Identification and characterization of two novel primate-specific histone

Identification and characterization of two novel primate-specific histone H 3 variants, H 3. X and H 3. Y Sonja M. Wiedemann, 1 Silke N. Mildner, 1 Clemens Bönisch, 1 Lars Israel, 2 Andreas Maiser, 3 Sarah Matheisl, 1 Tobias Straub, 1 Rainer Merkl, 4 Heinrich Leonhardt, 3, 6 Elisabeth Kremmer, 5 Lothar Schermelleh, 3 and Sandra B. Hake 1, 6 1 Adolf-Butenandt-Institute, Department of Molecular Biology, and 2 Protein Analysis Unit, Ludwig Maximilians University of Munich, 80336 Munich, Germany 3 LMU Biocenter, Department of Biology, Ludwig Maximilians University of Munich, 82152 Planegg. Martinsried, Germany 4 Department of Biochemistry II, University Regensburg, 93053 Regensburg, Germany 5 Institute of Molecular Immunology, Helmholtz Center Munich, German Research Center for Environmental Health, 81377 Munich, Germany 6 Center for Integrated Protein Science Munich 5, 81377 Munich, Germany

Варианты Н 3 : H 3. 1, H 3. 2, H 3. 3, H 3. 1 t (t. H 3), CENP-A. Поиск в базе NCBI последовательностей , сходных с H 3. 1 f 2 псевдогена (Н 3. Х и Н 3. Y); (5 p 15. 1) Поиск сходных генов в доступных базах Выравнивание, филогенетический анализ Pan troglodytes H 3. X, H 3. Y Macaca mulatta H 3. X, H 3. Y

H 3. X – 146 aa H 3. Y – 135 aa (89, 7% идентичных амк) Сиквенсы и анализ экспрессии м. РНК гистонов H 3. X и H 3. Y

Внутриклеточная локализация HA-H 3 X и HA-H 3 Y Интерфаза Митоз Трансфецированные He. La Метафазные хромосомы Интерфаза Митоз

Структура и стабильность нуклеосом, содержащих H 3. X и H 3. Y 3 В моделирование Иммунопреципетация FRAP

Детекция эндогенных H 3. X и H 3. Y

Анализ экспрессии H 3. X/Y в U 2 OS методом ИФ (показан процент клеток U 2 OS, позитивных по окрашиванию ИФ) Анализ экспрессии H 3. X/Y в U 2 OS методом q. PCR Анализ экспрессии H 3. X/Y в U 2 OS методом иммуноблота Количество клеток, экспрессирующих H 3. X и H 3. Y, увеличивается при голодании и пролиферативном стрессе

Выделение и идентификация эндогенных вариантов H 3. X и H 3. Y RP-HPLC Иммуноблоттинг

Влияние экспрессии H 3. Y на регуляцию работы генов и клеточный рост • Контроль клеточного цикла • Организация хроматина • Метаболические пути Снижение роста клеток

Экспрессия H 3. X/Y в мозге человека Гиппокамп DG - Зубчатая извилина

Спасибо за внимание