Генная инженерия бактерий Выполнил студент 3 курса: Юнусбаев Арслан Уралович
• Маркерные последовательности • Ориджин репликации • Полилинкер
Классификация плазмид • Коньюгативные плазмиды • R-факторы • Col-факторы • Плазмиды биодеградации
В клетках они могут существовать в 3 формах: • ССС • Форма релаксированного кольца • Линейная форма плазмиды
Общая стратегия молекулярного клонирования • Создание рекомбинатной ДНК • Трансфекция
Выделение п. ДНК 1) рост бактерий и амплификация п. ДНК 2)лизис клеток 3)очистка плазмидной ДНК
Рост бактерий
Лизис культуры • Физические: -Баллистические методы -Экструзия -Чередование заморозки и разморозки -Ультразвук -Температурные шоки • Химические: -Детергентный лизис клеток • Энзиматические • Биологические: -Апоптоз
• ЭДТА разрыхляет наружную мембрану, ингибирует нуклеазы • Лизоцим – разрушает клеточную стенку. • SDS разрушает цитоплазматическую мембрану, денатурирует белки, ингибирует нуклеазы.
Очистка плазмидной ДНК • Отличие геномной и плазмидной ДНК: - Масса и размер - Плазмидная ДНК экстрагируется в виде ковалентно замкнутых кольцевых молекул
Трансдукция Капсид фага вмещает до 50 кб Может вместить до 20 кб Эффективность внедрения 100% Имеет сильные промоторы
Космиды Плазмиды с cos сайтами фага лямда -Способны вместить до 40 кб чужеродной ДНК -Так как в их геном можно вмещать больше генетической информации, то для создания геномной библиотеки потребуется меньше времени
Фазмиды • Искусственные гибридные векторы на основе фага и плазмиды
Искусственные бактериальные хромосомы • Способны вместить до 300 кб чужеродной ДНК • Созданы на основе F плазмид
Скачать презентацию Генная инженерия бактерий Выполнил студент 3 курса Юнусбаев
Генная инженерия бактерий.pptx