Harmonização Internacional de Protocolos de Validação Buscando um

Harmonização Internacional de Protocolos de Validação Buscando um sistema harmonizado de reconhecimento internacional para Validação de Métodos Microbiológicos Philip Feldsine Bio. Control Systems, Inc. AOAC Liaison Officer to ISO TC 34/SC 9 Por: Luis Henrique da Costa AOAC 62693 1

Harmonização Internacional de Protocolos de Validação n n Iniciado há 9 anos em Amsterdam durante a finalização do Projeto Micro. Val. O grupo de trabalho finaliza a ISO 16140 (Protocolo para Validação de Métodos Alternativos) em 2004. O grupo SC 9 está atualmente revisando a ISO 16140 SC 9 é a Sub-Comissão 9 - Grupo de especialistas em métodos microbiológicos dentro dos comitês ISO. 2

2002 -Sistemas de validação… n n n n n AOACI Peer Verified AOAC-RI Performance Tested AOACI Official Methods ISO 16140 AFNOR - França NORDVAL – Noruega, Suécia, Finlândia EMMAS – Reino Unido NNI – Holanda DIN- Alemanha Cada um tinha seu próprio protocolo e não aceitava os estudos feitos pelo outro. 3

Após 2002 Atualizações… e-CAM AOAC Micro Guidelines n n n ISO 16140 suporte n n AOACI Peer Verified AOAC-RI Performance Tested AOACI Official Methods AFNOR - França NORDVAL – Noruega, Suécia, Finlândia EMMAS – Reino Unido NNI – Holanda DIN- Alemanha 4

e-CAM significa Compilação Eletronica de Métodos Analíticos (electronic Compilation of Analytical Methods) n AOAC classificou as validações em 5 categorias e formatou essas categorias para serem aceitas dentro do sistema ISO 17025 5

As 5 Categorias e-CAM RRM: (Reference/Regulatory Methods) HCV: (Harmonized Collaboratively Validated Methods) MLV: (Multiple-Laboratory Validated Methods) SLV: (Single-Laboratory Validated Methods) RNV: (Research Non-Validated Methods) 6

A categoria: RRM Reference/Regulatory Methods n n n Referência (REF) – métodos de referência ex. : ISO, FDA BAM Regulatória (REG) – específico para uso em laboratórios e agencias regulatórias para situações de emergência. RRM serão usados para: n n Monitoramento de conformidade Estabelecer especificações Disputas judiciais Validar métodos alternativos 7

A categoria: HCV Harmonized Collaboratively Validated Methods Métodos validados através de estudo colaborativo completo atendendo a ISO 16140 ou AOAC Microbiology guidelines n Formato do Estudo Colaborativo: n n Método Qualitativo - mínimo de 10 labs com dados validos. Método Quantitativo – mínimo de 8 labs com dados válidos. 8

A categoria: MLV Multiple-Laboratory Validated Methods Requisitos do estudo n n n Os protocolos devem seguir a ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines exceto para a quantidade mínima de laboratórios participantes. Dados válidos de no mínimo 2 laboratórios, um dos quais deve ser o laboratório que está organizando o estudo. Mínimo 1 alimento para cada método alternativo: n n Métodos Qualitativos, 20 amostras por tipo de alimento Métodos Quantitativos, 5 amostras para cada 3 níveis de inoculação ou 3 lotes de alimentos naturalmente 9 contaminados.

As categorias: SLV Single Laboratory Validated Methods n Métodos validados por um único laboratório atendendo os parâmetros de: n n n ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines Um laboratório conduz um estudo comparativo de métodos seguindo a ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines Não é necessário o estudo colaborativo 10

A categoria: RNV Research Non Validated Methods n n n Método que pode ser útil mas não tenha sido validado seguindo o critério do Single Laboratory Validation(SLV) Não há requisitos mínimos de dados Uma nota irá informar: n “método não revisado ou validado por critérios reconhecidos”. 11

Diferenças entre AOAC e os parametros Europeos antes de 2004 n Exemplo: n AOAC n n n 100 a 200 cepas do microrganismo de estudo e 50 potenciais cross-reactors requere 20 tipos diferentes de alimentos para estudo pré -colaborativo e 6 para o colaborativo ISO/CEN 16140 n n Um painel microrganismos, geralmente aprox. 30 microrganismos e 20 potenciais cross-reactors 5 alimentos para o estudo in-house e mínimo 3 tipos diferentes de amostras de alimentos para estudo colaborativo. 12

Resumo comparativo ATUAL entre AOAC e Europeus. 13

Micro. Val e a ISO 16140 n n n ISO 16140: 2002 Define os procedimentos para validação de métodos microbiológicos alternativos para alimentos e rações animais. Os padrões estão atualmente sob revisão afim de considerar quatro categorias ( Quatro formatos diferentes de validação). 14

Esquema da Harmonização Internacional Foco em métodos microbiológicos Qualitativos e Quantitativos Estão propostas quatro categorias: n. HCV Harmonized Collaborative Validation n. MLV Multi-Laboratory Validation n. SLV Single Laboratory Validation n. IHV In-House Verification 15

As categorias: HCV Harmonized Collaboratively Validated Methods n Validada por estudos colaborativos completos seguindo todos os requisitos: n ISO 16140 n AOAC Micro Guidelines 16

As categorias: HCV Harmonized Collaboratively Validated Methods Métodos validados através de estudo colaborativo completo atendendo a ISO 16140 ou AOAC Microbiology guidelines n Formato do Estudo Colaborativo: n n Método Qualitativo - mínimo de 10 labs com dados validos. Método Quantitativo – mínimo de 8 labs com dados válidos. 17

As categorias: MLV Multiple-Laboratory Validated Methods Requisitos do estudo n n n Os protocolos devem seguir a ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines exceto para a quantidade mínima de laboratórios participantes. Dados válidos de 2 ou mais laboratórios, um dos quais deve ser o laboratório que esta organizando o estudo. Mínimo 1 alimento para cada método alternativo: n n Métodos Qualitativos, 20 amostras por tipo de alimento Métodos Quantitativos, 5 amostras para cada 3 níveis de inoculação ou 3 lotes de alimentos naturalmente 18 contaminados.

As categorias: SLV Single Laboratory Validated Methods n Métodos validados por um único laboratório atendendo os parâmetros de: n n n ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines Um laboratório conduz um estudo comparativo de métodos seguindo a ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines Não é necessário o estudo colaborativo 19

As categorias: IHV Verification of In House Methods O propósito é definir que níveis ou tipos de dados são necessários para a verificação de estudos in-house: - Quantas amostras? Que tipo de amostras? Inoculadas? Como? 20

Um passo prático: Estudo Colaborativo de Salmonella n Europa e Estados Unidos trabalharam juntos usando método de referencia AOAC e ao mesmo tempo o procedimento ISO Salmonella (ISO 6579). n Amostras foram enviadas a vários laboratórios em Europa e Estados Unidos. n USA representados por 6 FDA labs, Bio. Control Lab, Ohio Department of Agriculture e 2 Silliker Lab. 3 Matrizes de alimentos foram preparadas na Europa e enviadas para USA e também distribuídos para laboratórios credenciados em Europa: a) Queijo fresco de França b) Carne de frango da Inglaterra c) Ovo em pó da Holanda 21

Um passo prático: Estudo Colaborativo de Salmonella RESULTADO: EQUIVALENCIA TOTAL DE RESULTADOS 22

Finalizando. n n n É inegável a necessidade do mercado de alimentos em obter resultados mais rápidos das condições microbiológicas de seus produtos antes que os mesmos cheguem ao consumidor final. Os responsáveis por estes resultados microbiológicos buscam métodos alternativos que atendam essa rapidez mas que tenham respaldo de validação confiável. Cuidado com tentativas de “validação” in-house. É ilógico manter sistemas de validação isolados correndo risco de que barreiras políticas/comerciais utilizem esses sistemas camuflando-se como barreiras técnicas. ISO/CEN e AOAC estão movendo-se para harmonizar seus protocolos para validação de métodos alternativos. Sempre haverão diferenças. O estudo com os métodos para Salmonella comprovou que as diferenças entre AOAC-OMA e ISO não interferem nos resultados. Isso estabelece um importante precedente para reciprocidade dos sistemas de validações e respalda o trabalho de harmonização. 23