Иммунодиагностические методы Подготовила Саргсян А З 57

Иммунодиагностические методы Подготовила : Саргсян А. З 57 группа

Серологические реакции применяются в двух направлениях: 1. Обнаружение с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого 2. Установление родовой, видовой и типовой принадлежности микроба или вируса

Система комплемента — комплекс сложных белков, постоянно присутствующих в крови. Это каскадная система протеолитических ферментов, предназначенная для гуморальной защиты организма от действия чужеродных агентов, она участвует в реализации иммунного ответа организма. Является важным компонентом как врождённого, так и приобретённого иммунитета

Пути активации системы комплемента n. Классический (запускается комплексом антигенантитело в присутствии катионов Ca и Mg обычно на поверхности клетки-мишени ) n. Лектиновый (похож на классический, однако активируется лектинами бактерий, например МСБ, Среактивным белком, фибронектином и т. д. ) n. Альтернативный (запускается ЛПС клеточной стенки бактерий (эндотоксинами), агрегированными ИГ, лекарственными препаратами и т. д. ).

РСК

РСК с сывороткой больного в 1 -й фазе реакции при образовании комплекса антигенантитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2 -й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная).

РСК с сывороткой здорового: 1 -ая фаза: антиген и антитело не соответствуют другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2 -й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная ).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител при помощи иммунных сывороток, меченых флюорохромными красителями. 2 разновидности РИФ: Прямой метод РИФ Непрямой метод РИФ.

Прямой РИФ Непрямой РИФ

Иммуноферментный анализ (ИФА) - реакция иммунодиагностики с использованием иммунореагентов(чащ е антител), конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой, бетагалактозидазой или щелочной фосфатазой).

Радиоиммуноанализ (РИА) Классический радиоиммуноанализ (РИА) основан на принципе конкурентного связывания. АГ, соответствующий искомому АТ, иммобилизован на твердой подложке (в лунках планшета для микротитрования).

Иммуноблоттинг - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА. Последовательность: 1. Разделение антигенов возбудителя с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. 2. Перенос разделённых молекул – блоттинг (от англ, blot пятно) из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявление с помощью ИФА: • Нанесение сыворотки больного на полученные "блоты" антигенов. • Нанесение сыворотки против Ig человека, меченой ферментом. • Выявление образовавшегося на полоске комплекса [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !