Государственное учреждение Украинский научно-исследовательский противочумный институт им И

Государственное учреждение «Украинский научно-исследовательский противочумный институт им. И. И. Мечникова» МЗ Украины Лабораторная диагностика вируса Эбола Лаборатория индикации особо опасных биологических патогенных агентов E-mail: virology. lab. aps@gmail. com

Научная классификация • Домен: Вирусы • Семейство: Filoviridae • Порядок: Mononegavirales • Род: Ebolavirus Виды: • Zaire ebolavirus • Sudan ebolavirus • Reston ebolavirus • Tai Forest ebolavirus • Bundibugyo ebolavirus • Род: Marburgvirus • Вид: Lake Victoria marburgvirus • Род: Lloviu (Cuevavirus) Группа по Балтимору V: (-)РНК-вирусы

Характеристика вируса Эбола • Вирионы характеризуются высоким плеоморфизмом (наличие нитевидных , U-подобных форм, в виде кольца или цифры 6) • Размер вириона 80 -100 нм • Длина может достигать 800 -1400 нм • Вирус оболочечный • Геном представлен линейной однонитчатой РНК(-) • Геномный материал, сам по себе, не является инфекционным, поскольку отрицательная вирусная РНК нуждается в РНК-зависимой РНК-полимеразе для того, чтобы синтезировать положительную цепь РНК и начать цикл воспроизведения.

Ebolavirus Изображение вируса Эбола, полученное с помощью электронной микроскопии (получено из Библиотеки изображений публичного здоровья Центра по контролю и профилактике заболеваний, США, 2014 г. )

Плеоморфизм вирусов Эбола

Схема строения вириона филовируса (а), карта генома вируса Марбург (б) и карта генома вируса Эбола (в).

Методы инактивации вируса Эбола • • • • 60ᵒС – 30 - 60 мин. 100ᵒС – 5 мин Автоклавирование - 132ᵒС – 60 мин УФ облучение Гамма излучение р. Н= 3, 0 (разведение крови 1: 100 в 3% уксусной кислоте) - 15 мин Этанол 70 ᵒ Эфир Хлороформ β-пропиолактон Формальдегид 2% Фенол ( с добавлением 0, 5% гидрокарбоната Na (1: 500) Глютаральдегид (0, 25% - 1%)

Химические вещества, инактивирующие вирус Эбола • • • Дезоксихолат натрия Гипохлорид натрия Гуанидинизотиоцианат 25% Trizol – 5 минут 1% «Лизоформин 3000» - 30 -90 мин Хлорсодержащие дезсредства (3% хлорамин Б – 60 мин) 6% Н 2 О 2 + 0, 5 % моющего средства 0, 3 % «Жавель –Клейд» «Бациллол АФ» Допускается использование других дезинфектантов, зарегистрированных в Украине, согласно режима, который регламентирован методическими рекомендациями, утвержденными Главным санитарным врачом Украины.

Начальные этапы лабораторной диагностики Отбор Упаковка Хранение Транспортировка

Правила отбора материала для вирусологического исследования Отбор биологического материала проводят с соблюдением требований Государственных санитарных правил «Безпека роботи з мікроорганізмами І-ІІ груп патогенності» (ДСП 9. 9. 5. 035 -99) • Отбор материала проводит медперсонал лечебного учреждения в которое госпитализирован больной, под контролем специалиста УНИПЧИ. • Защитная одежда – противочумный костюм I типа • Стерильный инструментарий, лабораторная посуда, транспортные среды, растворы антикоагулянтов • Не использовать в качестве антикоагулянта гепарин • Не отбирать образцы в стеклянные пробирки • Не допускать разбрызгивание инфекционного материала • Не допускать пересыхания проб • Маркировать емкости для забора до внесения материала

Материал для исследования Количество емкостей и Температура хранения объем пробы Цельная кровь 2 пробирки: с ЭДТА и без ЭДТА (по 5 мл) Широкогорлый контейнер (1 -2 мл) Слюна Моча Широкогорлый контейнер (10 -25 мл) Мазок из ротоглотки Отбор стерильным тампоном и помещение его в 1 -2 мл транспортной среды Широкогорлый контейнер (1 -1, 5 мл) Контейнер с транспортной средой Грудное молоко Секционный материал (биоптат печени) 180 С - 2 часа 2 -80 С - 12 часов 180 С - 6 часов 2 -80 С - 24 часа -200 С - 1 неделя -700 С - длительно 2 -80 С - 24 часа 2 -80 С - 12 часов 180 С - 6 часов 2 -80 С - 3 суток -200 С - 1 неделя

Хранение и транспортировка проб • Время хранения и транспортировки не более 24 часов при 4 -8°С • Не замораживать пробы • Транспортировать пробы в вертикальном положении • Система тройной упаковки • «Холодовая цепь» • Направления на исследование (ф. 204 -0) • Специально выделенный транспорт • Двое сопровождающих • Акт приема - передачи

Система тройной упаковки

Определение случая болезни, вызванной вирусом Эбола • Подозрительным - считается случай лихорадочного заболевания при отсутствии известных причин лихорадочного состояния и при наличии какого нибудь из эпидемиологических критериев • Вероятным - считается случай при наличии не меньше двух клинических критериев и какого нибудь из эпидемиологических критериев • Подтвержденным - считается какой нибудь подозрительный или вероятный случай, который получил лабораторное подтверждение

Материалы и методы исследования при лабораторной диагностике болезни, вызванной вирусом Эбола (приказ МЗ Украины № 770 от 24. 10. 2014) Материал от больного Материал от трупа Слюна, орофарингальный мазок, моча, грудное молоко Кровь Ткань печени Цельная кровь (с ЭДТА), сыворотка, плазма Детекция вируса: вирионов (ЭМ), РНК (ОТ-ПЦР), антигенов (ИФА, ИХ) Детекция антител к вирусу: Ig. M, Ig. G (ИФА)

Лабораторная диагностика Выявление вируса Эбола на ранних этапах : • Электронная микроскопия (наличие вирионов) • Детекция РНК вируса методом ПЦР-ОТ • Выявление антигенов вируса Эбола (ИФА, ИХ) Выявление антител против вируса Эбола: • Ранних(иммуноглобулина М (Ig. M) - (ИФА, МФА) • Поздних (иммуноглобулина G (Ig. G) - (ИФА, МФА) • Сероконверсия – четырехкратное повышение либо понижение титра антител к вирусу Эбола в парных сыворотках

Ожидаемые результаты специфической диагностики в зависимости от времени исследования

Обнаружение вируса Эбола в различных биологических жидкостях в зависимости от времени

Исследователями Life Science Division (США) – созданы экспериментальные серии иммунохроматографического экспресс-теста e. Zyscreen - который может обнаружить вирус Эбола у человека всего за 15 минут ( Планируется запустить производство на мощностях французской компании VEDALAB)

Специализированные центры ВОЗ для подтверждения лабораторного диагноза - БВВЭ • Национальная микробиологическая лаборатория Агентства по общественному здравоохранению Канады (Виннипег, Канада) • Институт Пастера в Лионе (Лион, Франция) • Международный центр медицинских исследований (Франсвиль, Габон) • Институт тропической медицины им. Бернхарда Нохта (Гамбург, Германия) • Институт медицинских исследований Кении (Найроби, Кения) • Институт Пастера в Дакаре (Дакар, Сенегал) • Национальный институт инфекционных заболеваний (Йоханнесбург, ЮАР) • Исследовательский институт вирусологии Уганды (Энтеббе, Уганда) • Центры по контролю и профилактике заболеваний (Атланта, США)

Профилактика и лечение БВВЭ • • • На сегодняшний день не существует коммерчески доступной лицензированной вакцины, защищающей от лихорадки Эбола Разработка вакцины к вирусу Эбола сопряжена с рядом трудностей. Вопервых, данный вирус является крайне агрессивным. Во-вторых, в его состав входит всего 7 белков и одна нить РНК, что значительно затрудняет выделение какого-либо фрагмента для создания вакцины. Существует несколько перспективных вакцин, эффективность и безопасность которых еще не подтверждена. Данные вакцины находятся на стадии испытания на животных, а две вакцины уже проходят клинические испытания на добровольцах. В качестве специфической противовирусной терапии в период вспышки 2014 года FDA одобрило возможное использование двух противовирусных препаратов к настоящему времени не прошедших клинические испытания на человеке. Препарат «Zmapp» содержит набор из трех человеческих моноклональных антител Ученые в США заявили об успешном тестировании на обезьянах экспериментального препарата TKM-Ebola, разработанного для борьбы с лихорадкой Эбола Больше читайте здесь: http: //zn. ua/WORLD/preparat-protiv-eboly-uspeshno -proshel-ispytanie-173924_. html

Спасибо за внимание!