтоватый. Описание цвета проводится после разжижения эякулята. Красный или темно -коричневый цвет говорит о примеси крови (при травмах половых органов, хроническом везикулите, калькулезной форме простатита). Желтый цвет спермы в патологических случаях свидетельствует о примеси гноя, но может быть обусловлен употреблением пищевых красителей или приемом некоторых лекарственных препаратов. В этом случае большого диагностического значения этот показатель не имеет.

мутность В норме эякулят мутный. Степень мутности зависит от количества содержащихся сперматозоидов, если количество сперматозоидов снижено, то эякулят более прозрачен. В норме в эякуляте могут содержаться желеобразные гранулы.

Исследование спермы с помощью тест-полосок Капля разжиженной спермы наносится на соответствующую диагностическую зону тест-полоски для исследования мочи. Изменение окраски сравнивается с цветной шкалой. Таким образом можно определить наличие эритроцитов и лейкоцитов в сперме, а так же р. Н.

РН спермы В норме от 7, 2 – 8. 0 – это щелочная среда. Постоянная р. Н обеспечивает активную подвижность сперматозоидов. При воспалении предстательной железы р. Н становится резкощелочной, а при заболевании семенных пузырьков сдвигается в кислую сторону. Если р. Н меньше 6, то сперматозоиды теряют подвижность.

Определение фруктозы Фруктоза образуется в семенных пузырьках из глюкозы. Норма 0, 257 мг/мл. Концентрация фруктозы в сперме тесно связана с концентрацией тестостерона в организме. Снижение концентрации тестостерона сопровождается уменьшением фруктозы в сперме. В сперме сперматозоиды перерабатывают фруктозу в молочную кислоту. При этом образуется энергия, являющаяся источником их подвижности. Высокие показатели фруктозы отмечены у пациентов, страдающих гипогонадизмом и сахарным диабетом, а низкие показатели - при заболеваниях предстательной железы и семенных пузырьков и у пожилых.

Определение лимонной кислоты Лимонная кислота вырабатывается исключительно предстательной железой. В норме ее должно быть более 20 ммоль/л. Лимонная кислота необходима для процессов свертывания – разжижения.

Микроскопическое эякулята включает: исследование Изучение в нативном препарате сперматозоидов (кинезиограмма). подвижности Определения наличия агглютинации и агрегации. Определение наличия макрофагов, клеток эпителия, лецитиновых зерен, амилоидных телец, кристаллов и др. Подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева. Подсчет количества клеток сперматогенеза в камере Горяева. Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева. Изучение морфологии сперматозоидов. Обнаружение в окрашенных препаратах трихомонад и грамотрицательных диплококков

Метод приготовления нативного препарата. На предметное стекло наносится капля тщательно размешанного эякулята. Для создания тонкого слоя объем капли должен быть 10 мкл, размер покровного стекла 24 х24 мм. Под тяжестью покровного стекла образуется препарат стандартной толщины — около 20 мкм. Стабилизация препарата происходит в течение 1 минуты. Нативный препарат просматривается при малом и большом увеличении микроскопа.

агглютинация Агглютинация — склеивание подвижных сперматозоидов между собой головками или хвостами. В норме отсутствует. Появление агглютинации позволяет предположить наличие иммунологического фактора бесплодия. Появление агглютинации само по себе не снижает вероятность зачатия естественным путем, но оно почти всегда ведет к снижению подвижности сперматозоидов.

Полуколичественная оценка агглютинации. «-» «+» отсутствие агглютинации слабо выраженная (в нативном препарате до 10 скоплений сперматозоидов, по 4 -6 в каждом). «++» значительная (в нативном препарате более 20 скоплений сперматозоидов). «+++» резко выраженная (в нативном препарате более 20 скоплений сперматозоидов, при этом в каждом более 20 сперматозоидов). «++++» тяжелая степень агглютинации, при которой все подвижные сперматозоиды находятся в состоянии агглютинации.

Агрегация (псевдоагглютинация) хаотическое скопление неподвижных сперматозоидов, нагромождение их на комочки и тяжи слизи.

Лецитиновые зерна Это мелкие блестящие зернышки, содержащиеся в нормальной сперме в большом количестве. При простатите их количество уменьшается. При длительном воспалении они исчезают.

Амилоидные тельца Округлой формы образования разных размеров с характерной слоистостью, напоминающей спил дерева. Являются элементами застоя секрета предстательной железы

Кристаллы спермина Бесцветные, удлиненной формы с заостренными или прямоугольными концами. Образуются при охлаждении спермы, а так же при длительном стоянии спермы

Концентрация сперматозоидов Для подсчета концентрации сперматозоидов используется камера Горяева для разведенных образцов и камера Маклера для подсчета сперматозоидов без предварительного разведения. При толщине нативного препарата 20 мкм в нем проводят предварительную оценку концентрации сперматозоидов При 400 -кратном увеличении микроскопа объем поля зрения варьирует от 1 до 2, 5 нл

Раствор Барбагалло для обездвиживания сперматозоидов 7 мл 40% формалина 93 мл 0, 85% раствора Na. Cl

Процедура подсчета в камере Горяева Если сперма богата сперматозоидами, то ее разводят раствором Барбагалло в 20 раз и заполняют камеру. Согласно рекомендациям ВОЗ подсчет проводят в двух камерах и результат определяют как среднее двух определений. Сперматозоиды подсчитывают в 5 больших квадратах по диагонали. Считают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов. Расчет ведут по формуле Х=Ах1000, где А — количество сперматозоидов в 5 квадратах.

Процедура подсчета в камере Горяева (продолжение) Если сперматозоидов очень мало (единичные в поле зрения при х400), то их тоже обездвиживают, добавляя в 1 мл спермы 2 капли реактива Барбагалло. Заполняют камеру. Сперматозоиды подсчитывают в больших квадратах. Расчет ведут по формуле Х=Ах2500, где А — количество сперматозоидов в 100 квадратах. 100

Общее количество сперматозоидов во всем эякуляте рассчитывают, умножая количество сперматозоидов в 1 мл на объем выделенной спермы. Например объем выделенной спермы — 5 мл, количество сперматозоидов 30 млн/ мл 30 х 5 = 150 миллионов сперматозоидов во всем эякуляте.

В норме в 1 мл эякулята должно содержаться не менее 20 млн. сперматозоидов. И, соответственно общее количество сперматозоидов в эякуляте не должно быть меньше 40 млн. , так как нижняя граница нормы объема эякулята - 2 мл.

Олигозооспермия — в 1 мл содержится менее 20 млн. сперматозоидов. эякулята Криптозооспермия — обнаружены единичные сперматозоиды в препарате, однако концентрацию их подсчитать невозможно. Азооспермия — сперматозоиды при микроскопическом исследовании в нативном препарате и осадке эякулята, полученном после центрифугирования, не обнаружены. Могут присутствовать клетки сперматогенеза. Аспермия — нет эякулята.

Исследование морфологии сперматозоидов Для морфологически нормального сперматозоида характерна овальная форма головки. Длина ее составляет 5 -6 мкм, ширина 2, 5 -3, 5 мкм, акросома занимает 40 -70% площади головки, при этом отсутствуют аномалии шейки, хвоста и серединного отдела

Исследование морфологии сперматозоидов. В окрашенных по Романовскому препаратах проводят последовательный подсчет 200 сперматозоидов с увеличением микроскопа окуляр х7 или х10 с масляной иммерсией. Поданным ВОЗ количество нормальных сперматозоидов не должно быть меньше 50%. Снижение количества нормальных форм сперматозоидов носит название тератозооспермия. Это часто наблюдается при токсических и радиационных поражениях органов мошонки, реже при воспалительных или перенесенных инфекционных заболеваниях. На морфологию сперматозоидов сильное влияние оказывает экология в регионе проживания мужчины.

Патологические формы сперматозоидов Дефекты головки (большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые, аморфные, головки с маленькой акросомальной частью, нессиметрично расположенной акросомой, двойные и множественные головки, «булавочные» головки). Дефекты шейки Дефекты хвоста и средней части ( «склонененная» шейка (шейка и хвост образуют угол 90 градусов), ассиметричное прикрепление средней части к головке, утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически тонкая средняя часть). (короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, неравномерной толщины, с закрученным хвостом).

Подсчет кинезиограммы Подвижность каждого сперматозоида классифицируется по категориям А, В, С и D. Подвижность класса А — быстрые прямолинейные движения сперматозоидов со скоростью не менее 0, 025 мм/с (то есть не менее половины собственной длины в секунду). Это здоровые, «молодые» сперматозоиды, недавно сформировавшиеся в яичках. Класс В — спермии с медленным прямолинейным движением, их скорость менее 0, 025 мм/с, но траектория движения все-таки прямая. Класс С — сперматозоиды, которые движутся непрямолинейно (например, ходят кругами или еле барахтаются на месте), движение практически на месте. Класс D — полностью неподвижные сперматозоиды. Как правило, это умершие или умирающие «от старости» сперматозоиды. Поэтому, чем меньше воздержание перед семяизвержением, тем меньше неподвижных сперматозоидов в эякуляте.

Подсчет кинезиограммы (продолжение) В окуляр х10 вкладывают ограничитель Фонио и с объективом х40 подсчитывают 200 сперматозоидов. В первые 3 -5 секунд регистрируют проходящие через окошко активноподвижные сперматозоиды (А). Следующие 3 -5 секунд — малоподвижные с поступательным движением (В). Затем отмечают сперматозоиды с непоступательным движением (маятникообразным и манежным) (С). И наконец с помощью движений микровинта регистрируются лежащие на нижнем уровне препарата неподвижные сперматозоиды (D). Препарат резко передвигают и сперматозоиды регистрируют в новом поле зрения в том же порядке. Если сперматозоидов мало, подсчет проводят без ограничителя Фонио. Ответ выдается в %.

Нормальная кинезиограмма Более 25% категории А Или более 50% категории А + категории В На подвижность сперматозоидов влияет множество факторов, в том числео температура: при температуре тела (около 37°С) скорость движения максимальна, при комнатной температуре она снижается, а при температуре менее 10°С сперматозоиды почти не движутся. Астенозооспермия - подвижность сперматозоидов меньше 25% категории "а" или 50% категории "а+в"; при этом количество и соотношение морфологических форм в норме.

Исследование нативного препарата на наличие клеточных элементов. В сперме эритроциты выглядят точно так же и в других биологических материалах (например в моче). В норме в сперме эритроцитов нет. Появление их в эякуляте называется гемоспермия.

Клетки эпителия В сперме можно встретить клетки плоского и переходного эпителия. В нативном препарате клетки плоского эпителия — бесцветные, крупные круглые или полигональной формы клетки с маленьким круглым ядром. В окрашенном по Романовскому — крупные клетки, диаметром 35 -55 мкм, полигональной формы с гиперхромным ядром 4 -6 мкм, цитоплазма этих клеток окрашена слабо, сероватоголубого или серого цвета.

Клетки эпителия (продолжение). Клетки переходного эпителия попадают в сперму из простатической части уретры, семяизвергающих каналов и простатических ходов. В нативном препарате — это клетки округлой или неправильной округлой формы. Могут содержать 1 -3 ядра. Цитоплазма с признаками грубозернистой, вакуольной или жировой дегенерации. В окрашенном по Романовскому препарате — это клетки округлой или полигональной формы. Цитоплазма окрашена в насыщенные голубые тона. Ядра

Клетки сперматогенеза В нативном препарате это клетки правильной круглой формы, разных размеров (размером с лейкоцит или в 2 -3 раза больше), характеризующиеся плотной гомогенной консистенцией цитоплазмы, на фоне которой иногда просматриваются 1 или несколько круглых ядер. Клетки считают в камере Горяева в тех же полях зрения, что и считали сперматозоиды. Рсчет проводят по формуле С=Nx. S/100 (С -концентрация клеток сперматогенеза, Nколичество подсчитанных клеток сперматогенеза, S-концентрация сперматозоидов в млн/мл. Рультат — в млн/мл.

Подсчет количества лейкоцитов в камере В норме в сперме содержится менее 1 млн лейкоцитов в 1 мл. В нативном препарате — это круглые сероватые, мелкозернистые клетки диаметром 14 -16 мкм (в щелочной среде спермы лейкоциты выглядят несколько крупнее, чем, например, в моче) Сперму разводят в 10 раз реактивом Барбагалло Лейкоциты считают в 100 больших квадратах камеры Горяева. Расчет ведут по формуле L=a х 25000, где а — количество сперматозоидов в 100 больших квадратах.

Трихомонада в сперме

Анализатор качества спермы SQA — II CP Как и многие другие существующие анализаторы определяет несколько параметров в сперме — концентрацию, морфологию, подвижность сперматозоидов. Принцип состоит в фотометрировании тонкого слоя спермы, размещенного в специальном аспирационном капилляре.

Компьютерный анализатор спермы Система состоит из: оптической системы; фазово-контрастной втоматического предметного столика; высокопроизводительного компьютера; алитического программного обеспечения Принцип работы: анализатор IVOS производит множество "мгновенных снимков" за короткое время (напр. 30 снимков за 0. 5 секунды); отслеживает перемещение клеток от снимка к снимку; программное обеспечение позволяет рассчитать концентрацию сперматозоидов в эякуляте, процент подвижных и прогрессивно подвижных клеток, скорости, концентрации, параметры движения и т. д. подогреваемого подвижных