ГБОУ ВПО Российский Национальный Исследовательский Медицинский Университет им

ГБОУ ВПО Российский Национальный Исследовательский Медицинский Университет им. Н. И. Пирогова Кафедра кожных болезней и косметологии Московского факультета Зав. кафедрой: д. м. н, профессор Н. Н. Потекаев Преподаватель: И. В. Полеско Лабораторная диагностика сифилиса Выполнил: Смирнов А. С. Студент 418 группы Москва, 2011

Лабораторные тесты на сифилис Трепонемные -РПГА (реакция гемаглюттинации) -РИФ иммунофлюоресцеции) Нетрепонемные пассивной (реакция -РИБТ (реакция иммобилизации б. трепонем) -РИП (реакция прилипания) иммунного -Реакция Вассермана -РСК (реакция связывания комплемента) с кардиолипином -Непрямой кардиолипином ИФА -Реакция микропреципитации на стекле -Реакция Вассермана кардиолипином -Иммуноблотинг -Прямой ИФА Реакции с трепонемными антигенами с Реакции с нетрепонемными антигенами с

Характерные движения Темнопольная микроскопия 8 -12 завитков Изгиб в средней части ( «приглаженный утюгом» )

Микроскопия в темном поле: трепонемы светятся при освещении сбоку Чувствительность и специфичность высоки, Однако при предварительном лечении, длительном существовании очага, плохой технике взятия образца результаты могут быть отрицательными, что не исключает диагноза сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Ig Антивидовая сыворотка с флюорохромом

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Высокая чувствительность специфичность и Возможность выявления заболевания уже в первичном серонегативном периоде Метод непригоден для контроля лечения (медленная негативизация)

РИФ: характерное свечение при соединении меченых флюорохромом антител с антигенами клеточной оболочки трепонем

Эритроциты с комплементом Сыворотка больного, смешанная с антигеном

Реакция Вассермана Простота выполнения: необходимо смешать фиксированный на эритроцитах барана комплемент с сывороткой больного и антигеном. Возникнет гемолиз, оцениваемый качественно: от 1+ до 4+ (от сомнительной до резко положительной) Возможность количественной разведенными сыворотками оценки результатов с Недостаточная специфичность (перекрестная реакция с а/генами лепры, туберкулеза, бруцеллеза, малярии; ложноположительная реакция при красной волчанке, онк. заб-ях, пневмонии, беременности, после приема алкоголя)

Иммуноферментный анализ (ИФА) Метод очень близок к РИФ. На специальную планшетку с лунками наносится антиген, затем вводятся антитела (сыворотка больного). После этого проводится инкубация. Когда произошло связывание антител и антигенов, планшетки отмывают от несвязавшихся иммунных компонентов и вводят антиглобулиновые антитела, меченые флюоресцином. При флюоресцентной микроскопии комплексы антиген-антитело светятся. Непрямой ИФА более чувствителен.

Диагностика первичного сифилиса -Наиболее чувствительным методом является темнопольная микроскопия. -Менее чувствительным и более дорогим методом является реакция иммуофлюоресценции -Также аналогичную РИФ чувствительность и специфичность имеет ИФА -В качестве скрининга используется реакция Вассермана, входящая в комлекс серологических реакций (КСР), куда также включены реакция микропреципитации на стекле и реакция пассивной гемагглютинации.

Диагностика вторичного сифилиса Во вторичном периоде становятся положительными большинство серологических тестов, обеспечивающие высокую надежность диагностики вкупе с анамнезом и клиникой. -Более 90% пациентов имеют положительные реакции по КСР, однако при вторичном свежем сифилисе еще невысок процент иммобилизации в РИБТ -Во вторичном рецидивном периоде становится резко положительной и РИБТ (8590%) -По-прежнему положительны РИФ, ИФА

Диагностика третичного сифилиса -Наиболее чувствительным методом в третичном периоде считается реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, или РИТ), она положительна (92100%) В то же время, КСР недостаточно эффективен в диагностике третичного сифилиса, он положителен только в 50 -90% случаев.

Диагностика скрытого сифилиса Обычно для диагностики достаточно КСР, однако необходимо подтверждение РИБТ, поскольку возможны ложноположительные реакции. ИФА и РИФ также могут быть успешно использованы.

Дополнительные методы исследования. ПЦР. Суть метода заключается в многократной амплификации генетического материала исследуемого микроорганизма. ДНК Полимеразная цепная реакция весьма высокоспецифична и чувствительна. Учитывая генетический консерватизм бледной трепонемы, ПЦР представляет прекрасные возможности для диагностики сифилиса, однако, учитывая крайне высокую чувствительность, не исключены ложноположительные результаты. В связи с этим следует пользоваться количественной модификацией метода.

Иммуноблотинг Одним из современных методов диагностики сифилиса является иммуноблотинг (Western blot) для определения Ig. G либо Ig. M. При проведении иммуноблотинга T. pallidum подвергаются электрофорезу в градиенте концентрации додецилсульфата натрия, в результате чего происходит разделение белковых иммунодеерминант на нитроцеллюлозе. Затем производится обработка разделенных "точек" (blots) исследуемой сывороткой и антителами к Ig. G либо Ig. M, меченными ферментами либо радиоактивными веществами. Метод особенно применим к врожденному сифилису, поскольку позволяет отдифференцировать пассивно перешедшие через плаценту Ig. G от непроходящих через нее Ig. M, который и будет являться подтверждением внутриутробного инфицирования.

Аппарат «Аутоблот» Результаты иммуноблотинга

Тест предназначен для иммунохроматографического определения антител к бледной трепонеме. Образец крови на мембране связывается со специальным белком, который, двигаясь по мембране, достигает фиксированного антигена. В случае положительного результата в тестовой зоне появятся две фиолетовые полоски, а на лице – печальное выражение.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!