Исследование семенной жидкости И А Новикова Показания

Исследование семенной жидкости И. А. Новикова

Показания к исследованию семенной жидкости Основное показание – диагностика бесплодия (до 40% бесплодных браков зависят от мужчин). Исследование предшествует обследованию женщины. Если при однократном исследовании патологии не выявляют – анализ необходимо повторить. Сперма (эякулят) состоит из сперматозоидов, взвешенных в жидкой фазе. Состав эякулята: Ø 5% - сперматозоиды Ø 60% - содержимое семенных пузырьков Ø 20% - секрет простаты Ø 15% - секреты придатков яичек, семявыносящих протоков, уретральных желез

Получение эякулята Сбор спермы – оптимально в лаборатории при мастурбации, допустимо самостоятельно (срок доставки не позднее 2 -х часов, не подвергая большим колебаниям температуры). Перед сбором спермы необходимо 3 -дневное половое воздержание (более длительное не рекомендуется).

Схема исследования эякулята v. Макроскопическое исследование v. Определение количества сперматозоидов и их подвижности v. Оценка морфологии сперматозоидов v. Оценка биохимических показателей спермы

Макроскопическое исследование эякулята Осмотр – вязкая непрозрачная жидкость (или сгусток) беловатого цвета. Объем эякулята в норме - 3 -5 мл. Увеличение - полиспермия наблюдается редко, не говорит о полноценности эякулята. Уменьшение – олигоспермия – встречается чаще. Количество сперматоизоидов может быть нормальным. Имеет следствием нарушение продвижения сперматозоидов к цервикальному каналу (недостаточно для нейтрализации кислой РН влагалища). Наблюдается у пожилых (снижение функции предстательной железы и семенных пузырьков). Объем менее 1 мл - атрофия яичек или андрогенная недостаточность.

Макроскопическое исследование эякулята (продолжение) Свертывание: Норма – свертывается, через 20 -30 минут разжижается (действие фибриназ секретов простаты). Если через 40 минут эякулят не разжижается - поражение простаты и семенных пузырьков. РН нормального свежего эякулята - 7, 2 -7, 6, при стоянии защелачивается. При РН 6, 0 и менее наблюдается некроспермия.

Определение количества сперматозоидов Количество сперматозоидов определяют в счетной камере после разбавления семенной жидкости специальным раствором (двууглекислый натрий — 5 г; формалин нейтральный — 1 мл; дистиллированная вода — до 100 мл). Подсчет по расположению головок в сетке камеры. Норма: 60 до 150 млн/мл (150 -600 млн/эякулят) - нормозооспермия. Олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже 20 млн/мл

Оценка подвижности сперматозоидов в счетной камере Производится по подсчету процента неподвижных клеток в счетных камерах после разбавления спермы в 20 раз теплым хлоридом натрия. Расчет по формуле – где а – количество неподвижных сперматозоидов, в – общее количество сперматозоидов. Результат выражают в процентах. Норма – не более 10 -20% неподвижных. Увеличение количества мертвых сперматозоидов – некроспермия.

Оценка характера подвижности сперматозоидов Кинезисграмма – процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Каплю спермы поместить на предметное стекло, накрыть покровным, микроскопировать не менее 200 сперматозоидов в нескольких полях. Оценка визуально в баллах.

Оценка характера подвижности сперматозоидов (продолжение) Подвижность сперматозоидов в норме сохраняется 24 часа при комнатной температуре. 3 вида подвижности: • активно подвижные сперматозоиды – быстрое целесообразное поступательное движение с перемещением • сперматозоиды подвижны, но не обладают способностью к поступательному перемещению (маятникообразные движения) • сперматозоиды неподвижны все. Сперма считается патологической, если меньше 60% сперматозоидов имеют поступательное движение в пробах, исследованных не позднее 2 ч от момента сбора. Снижение активно подвижных сперматозоидов астеноспермия.

Определение мертвых и живых сперматозоидов по Блуму Принцип: эозин (или смесь эозина с нигрозином) проходит через мембрану мертвых клеток, окрашивая их, живые не окрашиваются. Приготовление препарата: капля спермы+краситель→ мазок, высушивание, окрашивание, микроскопия (иммерсия). Подсчет не менее 200 клеток. Мертвые – краснофиолетовые, живые – бесцветные. Норма: 90 -95% живых клеток.

Оценка морфологии сперматозоидов Оценивают форму и строение сперматозоидов. Приготовление препарата: каплю свежей спермы на предметное стекло, высушить, фиксировать (этанол+эфир), окрасить по Романовскому, микроскопировать. Подсчет не менее 200 клеток. Норма: аномальных форм (микроголовка, макроголовка, расщепление головки, нет акросомы, аномалии шейки и т. д. ) не более 15%. Тератоспермия – увеличение аномальных форм сперматозоидов.

Клетки сперматогенеза в эякуляте Обнаруживаются при микроскопии окрашенных мазков. Норма: 0, 5 -2%, чаще всего сперматиды, сперматоциты. Увеличение – при форсированном сперматогенезе. Азоспермия – нарушение созревания сперматозоидов – увеличивается содержание молодых форм при отсутствии зрелых. Аспермия – не обнаруживаются ни клетки сперматогенеза, ни сперматозоиды (атрофия гонад, закупорка семявыносящих протоков).

Другие клеточные элементы в эякуляте Лейкоциты – в норме до 5 -6 в поле зрения. Если больше - пиоспермия, сопровождает ряд воспалительных процессов мужских половых органов. Эритроциты - в норме нет, могут появляться при воспалительных процессах, варикозном расширении вен, при опухолях, камнях.

Биохимические показатели спермы - фруктоза Фруктоза – основной углевод, содержащийся в сперме. Определяют колориметрическим методом. Норма – не менее 1, 3 мкмоль/эякулят. Клиническое значение – уменьшение уровня фруктозы в сперме наблюдается при недостаточности тестостерона, нарушениях функции семенных пузырьков.

Биохимические показатели спермы – лимонная кислота Служит показателем функционального состояния предстательной железы, при простатитах значительно снижается. Определение: эякулят центрифугируют для получения плазмы, осаждают белки (ТХУ), определяют содержание лимонной кислоты с помощью тест-системы. Норма: более 52 мкмоль (10 мг)/эякулят.

Биохимические показатели спермы – цинк Является показателем секреторной способности предстательной железы. Определение: эякулят центрифугируют для получения плазмы, разводят дистиллированной водой, определяют содержание цинка с помощью тестсистемы (подготовленные пробы можно сохранять замороженными). Норма: более 2, 4 мкмоль /эякулят

Тесты для выявления антиспермальных антител АТ в семенной плазме чаще Ig. A и Ig. G. Смешанный антиглобулиновый тест На предметное стекло наносят: Ø 1 кп свежей спермы; Ø 1 кп латексных частичек с покрытием Ig. G Ø 1 кп антисыворотки к человеческому Ig. G. Смесь накрывают покровным стеклом, микроскопируют (400 х ). Высчитывают процент сперматозоидов, к которым прикреплены латексные частицы, покрытые Ig. G.

Схема смешанного антиглобулинового теста 1) 2)

Нормальные значения показателей спермы Показатель Нормальные значения Объем р. Н 2 мл и более 7, 2 -7, 8 Концентрация сперматозоидов Более 20 млн/мл Общее кол-во Более 40 млн сперматозоидов в эякуляте Подвижность 50% и более с поступательным движением или 25% и более с быстрым поступательным движением, в течение часа после сбора проб

Нормальные значения показателей спермы (продолжение) Показатель Нормальные значения Морфология Жизнеспособность 50% и более с нормальной морфологией 50% и более живых Лейкоциты Цинк (общий) менее 1 млн/мл 2, 4 мкмоль и более на каждый эякулят Лимонная кислота Фруктоза (общая) 52 мкмоль (10 мг) и более на каждый эякулят 13 мкмоль и более на каждый эякулят Тест-РСА менее 10% с прилипшими к ним частичками

Номенклатура вариантов показателей спермы Название Вариант показателей спермы Нормозооспермия нормальный эякулят Олигозооспермия концентрация сперматозоидов ниже 20 млн/мл Астенозооспермия менее 50% сперматозоидов с поступательным движением или менее 25% с более быстрым линейным поступательным движением Тератозооспермия менее 50% сперматозоидов с нормальной морфологией Олигоастенотератозооспермия наличие нарушений показателей Азооспермия сперматозоиды в эякуляте отсутствуют Аспермия нет эякулята всех трех

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ !!!