Генная терапия Заместительная генотерапия — ввод в клетку

Генная терапия Заместительная генотерапия - ввод в клетку неповрежденного гена. Внесенная копия заменит по функциям сохранившийся в геноме больного дефектный ген. Корректирующая генотерапия - замена дефектного гена нормальным в результате рекомбинации. Стадии проверки лекарственного препарата: 1. Доклинические испытания, которые включают многочисленные эксперименты, проводимые in vitro и на лабораторных животных. 2. I фаза клинических испытаний проводится на небольшом числе (6 -10) пациентов и часто имеет целью проверку безопасности препарата. 3. II фаза клинических испытаний проводится на большом числе пациентов и имеет целью проверку эффективности действия препарата. 4. III фаза клинических испытаний проводится с привлечением большого числа пациентов и включает исчерпывающий анализ надежности и эффективности препарата, при этом используется информация, полученная на предыдущих этапах.

Генная терапия ex vivo включает следующие этапы: • Получение клеток от больного. • Исправление генетического эффекта с помощью переноса нужного гена в изолированные клетки. • Отбор и наращивание генетически» исправленных» клетое. • Инфузия или трансплантация этих клеток пациенту Необходимо, чтобы процедура переноса генов, используемая для генной терапии ex vivo, была эффективной, а терапевтический ген стабильно поддерживался и непрерывно экспрессировался. Эти условиям отвечают векторы, полученные на основе мышиных ретровирусов.

Ретровирус дикого типа Геном ретровируса дикого типа - две идентичные одноцепочечные молекулы РНК, каждая из которых состоит из шести участков: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Последовательность 5 -LTR; некодирующей последовательности пси+ ( +), необходимой для упаковки РНК в вирусную частицу; ген, кодирующий структурный белок внутреннего капсида (gag); ген, кодирующий белок, обладающий функциями обратной транскрипции и интегразы (pol); ген, кодирующий белок оболочки (env); 3 -LTR- последовательность; Жизненный цикл ретровируса включает следующие стадии. 1. Инфицирование клетки-мишени. 2. Синтез ДНК-копии генома с помощью собственной обратной транскриптазы. 3. Транспорт вирусной ДНК в ядро. 4. Встраивание вирусной ДНК в один из хромосомных сайтов клетки-хозяина. 5. Транскрипция м. РНК с вирусной ДНК под контролем сильного промотора, локализованного в 5 -LTR. 6. Трансляция белков Gag, Pol, Env в цитоплазме. 7. Образование вирусного капсида и упаковка в него двух РНК-цепей и молекул обратной транскриптазы. 8. Высвобождение вирионов из клетки.

Генная терапия in vivo. Основана на прямом введении клонированных и определенным образом упакованных последовательностей ДНК в специфические ткани больного, то есть предполагает доставку «терапевтического» гена непосредственно в клетки определенной ткани пациента. Вирусные системы доставки генов : • Ретровирусные векторы; • Аденовирусные векторы; • Векторы на основе аденоассоциированных вирусов; • Векторы на основе вируса простого герпеса; Невирусные системы доставки генов: • Прямое введение ДНК-конструкций в клетки-мишени; • Создание липосом; • Использование ДНК-коньюгата

Система доставки терапевтических генов с использованием ДНКконьюгата ТГ Поли-L-лизин Лиганд + ДНКконьюгат рецептор ДНК-коньюгат Эндосома К поли-L-лизину пришивают лиганд, соединющийся с поверхностным клеточным рецептором, и добавляют ДНК, содержащую «терапевтический» ген. В результате образуется конденсированная структура, на поверхности которой располагаются лиганды. ДНК-коньюгат связывается со специфическим клеточным рецептором и обволакивается клеточной мембраной с образованием эндосомы, которая защищает его от лизосом. В эндосоме часть молекул ДНК высвобождается из коньюгата и проникает в ядро клетки, где и происходит экспрессия «терапевтического» гена. ТГ ДНК Ядро