ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ 0 И РЕЗУС

ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ 0 И РЕЗУС

Группа крови — это определенное сочетание врожденных антигенных свойств содержащихся в клетках крови, и антител к ним, находящихся в плазме (сыворотке). • Две важнейшие классификации группы крови человека — это система AB 0 и резуссистема.

СИСТЕМА АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ АВО Данная система находится в перечне 29 систем эритроцитов человека. Является основной из всех изученных и возглавляет список групп крови человека. Система АВО была открыта венским биологом Карлом Ландштейнером в 1901 г Основанием для ее открытия послужили наблюдения за возможностью взаимодействия эритроцитов крови и сыворотки между собой, образуя в некоторых случаях конгломераты, склеенные эритроциты в сывороточной среде.

1901 год Ландштейнер впервые опубликовал наблюдения о существовании различий среди эритроцитов человека. Свойство образовывать конгломераты было названо им положительной реакцией агглютинации. По этому признаку Ландштейнер разделил людей на 3 группы: А, В и С. 1906 год Ян Янский, исследуя групповую принадлежность больных, установил наличие 4 группы крови и предложил классификацию I , III, IV.

Составляющие характеристики Антигены крови- А, В, О(Н) являются генетически закрепленным свойством форменных элементов крови, проявляющемся в иммунном ответе и способности взаимодействия со специфичными антителами Антитела системы АВО -это белковые молекулы, представлены анти А и анти В антителами и реагирующие со специфическими им антигенными детерминантами эритроцитов своим активным центром.

ПРАВИЛО ЛАНДШТЕЙНЕРА: Здоровые индивиды имеют в сыворотке АВ 0 антитела к антигенам, отсутствующим на их эритроцитах.

Кровь каждого человека принадлежит к какой-либо из 4 -х групп системы АВО в зависимости от присутствия на эритроцитах антигенов А и В и соответствующих антител анти-А и анти-В в плазме. • в группе 0(I) отсутствуют оба антигена и обнаруживаются антитела против обоих антигенов, анти-А и анти-В антитела. • в группе А(II) - на эритроцитах присутствует только антиген А и анти-В антитела. • в группе В(III) - на эритроцитах присутствует только антиген В и антитела анти-А. • в группе АВ(IV) - на эритроцитах одновременно присутствуют оба антигена - А и В а антитела

НАЛИЧИЕ АНТИГЕНОВ НА ЭРИТРОЦИТАХ И АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ У РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП КРОВИ Антигены на эритроцитах Антитела в сыворотке ГРУППЫ КРОВИ 0 А В АВ нет А В АВ анти-А анти-В нет

Методы определения групп крови АВО Приказ № 2 МЗРФ от 09. 01. 98 г « Об утверждении инструкций по иммуносерологии» определяет алгоритм исследований на данную характеристику крови. Первичное исследование выполняется во время взятия крови «сертифицированным специалистом, имеющим подготовку по данному разделу работы» и фиксируется в сопроводительном направлении. Также образец венозной крови, передается в лабораторию, где исследование повторяется, уточняется резус принадлежность и группа крови.

СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ АВ 0: • по антигенам, содержащихся в исследуемых эритроцитах, в этом случае используют моноклональные антитела; • по антителам , содержащимся в исследуемой сыворотке крови, в этом случае используют стандартные эритроциты групп крови А, В, 0.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВ 0 ПРИ ПОМОЩИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ РЕАГЕНТОВ (цоликлонов) В основе положительного прямого агглютинационого теста лежит реакция антиген/антитело, обусловленная присутствием специфичных компонентов, способных к взаимодействию с антигенами эритроцитов, с оценкой наличия агглютинатов (склеенных эритроцитов антителами). Данное явление возможно, когда эритроциты носители антигена А и стандарт имеет анти А антитела или эритроциты содержащие антиген В и стандарт имеет анти В антитела.

ОСНАЩЕНИЕ: • моноклональные реагенты анти-А, анти-В • • и А+В, так же реагент анти-А 1 для определения подгруппы А и АВ; Изотонический раствор натрия хлорида 0, 9%; пластинки со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания данное исследование выполняется при хорошем освещении стола и температуре воздуха +15°- +25°С.

ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Нанести по 1 большой капле (около 0, 1 мл) каждого реагента на пластинку; Нанести по 1 маленькой капле ( около 0, 03 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом; Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом; Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания. Всегда подписывать рабочий планшет( ФИО, порядок нанесения цоликлонов). Цоликлон анти-А 1 исполизовать в случае определения в ходе реакции А(II) либо АВ(IV) группы крови.

Результаты могут быть выражены в 4 -х различных комбинациях. а) Группа крови О(I) реакция агглютинации отсутствует со всеми образцами сывороток анти АВ, анти А и анти В. На исследуемых эритроцитах нет антигенов А и В

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции с цоликлонами анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-В получен отрицательный результат. На эритроцитах присутствует антиген А в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции с цоликлонами анти-В и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном анти-А получен отрицательный результат. На эритроцитах присутствует антиген В

г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми цоликлонами, исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV). На исследуемых эритроцитах присутствуют оба антигена, А и В.

ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ: РЕЗУЛЬТАТЫ РЕАКЦИИ С РЕАГЕНТАМИ анти-А анти-В Анти-АВ + + + + ГРУППОВАЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ 0 А В АВ

Перекрестный метод определения групп крови АВО Для определения полной серологической формулы крови используется двойная или перекрестная реакция. О группе крови АВО судят по обнаружению на эритроцитах присутствия антигенов А и В и сыворотке испытуемой крови анти А и анти В антител. Для этого необходимы: комплект цоликлонов АВО комплект стандартных эритроцитов АВО

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВ 0 ПРИ ПОМОЩИ СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ Самостоятельного значения метод не имеет и используется в двойной или перекрестной реакции как подтверждающий тест лабораторной диагностики. 1. Нанести по одной маленькой капле (10 мкл) стандартных эритроцитов O(I), A(II), B(III) под соответствующими надписями; 2. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО, соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1: 10; 3. Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю эритроцитов с соответствующим реагентом; 4. Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания. После окончания экспозиции в те капли, где имеется агглютинация, добавить по одной капле раствора натрия хлорида, 0, 9% для исключения неспецифической агглютинации. 5. Данное исследование выполняется при хорошем освещении стола и температуре воздуха +15°- +25°С

Результаты могут быть выражены в 4 -х различных комбинациях. а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О(I), если со стандартными эритроцитами О(I) группы получены отрицательные результаты, а положительные результаты получены в реакции со стандартными эритроцитами A (II) и B(III), что говорит о наличии анти-А и анти-В антител.

б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции со стандартными эритроцитами B(III) получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с стандартными эритроцитами О(I), A(II), что говорит о наличии анти-В антител в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции со стандартными эритроцитами А(II) получены положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартными эритроцитами О (I), В(III), что говорит о наличии в сыворотке анти-А антител.

г) В тех случаях, когда а со всеми стандартными эритроцитами получен отрицательный результат – агглютинации нет, исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV), в исследуемой сыворотке нет анти-А и анти-В антител.

ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИМЕНЕНИИ ПЕРЕКРЕСТНОГО МЕТОДА анти-АВ анти-А СТАНДАРТНЫЕ ЭРИТРОЦИТЫ 0 + + + - - + + - А + + - ГРУППА КРОВИ В + + - 0 (анти-АВ) А (анти-В) В (анти-А) АВ

ЭРИТРОТЕСТ ГРУППОКАРТ служат для проведения экспресс-тестирования групп крови. Основным компонентом набора являются специальные карточки. На рабочей поверхности расположены лунки с нанесенными и высушенными моноклональными антителами ЦОЛИКЛОН Ig. M класса.

Помимо карточки в состав Набора ЭРИТРОТЕСТГРУППОКАРТ входят: q Пипетка для внесения воды в лунки; q Скарификатор; q Палочки для смешивания (5 шт. ); q Инструкция по применению.

В каждую лунку на высушенные ЦОЛИКЛОНЫ добавляется по 1 капле воды.

В каждую лунку добавляется по 1 капле исследуемой крови. Отдельной для каждой лунки палочкой кровь перемешивается с растворенными ЦОЛИКЛОНАМИ.

Сразу после смешивания в части тест-лунок начинается агглютинация эритроцитов. Агглютинация через 30 сек.

Агглютинация через 2 мин 55 сек. В контрольной лунке агглютинации нет. Результат тестирования: Анти-А +, Анти-В +, Анти-АВ +, Анти -D +. Группа крови тестируемого лица: АВ(IV) Rh+.

ОШИБКИ ПРИ ИССДЕДОВАНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ • • • Неправильная маркировка пробирок с кровью, взятой для исследования (перепутывание); Ошибочный порядок нанесения цоликлонов на пластинку, неправильная регистрация результатов исследования; Нарушение техники исследования (неправильное соотношение моноклонального реагента и исследуемых эритроцитов, использование реагентов с истекшим сроком годности; сокращение времени наблюдения за реакцией; нарушение температурного режима окружающей среды). Ошибки, связанные с аномальными свойствами тестируемых эритроцитов, слабые формы антигена А (чаще). Ошибки, связанные с аномальными свойствами исследуемой сыворотки: стандартные эритроциты в присутствии исследуемой сыворотки образуют монетные столбики, что может быть принято за положительный результат. Добавление 1 -2 капель физраствора в пробирку и мягкое покачивание обычно разрушает монетные столбики, но не истинные агглютинаты.

ПРАВИЛА, КОТОРЫЕ НАДО СОБЛЮДАТЬ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ГРУППЫ КРОВИ: использовать для исследования реактивы, в качестве которых нет сомнения; определение групповой принадлежности производить перекрестным методом; применять только стандартные эритроциты, цоликлоны; использовать моноклональный реагент АВ для контроля специфичности реакции агглютинации; кровь для исследования брать до проведения больному гемотрансфузий; кровь для исследования брать до переливания плазмозамещающих растворов ( для исключения ошибок, вызванных склеиванием эритроцитов в монетные столбики); обращать внимание на диагноз.

СИСТЕМА АНТИГЕНОВ РЕЗУС Это одна из наиболее полиморфных антигенных систем эритроцитов человека. В состав ее входит около 50 различных антигенов, которые содержатся только в эритроцитах человека и некоторых видов высших обезьян. Располагаются они на мембране эритроцита и являются ее структурными белками. Данный вид полипептидов несет резус-специфичность, являясь сильными иммуногенами.

Открытию системы послужили наблюдения Ландштейнера и его ученика Винера, что сыворотки морских свинок и кроликов после иммунизации эритроцитами обезьян Macacus Rhesus агглютинируют не только эритроциты макак, но и эритроциты людей. Этот антиген, определяемый у 85% людей белой расы, был назван резус-фактор. Его определение обозначили Rh+, не выявление-Rh-. Антитела соответственно получили название анти-резус. Открытии резус-фактора явилось крупным достижением в развитии иммуносерологии.

В соответствии с приказом № 2 МЗРФ от 09. 01. 98 г « Об утверждении инструкций по иммуносерологии» Среди людей выделяют две группы крови по системе резус: -резус положительная (Rh+) c наличием антигена Д на эритроцитах -резус отрицательная(Rh-) без него на эритроцитах.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУСПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ РАЗНОВИДНОСТЬ АНТИГЕНА D НОРМАЛЬНО ВЫРАЖЕННЫЙ D: • на эритроцитах присутствуют все эпитопы (большинство индивидов) D СЛАБЫЙ: • сниженное количество антигенных детерминант D ВАРИАНТНЫЙ: • количество антигенных детерминант не снижено, но они отличаются

Определение резус–принадлежности при помощи цоликлона анти-D Супер ОСНАЩЕНИЕ: • • моноклональные антитела анти-D супер (Ig. M); смачиваемая пластинка; раствор натрия хлорида 0, 9%; стеклянные или пластмассовые палочки. ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ: 1. 2. 3. 4. Нанести по 1 большой капле (около 0, 1 мл) каждого реагента на пластинку; Нанести по 1 маленькой капле ( около 0, 03 мл) исследуемой крови (эритроцитов) рядом с каждым реагентом; Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом; Покачивать пластинку, результат реакции учитывать через 3 мин после окончания смешивания. Результат трактуется как положительный при наличии агглютинации, как отрицательный при отсутствии агглютинации.

Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов, агглютинаты видны невооруженным глазом в виде крупных агрегатов. Кровь относится к Rh 0(D)+(полож. ) При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается. Кровь Rh 0(D)-(отр. )

Нормативная документация: 1. "Требования к проведению иммуногематологических исследований эритроцитов доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ. Методические указания N 2001/109" (утв. Минздравом РФ 11. 04. 2002) 2. Приказ Министерства Здравоохранения РФ от 9 января 1998 года № 2 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии» 3. Приказ Министерства Здравоохранения РФ от 02 апреля 2013 года № 183 н «Об утверждении правил клинического исследования доноров крови и (или) ее компонентов»

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!