Généralités Techniques immunologiques Année 2008 Équipe pédagogique du

Généralités Techniques immunologiques Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 1

Spécificité de la liaison Ac-Ag Utilisée pour : n n Recher et/ou doser des anticorps présents dans le sang : c’est la sérologie. Recher et/ou doser des Année 2008 antigènes. Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 2

Qu’est ce qu’un anticorps (Ac) ? Une glycoprotéine présente dans le plasma (ou le sérum), la lymphe ou autres liquides biologiques ; n synthétisée par des plasmocytes en réponse à la rencontre avec un antigène ; n reconnaissant spécifiquement un antigène. n Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 3

Structure d’un Ac Paratopes Chaînes légères Régions variables Ponts disulfures Région constante Chaînes lourdes Site d’activation du Complément Année 2008 Site de fixation aux phagocytes Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 4

Qu’est ce qu’un antigène (Ag) ? Une molécule : n n capable de stimuler le système immunitaire ; reconnue n n n Année 2008 de façon spécifique par les effecteurs de ce système parmi lesquels se trouvent les Anticorps (Ac). Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 5

Nature des Antigènes n majoritairement de nature protéique ; n parfois glucidiques ou lipidiques. Ag Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 6

Notion d’épitope Région limitée de l’Ag reconnue spécifiquement par les paratopes d’un Ac Ag Epitopes Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 7

Notion de valence Nombre de sites de liaison d’un Ac ou d’un Ag Ag à 1 épitope Valence = 1 Ig G : 2 paratopes Valence = 2 Ig M : 10 paratopes Valence = 10 Année 2008 Ag à 2 épitopes Valence = 2 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 8

Définition du complexe immun Édifice moléculaire formé par l’association d’Ag et d’Ac spécifiques créant des réseaux de grande taille si Ac et Ag sont multivalents et dans les conditions de l’équivalence Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 9

Différents types de réactions sérologiques Types Antigènes Anticorps Révélation Agglutination particulaires agglutinants Réseau d’IC formant des agglutinats Précipitation solubles précipitants Réseau d’IC formant des précipités Neutralisation biologiquement actifs neutralisants Absence d’activité biologique Fixation du complément IC fixant le complément sur le Fc de l’anticorps conjugués par couplage avec un Immunomarquage marqueur : fluorochrome, enzyme ou radioisotope Année 2008 Absence de lyse cellulaire Recherche du marqueur ou de ses effets Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 10

Sérum (Ac) Les étapes des techniques qualitatives Ag Incubation Formation de complexes immuns Lecture directe ou indirecte ØTémoins, Contrôles qualité ØTest Le plus souvent réalisées sur lame ou sur carte Année 2008 Interprétation Présence significative d’Ac ou non Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 11

Dilution en série du sérum Ag Les étapes des techniques quantitatives Incubation Formation de complexes immuns Le plus souvent réalisées en tubes ou en microplaques Lecture directe ou indirecte ØTémoins, Contrôles qualités ØTests Interprétation Titre du sérum en Ac Conclusion par rapport au seuil Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 12

Principe des dilutions en série Volume rejeté (m. L) : 0, 5 Volume reporté (m. L) 0, 5 Volume de diluant (m. L) Volume de sérum (m. L) ou de produit 0, 5 1/2 0, 5 0, 5 0, 5 1 0, 5 Quantité arbitraire d’Ac ou d’Ag par tube Dilution Année 2008 1/4 1/8 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND … 13

Volume rejeté (m. L) : 0, 5 Tube 1 Sérum pur (m. L) 4 5 6 7 0, 5 0, 5 3 0, 5 Diluant (m. L) 2 0, 5 1/16 1/32 1/64 0, 5 Volume reporté (m. L) Dilution initiale Ag (m. L) Dilution finale Année 2008 1 0, 5 1/2 0, 5 1/4 0, 5 1/8 0, 5 1/16 0, 5 1/32 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 1/64 1/128 14

Témoins et contrôles n n Témoins « réactifs » validant les réactifs Témoin « produit » validant la spécificité de la réaction Témoins de lecture donnant une référence Contrôles de qualité validant l’ensemble de la technique Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 15

Témoins et contrôles n Témoins « réactifs » n n n testant l’absence de réaction des réactifs sans le produit à tester appelés témoins de série (à tester une seule fois lors d’une étude en série de plusieurs produits différents). Exemple : n Année 2008 Témoin Ag dans une réaction d’agglutination active Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 16

Témoins et contrôles n Témoin « produit » n n n testant l’absence de réaction parasite (non liée à la réaction étudiée). appelés témoins de réaction (à réaliser pour chaque produit) Exemple : n Année 2008 Témoin sérum dans les réactions d’agglutination passive. Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 17

Témoins et contrôles n Témoins de lecture n n mettant en jeu certains réactifs ou produits participant ou non à la réaction servant de référence de lecture n n Année 2008 Témoin 100 % d’hémolyse Témoin 50 % d’hémolyse Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 18

Témoins et contrôles n Contrôles de qualité n n n Année 2008 utilisant des produits (sérums de contrôle, antigènes) titrés et connus appelés aussi témoins positif et négatif (technique qualitative). permettant de valider l’ensemble de la technique Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 19

Titre n Dilution limite (la plus forte) du produit qui donne encore une réaction visible exprimée en n Année 2008 Rapport de dilution Facteur de dilution En UI par volume de produit pur à l’aide d’une référence titrée Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 20

Seuils n De sensibilité d’une réaction n n D’interprétation n Année 2008 Plus faible concentration de produit détectable par la technique (valeur donnée par le fabricant) Valeur à partir de laquelle la concentration trouvée est significative Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND 21