ГОУ ВПО КРАСГМУ ИМ ПРОФ В Ф ВОЙНО-ЯСЕНЕЦСКОГО

ГОУ ВПО «КРАСГМУ ИМ. ПРОФ В. Ф. ВОЙНО-ЯСЕНЕЦСКОГО» ФФМО КАФЕДРА АНАТОМИИ И ГИСТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА ОКРАШИВАНИЕ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ И МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ПО МЕТОДУ ВАН ГИЗОНА. Выполнила студентка 210 группы ФФМО по специальности педиатрия Адымачи Саяна А. Проверила к. м. н, доцент Хапилина Е. А.

ПЛАН 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Актуальность Классификация красителей Пикрофукцин Приготовление красящего состава Способ применения Набор для окраски по методу Ван-Гизон Результат Вывод

ЦЕЛЬ: Окраска соединительной и мышечной тканей гематоксилин-пикрофуксином по методу Ван - Гизона широко используется в гистологической практике как для получения обзорных препаратов, так и для некоторых специальных целей.

АКТУАЛЬНОСТЬ Используют для дифференцированной окраски коллагеновых волокон и мышечной ткани на парафиновых срезах тканей, фиксированных формалином.

Для окраски гистологических срезов используют большое количество разнообразных красителей. Различные структуры клеток неодинаково воспринимают краски, что повышает их светооптическую контрастность. Окрашенные гистологические препараты можно исследовать с помощью микроскопа.

Все красители, которые применяются в гистологической работе разделяют на: 1. Основные или ядерные (гематоксилин, пиронин, кармин); 2. Кислые или цитоплазматические (эозин, пикриновая кислота, кислый фуксин); 3. Нейтральные (метиловый синий); 4. Индифферентные (судан III, шарлах В). Среди кислых красок наибольшее применение имеет эозин - цитоплазма клеток окрашивается в розовый цвет, фуксин и пикриновая кислота красят коллагеновые волокна в розовый цвет.

Окраска по Ван Гизону — метод окраски микропрепаратов в гистологии, предназначенный для изучения структуры соединительной ткани. Красителем служит смесь кислого фуксина и пикринов ой кислоты, причем первый компонент окрашивает коллагеновые волокна в ярко -красный цвет, а второй придает прочим структурам ткани жёлтую окраску. Окраска разработана американским психоневрологом и патологом Айрой Ван Гизоном в 1889 году.

Гистологическая картина некроза трансплантата. Окраска пикрофуксином по Ван-Гизону, увеличение Х 200

Пикрофуксин до настоящего времени остается наиболее часто используемым методом окраски волокнистой соединительной ткани, из применяемых в диагностической гистопатологии. Био. Витрум™пикрофуксин является улучшенным аналогом классического красителя Ван-Гизона. Он позволяет добиться высокого дифференциального контраста окраски миоцитов и мышечных волокон (ярко желтые) по сравнению с интенсивно окрашенными коллагеновыми волокнами (красные). Оптимальную окраску препаратов можно получить, применяя Био. Витрум™-пикрофуксин после Био. Витрум™-железного гематоксилина Вейгерта. Квасцовые гематоксилины (Майера, Эрлиха, Карацци и др. ) перед окраской по Ван. Гизону применять не следует.

Его состав: 1. Вода дистиллированная 2. Фуксин кислый 3. Уксусная ледяная кислота Хранить в плотно закрытой емкости при комнатной температуре, вдали от солнечного света.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КРАСЯЩЕГО СОСТАВА Смешать 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 5 мл 1%-ного раствора кислого фуксина. Краситель ослабевает при длительном хранении, в таком случае добавляют несколько капель свежего кислого фуксина.

Способ применения: • Удалить парафин из срезов в ксилоле и провести срезы через спирты нисходящей крепости до 80 град этанола(возможный вариант обработки: орто-ксилол – 2 порции по 3 -5 минут, 96 град этанол – 3 мин, 90 град этанол – 3 мин, 80 град этанол - 3 мин). • Окрасить срезы в рабочем растворе железного гематоксилина Вейгерта 3 -10 мин (нанести на срезы при помощи пипетки необходимое количество рабочего раствора гематоксилина Вейгерта и оставить препараты на время окраски на ровной горизонтальной поверхности). • Промыть в двух порциях проточной воды 1 -2 минуты. • Окрасить в пикрофуксине по Ван-Гизону 2 -3 мин (окраску можно проводить на предметном стекле, путем нанесения на срезы необходимого количества капель красителя) • Быстро сполоснуть в дистиллированной воде (5 -15 с) • Быстро обезводить в двух порциях 96 град этанола, одной порции абсолютного этанола (или карбол-ксилола), просветлить в двух порциях орто-ксилола. Время пребывания срезов в каждой порции 1 -2 мин. • Заключить в полистирол или другую синтетическую среду.

НАБОР ДЛЯ ОКРАСКИ ПО МЕТОДУВАН-ГИЗОН Состав и описание набора для окраски Ван-Гизон: Реактив 1: Раствор Вейгерта БМП-I. Коричневая прозрачная жидкость со слабым спиртовым запахом. • Реактив 2: Раствор Вейгерта БМПII. Светло-желтая прозрачная жидкость без запаха. • Реактив 3: Дифференцирующий раствор (концентрат 20 х). Белая прозрачная жидкость. • Реактив 4: Пикрофуксин. Ярко-красная прозрачная жидкость. •

РЕЗУЛЬТАТ: ЯДРА - СИНЕ-ЧЕРНЫЕ; КОЛЛАГЕН – КРАСНЫЙ; МЫШЦЫ, ЭРИТРОЦИТЫ, КЕРАТИН – ЖЕЛТЫЕ; АМИЛОИД - ЖЕЛТО-КОРИЧНЕВЫЙ.

Этот метод имеет ряд преимуществ по сравнению с окраской гематоксилин-эозином, так как поразному окрашивает различные ткани. Так, соединительная ткань после окраски пикрофуксином имеет ярко-красный цвет, а все остальные ткани - буровато-желтый или желтозеленый. Метод Ван-Гизона позволяет отдифференцировать гладкомышечные клетки от соединительнотканных в тех случаях, когда их трудно различить на препаратах, окрашенных другими методами. В качестве ядерной окраски применяется железный гематоксилин Вейгерта, дающий черную или буро-черную окраску ядер.

ВЫВОД: 1. Только применении красителя высокого качества можно ожидать четкой и точной реакции. 2. Большое значение имеет также качество дистиллированной воды. 3. Интенсивность окраски коллагеновых волокон зависит от плотности соединительной ткани и зрелости волокон.

Спасибо за внимание!