ГРУППЫ КРОВИ РЕЗУС ФАКТОР Наука определила существование

ГРУППЫ КРОВИ РЕЗУС ФАКТОР

Наука определила существование 2 -х качественно различных агглютиногенов А и В. Они содержатся в различных клетках организма, в том числе и в эритроцитах. Но существуют и антитела - гемагглютинины А и В, которые находятся в сыворотке крови и других жидкостях организма человека. При встрече и взаимодействии одноименных агглютиногенов и агглютининов (А и B) произойдет склеивание эритроцитов. Кровь человека не может содержать в своей сыворотке агглютинины и одноименные агглютиногены эритроцитов. В этом случае агглютинация происходила бы в сосудистой системе самого человека. Наличие или отсутствие того или другого агглютиногена и определяет группу крови человека.

Возможны 4 основные комбинации: • отсутствие обоих агглютиногенов и присутствие обоих агглютининов, серологическая формула Оlb; • наличие агглютиногена А и агглютинина В - Ав; • наличие агглютиногена В и агглютинина l - В 2; • наличие обоих агглютиногенов и отсутствие агглютининов - 4 -я группа по Янскому - АВо. Группы крови принято обозначать по агглютиногену. Таким образом: О(I), А(II), В(III), АВ(IV) гр.

Методика определения групп крови - - По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам; По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ); С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В)

Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение: • • • два комплекта стандартных сывороток I(0), II(А), III(В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV(АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку); флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой; чисто. вымытая сухая тарелка; предметные стекла; стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца; стерильные шарики; спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением и температурой от 15 до 25 °С.

Признаки пригодности сыворотки: • должна быть специфической, то есть содержать строго определенные агглютинины ; • сыворотка должна быть активной и иметь титр 1 : 32 и высокую активность; • сыворотка должна быть светлой и прозрачной; • в сыворотке не должно быть признаков гниения; • сыворотка должна иметь паспортизацию: группу, титр, срок годности, серию, место приготовления. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использованию не пригодны.

Маркировка стандартных сывороток I(0) — бесцветная, на этикетке сыворотки полос нет II(А) — голубая, две полосы синего цвета III(В) — красная, две полосы синего цвета IV(АВ) — желтая, четыре полосы желтого цвета.

Методика определения групп крови 1. Маркируют тарелку, у ячеек обозначают группы крови I(0), II(А), III(В); 2. В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий ; 3. Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле рядом с сывороткой и осторожно перемешивают чистой стеклянной палочкой; 4. Наблюдают в течении 5 мин. , слегка покачивая планшет; 5. После возникновения агглютинации, но не ранее чем через 3 мин. , добавляют по 1 капле(0, 05 мл. ) 0, 9%р-р хлорида натрия и продолжают наблюдение до 5 мин. ; 5. Снимают результат.

Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I(0) группы. 2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь II(А) группы. 3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I(0) и II(А) групп. Исследуемая кровь III(В) группы. 4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит 1 У(АВ) группе. Но, прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе. Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

Ошибки изогемагглютинации. Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов. Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают. Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5 -й минуте признаки агглютинации исчезают. Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении. Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам Суть способа: Определение наличия или отсутствия групповых антигенов, а также групповых антител, что даёт полную изосерологическую характеристику исследуемой крови. Для исследований берут венозную кровь, разделяют её на сыворотку и эритроциты.

1. 2. 3. 4. В ячейки планшета наносят два ряда стандартных сывороток групп 0 (I), А (II), В (III) различных серий рядом каплю исследуемой крови. На нижнюю часть планшета в три ячейки наносят по одной большой капли исследуемой сыворотки (0, 1 мл) рядом – по одной маленькой капле (0, 01 мл) стандартных эритроцитов. Все капли тщательно смешивают и наблюдают при покачивании планшета 5 минут. Оценивают результат.

Схема оценки результатов (перекрёстный способ) Результат реакции со стандартными сыворотками Результат реакции со стандартными эритроцитами О ( I) анти (А + В) О ( I) + + + А (II) анти В + + В (III) анти А АВ (IV) контро ль - - + - - А (II) + + - Группа крови В (III) + О ( I) + А (II) - В (III) - АВ (IV)

Определение групп крови системы АВО моноклональными антителами Принцип метода – выявление антигенов эритроцитов моноклональными реагентами (цоликлоны анти-А и анти-В). 1. Цоликлоны наносят на планшет по одной большой капле под соответствующими надписями 2. Рядом наносят по одной маленькой капле (0, 01 мл) исследуемой крови 3. Перемешивают и наблюдают за реакцией 2, 5 минуты. 4. Оценивают результат.

Схема оценки результатов определения групп крови с помощью цоликлонов Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлоном анти-А анти-В Группа крови - - О ( I) + - А (II) - + В (III) + + АВ (IV)

Методы определения групп крови системы резус Резус-принадлежность больного можно определить, используя специальные сыворотки, содержащие антирезусантитела. Сыворотку получают из крови резус-отрицательных людей, иммунизированных резус-фактором. В настоящее время используются экспрессметод в пробирках без подогрева с универсальным реагентом и экспрессметод на плоскости без подогрева.

Экспресс-метод определения резуспринадлежности стандартным универсальным реагентом в пробирках без подогрева. 1. 2. 3. 4. 5. 6. Исследование проводят в пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой сыворотку антирезус группы АВ (IV) Добавляют одну каплю исследуемой крови (эритроциты) Пробирку встряхивают и поворачивают таким образом, чтобы её содержимое растекалось по стенкам Наблюдают не менее 3 минут Добавляют 2 – 3 мл 0, 9 % раствора хлорида натрия (для исключения не специфической агрегации эритроцитов) Перемешивают путем перевертывания пробирки Взбалтывать запрещено!

Оценка результатов Проводится визуально ü ü Наличие агглютинации указывает на резусположительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость) свидетельствует о резусотрицательной принадлежности. Для проверки активности и специфичности реагентов антирезус следует использовать контрольные резус-положительные и резус -отрицательные эритроциты. В пробирку вносят по 1 капле 0, 9% хлорида натрия и исследуемой крови. Агглютинация должна отсутствовать.

Экспресс-метод определения резуспринадлежности на плоскости без подогрева Проводят на белой пластине со смачиваемой поверхностью. На левом краю делают надпись «сыворотка антирезус» , на правом – «контрольная сыворотка» . 1. Слева помещают 1 – 2 капли реактива антирезус, справа – контрольную сыворотку (такое же количество) 2. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты 3. Кровь смешивают с реактивом стеклянной палочкой и пластинку слегка покачивают 4. Через 3 – 4 минуты добавляют 5 – 6 капель 0, 9 % раствора хлорида натрия (для снятия возможной неспецифической агглютинации) 5. Пластинку слегка покачивают 5 минут 6. Оценивают результат.

Оценка результатов экспресс-метода Результат оценивают визуально по наличию или отсутствию агглютинации ü Наличие хорошо выраженной агглютинации в левой капле указывает на резус-положительную кровь ü Отсутствие агглютинации в левой капле (гомогенная окраска) говорит о резусотрицательной принадлежности Результат считается истинным лишь при отсутствии агглютинации в правой контрольной капле.

Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью Цоликлонов 1. 2. 3. 4. 5. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В, Анти-АВ по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0, 01 -0, 03 мл). Смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции визуально при легком покачивании пластины в течение 3 мин. Учет результата: положительный результат – агглютинация эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. Отрицательный результат – равномерно окрашенная капля, агглютинаты не обнаруживаются.

Определение D-антигена системы резус с помощью Цоликлона анти-D Супер 1. 2. 3. Реакция агглютинации на плоскости. Реакция агглютинации в пробирках. Реакция агглютинации в микроплате.

Реакция агглютинации на плоскости. 1. 2. 3. 4. На пластинку со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0, 1 мл) реагента Поместите рядом маленькую каплю (0, 01 -0, 05 мл) исследуемой крови Смешайте кровь с реагентом Наблюдайте за ходом реакции в течение 3 мин. Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20 -30 сек. , что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

Реакция агглютинации в пробирках. В круглодонную пробирку внесите 1 каплю (около 0, 1 мл) реагента. 2. Добавьте 1 каплю 5% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе. 3. Содержимое пробирки тщательно перемешайте встряхиванием и инкубируйте 30 мин. при комнатной температуре. 4. После инкубации пробирку центрифугируйте при 1500 -2000 об. /мин. в течение 1 мин. 5. Мягко покачайте пробирку, отслоите осадок ото дна. 6. Учет результатов. Отрицательный результат – осадок эритроцитов разбивается, образуя гомогенную суспензию. Положительный результат – в пробирке видны агглютинаты на фоне прозрачной жидкости. 1.

Реакция агглютинации в микроплате. В лунку 96 -ячеечной круглодонной микроплаты внесите 0, 05 мл реагента. 2. Туда же внесите 0, 05 мл 2% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе (эритроциты предварительно дважды отмойте) 3. Инкубация при комнатной температуре 45 -60 мин. 4. Визуально оцените результат реакции по рисунку осадка эритроцитов на дне лунки. Отрицательный результат – осадок эритроцитов собирается в точку. Положительный результат – имеет больший диаметр, располагается неравномерным слоем, имеет неровные или завернутые края. 1.

Контроль специфичности Для контроля специфичности реакции в каждую серию исследуемых эритроцитов необходимо включать стандартные Dположительные и D-отрицательные эритроциты.