ГБОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Минздрава России Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ Выполнила: Магасумова Анжела Рамильевна Группа № 209 лечебного факультета Проверила: доцент кафедры, к. м. н. Савочкина Альбина Юрьевна Челябинск, 2013
Люминесцентный метод микроскопии занимает важное место в исследовании микроорганизмов. Люминесце нция (от лат. lumen, род. падеж luminis — свет и -escent — суффикс, означающий слабое действие) — нетепловое свечение вещества, происходящее после поглощения им энергии возбуждения. Люминесцентная микроскопия — оптическое исследование микрообъектов, окрашенных специальными красителями (флюорохромами), испускающими свечение при воздействии ультрафиолетовыми лучами.
Клетки эндотелия лёгочной артерии быка
Поглощая короткие ультрафиолетовые волны, объект излучает более длинные волны видимой части спектра. Вследствие этого разрешающая способность микроскопа повышается. Это дает возможность исследовать более мелкие частицы. Чаще используют красители- флюорохромы: акридин оранжевый, аурамин, корифосфин, флюоресцеин в виде очень слабых водных растворов.
Euglena gracilis, окраска акридиновым оранжевым
При обработке диагностического материала препарата люминесцентными красителями, которые проникают в ее цитоплазму, последующее облучение препарата возбуждающим источником света (определенный спектр ультрафиолетового излучения) вызывает свечение окрашенных клеток микроорганизмов на черном или темно-зеленом фоне. Указанная цветовая маркировка объекта на темном фоне способствует более быстрому распознаванию объекта.
Мембрана ячейки дрожжей
При люминесцентной микроскопии отмечается значительно большая резкость и контрастность микроскопической картины, что повышает комфортность микроскопического исследования, намного легче для глаза исследователя обнаружить флуоресцирующие микроорганизмы. В люминесцентном микроскопе поле зрения большего диаметра, чем в обычном микроскопе, т. е. больше площадь мазка в одном поле зрения, что существенно сокращает время работы.
Для проведения люминесцентной микроскопии используются либо специальные люминесцентные микроскопы, либо приставки к обычным биологическим микроскопам, позволяющие использовать их для наблюдения люминесценции микрообъектов. В люминесцентных микроскопах источник света становится мощнее, линейные поля окуляров увеличиваются, имеется система светофильтров, переход от ручного к автоматическому режиму управления, увеличивается количество устанавливаемых люминесцентных блоков светофильтров.
Микроскоп бинокулярный люминесцентный Микмед -2
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — это метод, с помощью которого можно выявить антитела к известным антигенам. Принцип реакции иммунофлюоресценции (РИФ) основан на визуальном учете специфического взаимодействия флюоресцирующих специфических антител с гомологичным антигеном. Образующийся при этом, комплекс антиген-антитело, меченный флюорохромом, легко обнаружить по характерному свечению в сине-фиолетовых лучах люминесцентного микроскопа.
Применяется в основном для обнаружения возбудителей инфекций мочеполовых путей, таких как хламидии, микоплазмы, трихомонады, гонококки, вирус герпеса и пр. Различают прямую и непрямую РИФ. Материалом для исследования служат мазки. Техника взятия мазков не представляет опасности для здоровья и является безболезненной. Реакцию оценивают с помощью люминисцентного микроскопа. Если тестируемые возбудители присутствуют, то они светятся, как светлячки в объективе микроскопа.
Флуоресцентная микроскопия по сравнению с обычной позволяет: • сочетать цветное изображение и контрастность объектов; • изучать морфологию живых и мертвых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений; • исследовать клеточные микроструктуры, избирательно поглощающие различные флуорохромы; • определять функционально-морфологические изменения клеток.
Спасибо за внимание!!!
Скачать презентацию ГБОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Минздрава России
Люминесцентная микроскопия.ppt