ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж» План 1.

Скачать презентацию ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж»  План 1. Скачать презентацию ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж» План 1.

mayya_tuberkulez-20031.ppt

  • Размер: 9.4 Мб
  • Автор:
  • Количество слайдов: 207

Описание презентации ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж» План 1. по слайдам

ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж» ГАОУ СПО «Казанский медицинский колледж»

План 1.  Возбудители туберкулеза (общая характеристика, морфология,  культивирование, токсинообразование, патогенез, иммунитет, профилактика)План 1. Возбудители туберкулеза (общая характеристика, морфология, культивирование, токсинообразование, патогенез, иммунитет, профилактика) 2. Организация работы бактериологической лаборатории для проведения культуральных исследований 2. 1 Структура лабораторной сети 2. 2 Документация по организации работы бактериологической лаборатории противо туберкулезной службы 2. 3 Устройство лаборатории, выполняющей микробиологические исследования с цел ью диагностики и контроля химиотерапии туберкулеза 2. 3. 1 Помещение бактериологической лаборатории 2. 3. 2 Размещение в лаборатории оборудования и инструментов 2. 3. 3 Оснащение лаборатории 2. 3. 4 Описание основного оборудования микробиологической лаборатории противот уберкулезной службы

2. 4 Обеспечение безопасности работы в бактериологической лаборатории противотуберку лезной службы 2. 4. 12. 4 Обеспечение безопасности работы в бактериологической лаборатории противотуберку лезной службы 2. 4. 1 Пути распространения туберкулезной инфекции 2. 4. 2 Мероприятия, направленные на снижение риска внутрилабораторного за ражения 2. 4. 3 Методы обеззараживания объектов 2. 4. 4 Организация обращения с отходами лабораторий, работающих с возбудителем туберкул еза 2. 4. 5 Основное оборудование и спецодежда, обеспечивающие безопасность 2. 4. 6 Чрезвычайная ситуация в лаборатории 3. Культуральные методы исследования с применением плотных питательных сред 3. 1 Виды диагностического материала для микробиологических исследований при туберк улезе 3. 2 Организация сбора, хранения и транспортировки диагностического материала 3. 3 Прием и регистрация поступившего материала 3. 4 Обработка диагностического материала, деконтаминация и концентрация образцов. 3. 4. 1 Стандартные методы разжижения и деконтаминации

3. 4. 2 Другие методы обработки материала 3. 4. 3 Материалы, не нуждающиеся в3. 4. 2 Другие методы обработки материала 3. 4. 3 Материалы, не нуждающиеся в деконтаминации 3. 4. 4 Внутрилабораторный контроль качества деконтаминации 3. 5 Питательные среды, посев и культивирование 3. 5. 1 Характеристика питательных сред 3. 5. 2 Приготовление питательных сред для культивирования микобактерий 3. 5. 3 Внутрилабораторный контроль качества приготовленных яичных сред 3. 5. 4 Техника посева и инкубации 3. 5. 5 Оценка и учет результатов посева диагностического материала 3. 6 Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса, видовая идентификация микобактерий 3. 6. 1 Предварительная идентификация комплекса M. tuberculosis (родовая идентификация) 3. 6. 2 Дифференциация M. tuberculosis complex от нетуберкулезных микобактерий 3. 6. 3 Видовая идентификация микобактерий туберкулезного комплекса 3. 6. 4 Внутрилабораторный контроль качества предварительной идентификации и определения вида микобактерий

3. 7 Регистрация бактериологических исследований и их результатов Форма 1. Лабораторный журнал регистрации анализов3. 7 Регистрация бактериологических исследований и их результатов Форма 1. Лабораторный журнал регистрации анализов Форма 2. Лабораторный журнал регистрации лекарственной чувствительности выделенных культур Форма 3. Бактериограмма Форма 4. ТБ лабораторная форма. Направление на проведение анализ Форма 5. ТБ лабораторная форма результатов видовой идентификации и лекарственной чувствительности Таблица № 1. Основные характеристики действующих веществ дезинфицирующих средств Приложение. Стандарты мутности

1. Возбудители туберкулеза Общая характеристика  Представители семейства микобактерий Mycobacteriaccae  имеют вид тонких,1. Возбудители туберкулеза Общая характеристика Представители семейства микобактерий Mycobacteriaccae имеют вид тонких, иногда ветвистых палочек. Медленно растут на питательных средах. Микобактерии кислото- щелоче- и спиртоустойчивы, так как имеют в оболочке жировосковые вещества. Патогенными представителями рода микобактерий являются возбудители туберкулеза и лепры.

Существует несколько видов туберкулезных палочек: 1. Человеческий – Mycobacterium tuberculosis 2. Бычий – MycobacteriumСуществует несколько видов туберкулезных палочек: 1. Человеческий – Mycobacterium tuberculosis 2. Бычий – Mycobacterium bovis 3. Птичий — Mycobacterium avium 4. Мышиный — Mycobacterium murium 5. Встречаются микобактерии, вызывающие заболевания у холоднокровных. К ним относится особая группа атипичных микобактерий. 1. Возбудители туберкулеза

Морфология Возбудители туберкулеза были открыты Р. Кохом в  1882 году. Это тонкие палочки.Морфология Возбудители туберкулеза были открыты Р. Кохом в 1882 году. Это тонкие палочки. Они очень полиморфны: встречаются прямые, изогнутые, колбовидные. Бактерии туберкулеза неподвижны, не имеют спор и капсул. Грамположительны. Окрашиваются в красный цвет по методу Циля-Нильсена. 1. Возбудители туберкулеза

Культивирование Возбудители туберкулеза – аэробы. Требовательны к питательным средам и медленно растут. Растут наКультивирование Возбудители туберкулеза – аэробы. Требовательны к питательным средам и медленно растут. Растут на средах Петраньяни, Петрова, Левенштейна – Йенсена. На плотных питательных средах – сухие, морщинистые Колонии кремового цвета с чуть приподнятом центром. В жидких вырастают на 10 -15 день в виде пленки. 1. Возбудители туберкулеза Колонии М. tuberculosis на среде Левенштейна-Иенсена

Токсинообразование  Возбудители туберкулеза образуют эндотоксин – это белковое вещество впервые выделил Р. КохТоксинообразование Возбудители туберкулеза образуют эндотоксин – это белковое вещество впервые выделил Р. Кох и назвал его туберкулином (очищенный белковый дериват туберкулина). Туберкулин обладает свойствами аллергена. Его действие проявляется Только в зараженном организме. Поэтому введение туберкулина используют с диагностической целью, в постановках аллергических проб (Манту). Вирулентные штаммы возбудителей туберкулеза содержат особый липид корд — фактор , который способствует склеиванию микобактерий и росту их в виде кос и тяжей. 1. Возбудители туберкулеза

Патогенез  Источником инфекции является человек, реже  животные. Наиболее частые пути передачи –Патогенез Источником инфекции является человек, реже животные. Наиболее частые пути передачи – воздушно-капельный и воздушно-пылевой; реже пищевой. 1. Возбудители туберкулеза

Заболевание туберкулезом характеризуется многообразием клинических форм. Различают легочную и внелегочные формы: туберкулез желудка иЗаболевание туберкулезом характеризуется многообразием клинических форм. Различают легочную и внелегочные формы: туберкулез желудка и кишечника, почек, мозговых оболочек, костей и др. органов. Каждая из этих Форм может закончиться генерализацией процесса. Первичный очаг возникает в легком. В пораженном органе образуется бугорок — tubercul. После развивается специфическое воспаление в региональных лимфатических узлах. Таким образом формируется туберкулезный комплекс. 1. Возбудители туберкулеза Туберкулез легких

В большинстве случаев первичный очаг имеет доброкачественное течение. Он рассасывается и рубцуется, однако, этотВ большинстве случаев первичный очаг имеет доброкачественное течение. Он рассасывается и рубцуется, однако, этот процесс не заканчивается полным освобождением организма от возбудителя. Бактерии могут сохраняться многие годы, в течении всей жизни. Но при неблагоприятных условиях, особенно при ухудшении социальных факторов, может быть генерализация процесса. 1. Возбудители туберкулеза

Иммунитет  При туберкулезе иммунитет формируется на фоне первичного инфицирования организма микобактериями, которые длительноеИммунитет При туберкулезе иммунитет формируется на фоне первичного инфицирования организма микобактериями, которые длительное время сохраняются в нем. Такой иммунитет называется нестерильным и выражается в устойчивости организма к суперинфекции. Кроме того, длительное нахождение микобактерий в организме связано с трансформацией возбудителя туберкулеза в L — формы. 1. Возбудители туберкулеза

При туберкулезе обнаруживаются антитела,  относящиеся к разным классам иммуноглобулинов.  Антитела выявляются вПри туберкулезе обнаруживаются антитела, относящиеся к разным классам иммуноглобулинов. Антитела выявляются в различных серологических реакциях. Полагают, что антитела к микобактериям туберкулеза являются «свидетелями» иммунитета. В тканях сохранение живых микобактерий обеспечивает повышенную сопротивляемость и иммунную память. Важное значение при формировании иммунитета имеет аллергия, которая позволяет диагностировать эту инфекцию. 1. Возбудители туберкулеза

Профилактика Специфическая – живая вакцина БЦЖ ( BCG ) – бациллы Кальметт-Герен. Штамм БЦЖПрофилактика Специфическая – живая вакцина БЦЖ ( BCG ) – бациллы Кальметт-Герен. Штамм БЦЖ бал селектирован Кальметтом и Гереном путем длительного культивирования туберкулезных бактерий. Выделяли на протяжении 13 лет и выделили штамм со сниженной вирулентностью. В нашей стране вакцинируются все новорожденные на 5 -7 дне жизни. Ревакцинацию с отрицательной туберкулиновой пробы с интервалом 5 -7 лет до 30 лет. Тем самым создается постинфекционный иммунитет. 1. Возбудители туберкулеза

Неспецифическая – ранняя диагностика, изоляция и так далее. 1. Возбудители туберкулеза План Неспецифическая – ранняя диагностика, изоляция и так далее. 1. Возбудители туберкулеза План

2. Организация работы бактериологической лаборатории для проведения культуральных исследований 2. 1 Структура лабораторной сети2. Организация работы бактериологической лаборатории для проведения культуральных исследований 2. 1 Структура лабораторной сети Все лаборатории, участвующие в выявлении, диагностике и контроле химиотерапии туберкулеза микробиологическими методами, объединены в единую лабораторную сеть, которая организована по территориальному принципу и включает в себя клинико-диагностические лаборатории общей лечебной сети и лаборатории противотуберкулезных учреждений.

Первый этап исследований по выявлению больных туберкулезом осуществляется клинико- диагностическими лабораториями общей лечебной сетиПервый этап исследований по выявлению больных туберкулезом осуществляется клинико- диагностическими лабораториями общей лечебной сети (КДЛ ОЛС) и центрами микроскопии. Вышеперечисленные лаборатории образует начальный уровень лабораторной сети Федеральной Программы борьбы с туберкулезом.

Функциями лабораторий начального уровня являются: 1. Регистрация образцов; 2. Приготовление и окраска мазков изФункциями лабораторий начального уровня являются: 1. Регистрация образцов; 2. Приготовление и окраска мазков из нативной мокроты по методу Циля-Нильсена; 3. Микроскопия мазков и оценка результатов; 4. Регистрация результатов; 5. Осуществление внутрилабораторного контроля качества исследований; 6. Соблюдение правил техники безопасности; 7. Сохранение мазков для проведения реанализа.

Бактериологические лаборатории, выполняющие на уровне региона микробиологические исследования с целью диагностики и контроля химиотерапииБактериологические лаборатории, выполняющие на уровне региона микробиологические исследования с целью диагностики и контроля химиотерапии туберкулеза разделяются на: бактериологические лаборатории, осуществляющие только микроскопические исследования и посев диагностического материала; Лаборатории противотуберкулезных учреждений регионального уровня, проводящие весь комплекс микробиологических.

Бактериологические лаборатории первого уровня – это бактериологические лаборатории,  организованные на базе центральных, районныхБактериологические лаборатории первого уровня – это бактериологические лаборатории, организованные на базе центральных, районных и областных больниц или на базе районных противотуберкулезных диспансеров, а также противотуберкулезных больниц.

Функции лабораторий первого уровня: 1. Оценка качества, отбор и регистрация образцов; 2. Проведение предварительнойФункции лабораторий первого уровня: 1. Оценка качества, отбор и регистрация образцов; 2. Проведение предварительной обработки материала; 3. Посев осадка диагностического материала на стандартные среды, инкубация, ежедневный просмотр посевов и оценка результатов посева; 4. Приготовление и окраска мазков из осадка для выявления КУМ (кислотоустойчивых микобактерий); 5. Передача всех выделенных культур микобактерий для дальнейшего исследования в лаборатории второго уровня; 6. Регистрация результатов; 7. Осуществление внутрилабораторного контроля качества и т. д.

Бактериологические лаборатории второго уровня – это центральные бактериологические лаборатории регионов РФ. Бактериологические лаборатории второго уровня – это центральные бактериологические лаборатории регионов РФ.

Функции лабораторий второго уровня: 1. Оценка качества, отбор и регистрация образцов; 2. Проведение предварительнойФункции лабораторий второго уровня: 1. Оценка качества, отбор и регистрация образцов; 2. Проведение предварительной обработки материала; 3. Посев осадка диагностического материала на стандартные среды, инкубация, ежедневный просмотр посевов и оценка результатов посева; 4. Приготовление и окраска мазков из осадка для выявления КУМ (кислотоустойчивых микобактерий) ; 5. Микроскопия мазков; 6. Предварительная идентификация выделенных штаммов; 7. Определение лекарственной чувствительности выделенных в лаборатории к основным и резервным препаратам; 8. Регистрация результатов исследований; 9. Передача выделенных культур нетуберкулезных микобактерий для дальнейших исследований в межрегиональные лаборатории (третьего уровня); 10. Осуществление внутрилабораторного контроля качества исследований и т. п.

Бактериологические лаборатории третьего уровня – это бактериологические лаборатории Федеральных НИИ туберкулеза/фтизиопульмонологии,  курирующие микробиологическиеБактериологические лаборатории третьего уровня – это бактериологические лаборатории Федеральных НИИ туберкулеза/фтизиопульмонологии, курирующие микробиологические исследования для диагностики туберкулеза в федеральных округах.

Функции лабораторий третьего уровня: 1. Видовая идентификация туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий; 2. Экспертные иФункции лабораторий третьего уровня: 1. Видовая идентификация туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий; 2. Экспертные и консультативные лабораторные исследования материала; 3. Сбор и анализ ежегодной информации о работе лабораторий по выявлению туберкулеза; 4. Предоставление экспертных заключений 5. Организация совещаний, конференций для специалистов лабораторий, участвующих в лабораторной диагностике туберкулеза. План

2. 2 Документация по организации работы бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы В лаборатории, проводящей исследования2. 2 Документация по организации работы бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы В лаборатории, проводящей исследования для диагностики туберкулеза, должны быть документы, утвержденные руководством медицинской организации и определяющие качество проведения сертифицируемых процессов. Эти документы должны быть собраны в единый пакет, называющийся «Руководство по обеспечению качества» .

 «Руководство по обеспечению качества»  должно содержать информацию: 1. Реквизиты лаборатории 2. Список «Руководство по обеспечению качества» должно содержать информацию: 1. Реквизиты лаборатории 2. Список проводимы исследований 3. Действующие лицензии 4. Список сотрудников 5. Функциональные обязанности каждого сотрудника 6. Инструкции по проведению всех этапов проведения исследований 7. Инструкции по технике безопасности 8. Инструкции по использованию оборудования лаборатории

2. 3 Устройство лаборатории, выполняющей микробиологические исследования с целью диагностики и контроля химиотерапии туберкулеза2. 3 Устройство лаборатории, выполняющей микробиологические исследования с целью диагностики и контроля химиотерапии туберкулеза 2. 3. 1 Помещение бактериологической лаборатории Лаборатории должны быть оборудованы согласно Федеральным санитарным правилам, нормам и гигиеническим нормативам СП 1. 2. 731 – 99. При организации микробиологических исследований по диагностике и контролю химиотерапии туберкулеза необходимо также руководствоваться требованиям Строительных норм и правил, предъявляемыми к бактериологическим лабораториям (СНи. П 535 – 81) План

В  «заразной» зоне должны быть:  Помещение для приема анализов и их разбораВ «заразной» зоне должны быть: Помещение для приема анализов и их разбора и первичной регистрации помещение для начального этапа обработки поступившего материала деконтаминантами Помещение для проведения посевов, приготовления, окраски мазков Термальная или термостатная комната Помещение для просмотра посевов Помещение для световой микроскопии Помещение для люминесцентной микроскопии Помещение для работы врачей Комната для обеззараживания материала в автоклавах Кладовая для дезсредств Санузел

В  «чистой» зоне :  Моечная Препараторская Стерилизационная Средоварка Автоклавная Ординаторская для врачейВ «чистой» зоне : Моечная Препараторская Стерилизационная Средоварка Автоклавная Ординаторская для врачей Кабинет старшего лаборанта Кабинет заведующего лабораторией Комната для холодильников Складское помещение Санузел Комната для персонала Комната для надевания рабочей одежды Гардероб для верхней одежды

В соответствии с действующим Приказом МЗ РФ № 109,  устройство бактериологической лаборатории поВ соответствии с действующим Приказом МЗ РФ № 109, устройство бактериологической лаборатории по диагностике туберкулеза должно обеспечивать необходимые меры безопасности при работе персонал с возбудителем туберкулеза. Инженерные мероприятия направлены на снижение Концентрации инфекционных аэрозолей в воздухе.

Общая принудительная вентиляция (приточная,  вытяжная, приточно-вытяжная) должна обеспечивать удаление загрязненного воздуха из помещенияОбщая принудительная вентиляция (приточная, вытяжная, приточно-вытяжная) должна обеспечивать удаление загрязненного воздуха из помещения и препятствовать возникновению застойных зон. Локальная вентиляция (локальные вытяжные зонты, колпаки) должна обеспечивать удаление инфицированного воздуха из зоны работы с инфицированным материалом. Обеззараживание воздуха и системы рециркуляции воздуха внутри помещения должны обеспечивать снижение концентрации инфекционного аэрозоля в воздухе и поддержание ее на заданном нормативными документами уровне.

В соответствии с Санитарными правилами СП 1. 2. 731 – 99 «Безопасность работы сВ соответствии с Санитарными правилами СП 1. 2. 731 – 99 «Безопасность работы с микроорганизмами 3 -4 групп патогенности и гельминтами» во вновь строящихся и реконструируемых лабораториях, выполняющих микробиологические исследования по диагностике и контролю химиотерапии туберкулеза, следует предусматривать устройство автономной приточно- вытяжной вентиляции с установкой фильтров тонкой очистки воздуха, выбрасываемого из «заразной» зоны.

В соответствии с методическими указаниями ВОЗ (1998) и Международного Союза борьбы с туберкулезом дляВ соответствии с методическими указаниями ВОЗ (1998) и Международного Союза борьбы с туберкулезом для лабораторных служб в рамках национальных программ борьбы с туберкулезом в бактериологических лабораториях, работающих с возбудителем туберкулеза, рекомендуется предусматривать устройство системы вентиляции с отрицательным давлением в «заразной» зоне. Это позволит предотвратить возможность попадания инфицированного воздуха в «чистую» зону лаборатории. План

2. 3. 2 Размещение в лаборатории оборудования и инструментов Помещение для приема анализов Анализы,2. 3. 2 Размещение в лаборатории оборудования и инструментов Помещение для приема анализов Анализы, поступающие в лабораторию, могут подавать через окно/люк или через дверь в от д ельное помещение, находящееся в «заразной» зоне лаборатории. При этом на входной двери необходимо наличие звонка для вызова сотрудника лаборатории.

Помещение для разбора и первичной регистрации поступившего материала В этой комнате производится разбор анализов.Помещение для разбора и первичной регистрации поступившего материала В этой комнате производится разбор анализов. Лабораторный работник должен достать контейнеры из бикса, осмотреть их, обработать поверхность контейнеров раствором дезинфектанта, а затем обработать бикс. Эти манипуляции выполняются в вытяжном шкафу. Далее сверяются данные на лабораторном направлении. После анализы отправляются в основную зону для дальнейшей работы.

  Помещение для проведения предобработки диагностического материала, проведения посевов,  приготовления и окраски Помещение для проведения предобработки диагностического материала, проведения посевов, приготовления и окраски мазков Это помещение должно быть оборудовано ламинарным шкафом 1 -го класса биологической безопасности, в котором будет производиться заливка деконтаминантом, для проведения обработки материала и центрифуги. В помещении должно иметься все необходимое для приготовления мазков и посева на питательные среды. Также должны находиться вытяжная вентиляция, сухожаровый шкаф для фиксации мазков.

Термальная комната для поддержания стабильной температуры 37°С предназначена для инкубации  посевов Термальная комната для поддержания стабильной температуры 37°С предназначена для инкубации посевов

Помещение для просмотра посевов и описания выросших культур В этом помещени и должен находитьсяПомещение для просмотра посевов и описания выросших культур В этом помещени и должен находиться большой лабораторный стол, имеющий поверхность, легко поддающуюся обработке дезинфектантами

 Помещение для световой микроскопии В помещении устанавливаются световые микроскопы и шкафчики для хранения Помещение для световой микроскопии В помещении устанавливаются световые микроскопы и шкафчики для хранения мазков. Рекомендуется иметь отдельный стол для регистрации результатов анализа. Помещение для люминесцентной микроскопии Проводить микроскопическое исследование препаратов на люминесцентном микроскопе следует в затемненном помещении

Помещение для постановки тестов на ЛЧ МБТ Постановка тестов на лекарственную чувствительность является наиболееПомещение для постановки тестов на ЛЧ МБТ Постановка тестов на лекарственную чувствительность является наиболее опасной с эпидемической точки зрения процедурой в бактериологической лаборатории, проводящей исследования с целью диагностики и контроля химиотерапии туберкулеза. Данное помещение оборудуется ламинарным шкафом 2 -го класса биологической безопасности. В близости от шкафа рекомендуется установить стол для проведения подготовительных операций к постановке теста на ЛЧ МБТ. Также в этой комнате можно установить автоматический анализатор BACTEC MGIT 960.

Помещение для обеззараживания инфицированного материала в «грязных» автоклавах Помещение оборудуется автоклавами, а также вПомещение для обеззараживания инфицированного материала в «грязных» автоклавах Помещение оборудуется автоклавами, а также в нем устанавливают обрабатываемый дезинфектантами стол для грязных биксов, и еще один стол – для простерилизованной посуды. Материал после автоклавирования передают через окно в моечную комнату.

Кладовая в «заразной» зоне Используется для хранения дезинфицирующих средств и уборочного инвентаря для «заразной»Кладовая в «заразной» зоне Используется для хранения дезинфицирующих средств и уборочного инвентаря для «заразной» зоны. Тамбур – шлюз при переходе из «заразной» зоны в «чистую» и наоборот. Санпропускник Халаты, предназначенные для работы в «чистом» блоке, рекомендуется менять не реже 1 раза в н еделю или по необходимости. Халаты, предназначенные для работы в «заразном» блоке, рекомендуется менять ежедневно, по окончании работы с инфицированным материалом

Моечная комната Рекомендуется оборудовать двухсекционными мойками для мытья посуды, столами для посуды, сушильно-стерилизационным шкафом,Моечная комната Рекомендуется оборудовать двухсекционными мойками для мытья посуды, столами для посуды, сушильно-стерилизационным шкафом, шкафом для хранения чистой посуды, электрической плиткой для кипячения посуды, дистиллятор, шкаф для хранения дезсредств и уборочного инвентаря Препараторская для подготовки посуды Рекомендуется оборудовать столами и машинкой для изготовления ватных пробок, шкаф ом для хранения ваты, марли и др. Стерилизационная Данное помещение оборудуют сухожаровыми шкафами для стерилизации посуды, может быть шкаф для хранения простерилизованной посуды. Стерилизационная система STERRAD NX

  Средоварка В средоварке желательно иметь специальный ламинарный шкаф,  предназначенный для приготовления Средоварка В средоварке желательно иметь специальный ламинарный шкаф, предназначенный для приготовления и розлива питательных сред в стерильных условиях; стол, для приготовления питательных сред; весы. Рекомендуется установить аппараты для свертывания питательных сред(АСПС); электрическую плитку, дистиллятор. Чистая автоклавная В автоклавной комнате устанавливают автоклавы и лабораторный стол, также разрешается устанавливать только дистиллятор. Автоматическая система приготовления, стерилизации и разлива питательных сред Profi. Clave План

2. 3. 3 Оснащение лаборатории Оборудование Работы в бактериологической лабораториях ,  манипуляции с2. 3. 3 Оснащение лаборатории Оборудование Работы в бактериологической лабораториях , манипуляции с инфекционным материалом рекомендуется проводить только в промышленно изготовленных и сертифицированных шкафах б иобезопасности. Для обеспечения безопасности персонала в лабораториях могут использоваться только центрифуги с антиаэрозольной защитой. В каждой лаборатории должны быть средства индивидуальной защиты

Лабораторная посуда, инструменты и расходные материалы В микробиологической лаборатории противотуберкулезной службы рекомендуется использовать одноразовуюЛабораторная посуда, инструменты и расходные материалы В микробиологической лаборатории противотуберкулезной службы рекомендуется использовать одноразовую пластиковую посуду. На рисунке в качестве примера показана безопасная посуда и пастеровские пипетки, использованные для деконтаминации образцов.

Используемые лабораторией центрифужные пробирк и должны быть изготовлены из пластика.  Также можно использоватьИспользуемые лабораторией центрифужные пробирк и должны быть изготовлены из пластика. Также можно использовать пробирки, изготовленные из полипропилена, который является стойким и качественным материалом. Рекомендуемый объем пробирок – 50 мл. План

2. 3. 4 Описание основного оборудования микробиологической лаборатории противотуберкулезной службы Биологический шкаф безопасности БШБ2. 3. 4 Описание основного оборудования микробиологической лаборатории противотуберкулезной службы Биологический шкаф безопасности БШБ были специально разработаны для обеспечения комплексной защиты персонала, окружающей среды и материала при проведении микробиологических исследований. БШБ снабжены фильтрами тонкой фильтрации НЕРА, через которые проходит воздух, как поступающий в рабочую з о ну, так и удаляемый из БШБ. Применяемые в лаборатории НЕРА – фильтры удерживают частицы, равны или более 3 мкм, что позволяет уловить все бактерии, споры и вирусы с эффективностью до 99, 97%

  Биологический шкаф безопасности 1–го класса БШБ 1–го класса защищает от инфицирования оператора Биологический шкаф безопасности 1–го класса БШБ 1–го класса защищает от инфицирования оператора и окружающую среду, но не исследуемый материал. В БШБ 1 -го класса нефильтрованный воздух из помещения протягивается через рабочую зону БШБ. Современные БШБ имеют индикаторы, отмечающие создаваемое разряжение и оповещающую систему о недостаточно эффективной вентиляции. НЕРА –фильтры должны быть заменены, как только скорость воздушного потока падает ниже минимального значения. Ламинарный шкаф 1 -го класса биологической безопасности

  Биологический шкаф 2 -го класса БШБ 2 -го класса обеспечивает защиту персонала, Биологический шкаф 2 -го класса БШБ 2 -го класса обеспечивает защиту персонала, окружающей среды и исследуемого материала. Такой шкаф удобен тем, что позволяет при выполнении посевов работать без горелки Бунзена (спиртовки). БШБ 2 -го класса обязательны для использования в тех случаях, когда имеется повышенный риск контаминации материала, например, при постановке тестов на ЛЧ МБТ и при работе с жидкими питательными средами. Ламинарный шкаф 2 -го класса биологической безопасности

Ни один шкаф безопасности не позволяет полностью очистить выбрасываемый воздух от инфекционных аэрозольных частиц,Ни один шкаф безопасности не позволяет полностью очистить выбрасываемый воздух от инфекционных аэрозольных частиц, поэтому встраивание выводящего воздуховода шкафа безопасности в автономную систему вентиляции лаборатории позволяет наиболее полно обеспечить безопасность персонала лаборатории. Установка шкафа безопасности не исключает необходимость создания систем вентиляции в лаборатории!

Правила работы в БШБ При проектировании БШБ учитывается возможность 24 -часовой работы для поддержанияПравила работы в БШБ При проектировании БШБ учитывается возможность 24 -часовой работы для поддержания требуемого воздушного баланса. В случае отключения света или после замены фильтра необходимо дать шкафу проработать 15 минут перед началом работы. Рабочие поверхности протирают дезинфицирующим раствором, а затем промывают стерильной водой Перед началом работы проверьте интенсивность потока воздуха в шкафу безопасности Перед началом работы, после того как внесли руки в БШБ, сделайте небольшую паузу (60 сек). За это время БШБ вытянет весь загрязненный воздух Выполняйте манипуляции на расстоянии 10 см от фронтальной поверхности шкафа

 На рабочую поверхность помещают бумажное полотенце. После работы полотенце сворачивают и автоклавируют Поместите На рабочую поверхность помещают бумажное полотенце. После работы полотенце сворачивают и автоклавируют Поместите все материалы как можно дальше от фронтальной части, а все массивные предметы по одну сторону БШБ Во время работы не выбрасывать материалы, требующие дезинфекции, за пределы БШБ Использовать только горизонтальные лотки для использованных пипеток, содержащие достаточный объем дезраствора Не оставлять пробирки и контейнеры открытыми После окончания работы обработайте рабочие поверхности БШБ 70% спиртом.

  Центрифуга Основные требования:  Наличие ускорения 3000  g   Центрифуга Основные требования: Наличие ускорения 3000 g ( что позволяет добиться осаждения 95% бактериальных клеток) Рефрижераторная (при центрифугировании температура исследуемого образца значительно повышается, и наличие охлаждения препятствует гибели клеток микобактерий и снижению высеваемости Антиаэрозольная (позволяет обеспечить безопасную работу в связи с наличием крышек с зажимами, а также использованием пластиковых центрифужных пробирок) Настольная антиаэрозольная центрифуга с бакет — ротором

Потребностям специализированной бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы наилучшим образом соответствует напольная или настольная центрифуга сПотребностям специализированной бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы наилучшим образом соответствует напольная или настольная центрифуга с охлаждением, с крышкой и угловым или бакет – ротором, снабженным закрывающимися центрифужными стаканами Настольная антиаэрозольная центрифуга с угловым ротором

Для углового ротора предусматривается наличие индивидуальных центрифужных стаканов для каждого из гнезд ротора, отдельноДля углового ротора предусматривается наличие индивидуальных центрифужных стаканов для каждого из гнезд ротора, отдельно для каждой центрифужной пробирки Индивидуальные центрифужные стаканы для каждого из гнезд углового ротора ; подходят для разного типа пробирок.

В бакет - роторе используются центрифужные стаканы, каждый из которых предназначен для размещения вВ бакет — роторе используются центрифужные стаканы, каждый из которых предназначен для размещения в нем нескольких центрифужных пробирок Бакет – ротор и безопасные центрифужные стаканы

Во многих руководствах при описании процедуры центрифугирования приведены скорости вращения ротора в оборотах вВо многих руководствах при описании процедуры центрифугирования приведены скорости вращения ротора в оборотах в минуту. Но эта величина не характеризует интенсивность осаждения ( седиментации) или «относительную силу центрифугирования» (ОСЦ). Для расчета ОСЦ можно использовать следующую формулу: ОСЦ = 1, 12 Rmax (об. /мин: 1000)², где Rmax – это радиус вращения, т. е. расстояние от оси вращения ротора до дна центрифужной пробирки в мм.

   Термостат с температурой 36 -37 °С Инкубацию посевов производят при температуре Термостат с температурой 36 -37 °С Инкубацию посевов производят при температуре 36 -37 °С в течении 10 недель в термостатах или специальной термостатированной комнате. Все оборудование в термостатированной комнате должно быть сделано в пожаробезопасном исполнении, а сама комната отвечать нормам противопожарной безопасности.

  Автоматический свертыватель(АС) При подготовке яичных сред, необходимых для выделения возбудителей туберкулеза, приходится Автоматический свертыватель(АС) При подготовке яичных сред, необходимых для выделения возбудителей туберкулеза, приходится использовать оборудование, позволяющее четко дозировать количество тепла для обеспечения коагуляции белка. АС должен обеспечивать нагревание до температуры 80 -85 °С и поддержание такой температуры в течении 45 минут. Культура микобактерий наяичной среде Левенштейна-Йенсена

  Автоклавы являются устройством с повышенной опасностью. К работе с лабораторными автоклавами допускаются Автоклавы являются устройством с повышенной опасностью. К работе с лабораторными автоклавами допускаются лица, прошедшие специальное обучение и имеющие официальное разрешение на работу с ними. Микобактерии туберкулеза быстрее погибают в условиях высокой температуры и влажности, чем при использовании сухого жара. Автоклав. ВК-75 вертикальный паровой.

Автоклавы типа скороварки (тип 1) Чаще всего применяют автоклавы, в которых осуществляется кипячение водыАвтоклавы типа скороварки (тип 1) Чаще всего применяют автоклавы, в которых осуществляется кипячение воды под давлением. На металлической крышке располагается кран для выпуска воздуха и пара, манометр и предохранительный клапан. Вода на дне сосуда нагревается за счет внешнего источника обогрева, иммерсионного электронагревателя или парового змеевика. Автоклав. ГК-10 -1 -автоклавдля стерилизации водяным насыщенным паром

Автоклавы с замещением воздуха паром (тип 2) Эти автоклавы обычно имеют горизонтальное расположение. КрышкаАвтоклавы с замещением воздуха паром (тип 2) Эти автоклавы обычно имеют горизонтальное расположение. Крышка автоклава должна быть оборудована предохранительным устройством, не допускающим ее открывания при наличии в камере избыточного давления. Автоклав горизонтальной загрузки

   Весы Химические весы предназначены для точного не (менее 0, 0001 г) Весы Химические весы предназначены для точного не (менее 0, 0001 г) определения веса вещества. Весы имеют хрупкий механизм и требуют осторожного обращения. Чем выше точность весов, тем строже требования к их защите от внешних воздействий, особенно в процессе взвешивания. Весы должны проходить ежегодную проверку в уполномоченных органах. Перед началом взвешивания необходимо убедиться в правильности работы весов. Аналитические электронные весы

При взвешивании веществ соблюдайте следующие правила:  Взвешивайте навески с учетом чувствительности весов ПроводитеПри взвешивании веществ соблюдайте следующие правила: Взвешивайте навески с учетом чувствительности весов Проводите взвешивание в специальном контейнере Для каждого вещества используйте отдельный контейнер шпатель для забора веществ. Не допускайте загрязнения реактивов! Оберегайте весы и разновесы от пыли, загрязнений и влаги После работы всегда закрывайте весы чехлом Аналитические электронные весы

Аквадистиллятор предназначен для производства дистиллированной воды (Госфармакопея РФ ФС 42 -2619 -89,  Сан.Аквадистиллятор предназначен для производства дистиллированной воды (Госфармакопея РФ ФС 42 -2619 -89, Сан. Пи. Н 2. 1. 4. 559 -96) путем перегонки водопроводной воды.

Штативы и корзинки В лаборатории необходимо иметь два типа штативов: 1. Горизонтальный – дляШтативы и корзинки В лаборатории необходимо иметь два типа штативов: 1. Горизонтальный – для специальной укладки пробирок непосредственно при засеве материала в пробирки с плотной питательной средой 2. Вертикальный – для длительной инкубации пробирок с материалом или культурами. План

2. 4 Обеспечение безопасности работы в бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы Заболеваемость туберкулезом среди персонала2. 4 Обеспечение безопасности работы в бактериологической лаборатории противотуберкулезной службы Заболеваемость туберкулезом среди персонала лабораторий, работающих с культурой микобактерий туберкулеза, в 3 -5 раз выше, чем у сотрудников лабораторий, не проводящих манипуляций с этой бактериальной культурой. Потенциальная угроза заразиться мультирезистентным штаммом туберкулеза углубляет существующую проблему и выдвигает задачу соблюдения мер безопасности в лаборатории как наиболее важную. План

2. 4. 1 Пути распространения туберкулезной инфекции Аэрозольный механизм передачи происходит при вдыхании аэрозольных2. 4. 1 Пути распространения туберкулезной инфекции Аэрозольный механизм передачи происходит при вдыхании аэрозольных частиц, в результате чего инфекционные частицы проникают в мелкие бронхи и адсорбируются на бронхиальных стенках. Наибольший риск заражения и, соответственно, наиболее строгие меры безопасности и защиты персонала должны приниматься в лабораториях, проводящих исследования культуры возбудителя

Аэрозоль образуется в процессе следующих манипуляций:  При сборе мокроты При открытии плотно закрытыхАэрозоль образуется в процессе следующих манипуляций: При сборе мокроты При открытии плотно закрытых контейнеров с мокротой Добавление растворов для деконтаминации к инфицированному диагностическому материалу Встряхивание жидких материалов Переливание инфицированных жидкостей Работа с бактериологической петлей. Петля с культурой очищается в чашке с песком и 70% спиртом. Затем в пламени спиртовки обугливают остающиеся частицы Работа с пипеткой Центрифугирование

Алиментарное заражение Инфицированный материал может быть проглочен при засасывании инфицированной жидкости пипеткой или занесенАлиментарное заражение Инфицированный материал может быть проглочен при засасывании инфицированной жидкости пипеткой или занесен в рот грязными руками

Контактное заражение Пациенты с туберкулезом все чаще оказываются инфицированы ВИЧ, и диагностические материалы отКонтактное заражение Пациенты с туберкулезом все чаще оказываются инфицированы ВИЧ, и диагностические материалы от них могут быть непосредственным фактором передачи вируса. Следует избегать использования битой посуды. Наиболее опасны стеклянные пастеровские пипетки. Все процедуры с инфицированным материалом следует проводить только в резиновых перчатках. План

2. 4. 2 Мероприятия, направленные на снижение риска внутрилабораторного заражения Административные мероприятия Предотвращают распространение2. 4. 2 Мероприятия, направленные на снижение риска внутрилабораторного заражения Административные мероприятия Предотвращают распространение инфекционных аэрозолей из загрязненных зон в неинфицированные помещения лаборатории и лечебного учреждения в целом. Административные меры включают в себя: Разделение лаборатории на инфицированную зону и неинфицированную Соответствующее назначение помещений лабораторий; соблюдение санитарно-гигиенических мероприятий Образовательную подготовку персонала Соблюдение правил сбора материала Выбор методов, сокращающих время работы с заразным материалом и повышающих безопасность лабораторных манипуляций

  Инженерные мероприятия Направлены на снижение концентрации инфекционных аэрозолей в воздухе – принудительная Инженерные мероприятия Направлены на снижение концентрации инфекционных аэрозолей в воздухе – принудительная вентиляция, использование эффективных устройств обеззараживания воздуха путем фильтрации, облучения и др. По мере возрастания сложности инженерные мероприятия условно можно разделить на следующие группы: Организация принудительной вентиляции воздуха помещений Удаление или инактивация инфекционного аэрозоля, находящегося в воздухе помещений, с использованием технических средств Обеззараживание поверхностей в лаборатории Для противотуберкулезных мероприятий допускается использование только тех УФ — облучателей, на которые имеются документы, подтверждающие их эффективность в отношении микобактерий туберкулеза.

Персональные меры (меры защиты органов дыхания персонала) Эти меры являются обязательными для защиты обслуживающегоПерсональные меры (меры защиты органов дыхания персонала) Эти меры являются обязательными для защиты обслуживающего персонала. К персональной защите относятся: Респираторы – специальные виды масок, которые обладают способностью задерживать аэрозольные частицы размером выше 1 мкм и плотно прилегают к лицу, предотвращая боковое подсасывание воздуха. Рекомендуется одноразовое использование. Лабораторная гигиена Вход в лабораторию должен быть разрешен только сотрудникам Запрещается использование пипеток с помощью рта Руки мыть специальным бактерицидным мылом Все поверхности в лаборатории должны по д вергаться регулярной дезинфекции Обязательное проведение ежедневной влажной уборки помещения Дезинфекция воздуха и поверхностей помещения с помощью инженерных устройств после просушки помещения План

2. 4. 3 Методы обеззараживания объектов Химические методы Дезинфицирующие препараты различаются составом действующих веществ,2. 4. 3 Методы обеззараживания объектов Химические методы Дезинфицирующие препараты различаются составом действующих веществ, механизмом действия на микробную клетку, степенью антимикробной активности и безопасности персонала и назначением. Необходимо руководствоваться следующими критериями для выбора средства: Характеристика подлежащего обеззараживанию объекта как фактора передачи инфекции Характеристика дезинфицирующего средства Характеристика химических соединений представлена в Таблице №

В лаборатории должен храниться как минимум полугодовой запас дезинфицирующих средств из различных химических группВ лаборатории должен храниться как минимум полугодовой запас дезинфицирующих средств из различных химических групп и различного назначения. Во избежание развития устойчивости микобактерий к дезинфицирующим средствам необходима их смена через 3 -6 месяцев применения.

Физические методы Эти методы наиболее надежны и безопасны. Наиболее часто применяют кипячение (в водеФизические методы Эти методы наиболее надежны и безопасны. Наиболее часто применяют кипячение (в воде или 2% растворе натрия двууглекислого), паровой метод. При кипячении обеззараживание проводится в течении 15 -45 минут с момента закипания. Автоклавирование с целью стерилизации инфицированных материалов проводят при температуре 126± 2°С в течении 30 -60 минут в зависимости от вида объекта Паровой автоклав План

2. 4. 4 Организация обращения с отходами лабораторий, работающих с возбудителем туберкулеза 1. Все2. 4. 4 Организация обращения с отходами лабораторий, работающих с возбудителем туберкулеза 1. Все отходы лабораторий противотуберкулезных учреждений относятся к классу В (чрезвычайно опасные отходы ЛПУ) 2. Все отходы лабораторий противотуберкулезных учреждений подлежат дезинфекции в соответствии с действующими нормативными документами 3. Для дезинфекции следует использовать зарегистрированные в установленном порядке и рекомендованные к применению в медицинских учреждениях дезинфицирующие средства 4. При проведении дезинфекции образующихся в лабораториях противотуберкулезных учреждений отходов допускается применение специально выделенных для этих целей автоклавов, а также установок УОМО-01/150. установку применяют в соответствии с Методическими рекомендациями Использование электромагнитного излучения сверхвысокой частоты для обеззараживания инфицированных медицинских отходов» 5. Сбор отходов класса В, а также микробиологические культуры, штаммы, вакцины, осуществляется в герметичную одноразовую упаковку красного цвета. Упаковка должна быть укреплена на специальных стойках-тележках. После заполнения пакета примерно на ¾ из него удаляется воздух, и сотрудник, не снимая пакета со стойки-тележки, осуществляет ее герметизацию

6. Одноразовая упаковка красного цвета с отходами класса В должна иметь надпись «Чрезвычайно опасные6. Одноразовая упаковка красного цвета с отходами класса В должна иметь надпись «Чрезвычайно опасные отходы. Класс В» , а после заполнения и герметизации на ней закрепляется бирка с кодом лаборатории ЛПУ, названием учреждения, датой и фамилией ответственного за сбор отходов 7. Удаление пакетов, заполненных отходами класса В, из мест их образования осуществляется по мере заполнения, но не реже чем раз в смену 8. Транспортными внутрикорпусными тележками отходы отделений класса В доставляются к местам установки (меж) корпусных контейнеров, где отходы отделений корпуса перегружаются в указанные контейнеры, предназначенные для сбора отходов класса В 9. При проведении сбора отходов в соответствии с требованиями статьи 24 Закона РФ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии» не допускается: Пересыпать отходы Класса В из одной емкости в другую Устанавливать одноразовую упаковку для сбора отходов на расстоянии менее одного метра от электронагревательных приборов и менее пяти метров от источников открытого пламени Использовать мягкую упаковку для сбора острого медицинского инструментария Утрамбовывать любые отходы руками Осуществлять сбор отходов без перчаток 10. При обнаружении рассыпания отходов класса В дезинфекция данного места проводиться немедленно 11. Рекомендуемым методом обеззараживания отходов является термический с использованием пиролизных установок (печей) План

2. 4. 5 Основное оборудование и спецодежда, обеспечивающие безопасность Биологический шкаф безопасности В лаборатории,2. 4. 5 Основное оборудование и спецодежда, обеспечивающие безопасность Биологический шкаф безопасности В лаборатории, осуществляющей посев, могут быть использованы 2 типа БШБ (см. раздел 2. 3. 4). Ламинарный шкаф 1 -го класса обеспечивает защиту оператора, но не защищает рабочий материал. Ламинарный шкаф 2 -го класса обеспечивает защиту оператора и диагностического материала или культур микроорганизмов, с которыми проводится работа. Ламинарный шкаф 2 -го класса

   Индивидуальные средства защиты. Защитная одежда При входе в «заразную» зону лаборатории Индивидуальные средства защиты. Защитная одежда При входе в «заразную» зону лаборатории все лица должны одеть специальную одежду: Халат должен закрывать все тело, верхнюю часть грудной клетки, шею, рукава доходить до запястий Перчатки должны закрывать края рукавов халата, защищать порезы на руке от инфицирования Специальные маски, фильтрующие до 95% частиц размером от 1 до 5 мкм, всегда надеваются при работе с инфицированным материалом, когда возможно образование аэрозоля. Защитную одежду, используемую в «чистом» блоке, следует снимать перед выходом из лаборатории, грязную одежду перед отправкой в стирку помещают в закрывающийся контейнер БШБ и индивидуальные средства защиты персонала лаборатории План

2. 4. 6 Чрезвычайная ситуация в лаборатории В основе мероприятий должно лежать понимание того,2. 4. 6 Чрезвычайная ситуация в лаборатории В основе мероприятий должно лежать понимание того, что аварии могут и будут происходить. В связи с этим в каждой лаборатории должен быть разработан план действий для устранения потенциально опасных последствий до возникновения аварии. Никакой инцидент в бактериологической лаборатории нельзя рассматривать как незначительный. Аварии, случающиеся в лаборатории, можно разделить на 2 типа: 1. Образуют ограниченное количество аэрозоля (например, разбивание пробирок с культурой или разлив мокроты) 2. Образуют большие объемы потенциально заразного аэрозоля (например, разбивание пробирки с жидкой культурой или суспензией МБТ).

  Мероприятия по локализации и ликвидации последствий аварий 1. При авариях с ПБА Мероприятия по локализации и ликвидации последствий аварий 1. При авариях с ПБА немедленно прекращают, ставят в известность руководителя лаборатории и принимают следующие меры: Все открытые части тела обрабатывают дезинфицирующим раствором При попадании инфекционного материала на слизистые оболочки их обрабатывают: глаза – 1% раствором борной кислоты или струей воды; в нос закапывают, а рот и горло прополаскивают 0, 05%раствором марганцовокислого калия или 1% раствором борной кислоты 2. При ранении или другом повреждении кожных покровов, перчатки обрабатываются дезраствором, снимаются, из ранки выдавливается кровь, руки обрабатываются 70% спиртом, затем моются водой с мылом, ранка смазывается раствором йода.

3. Проводится обеззараживание места аварии. По окончании работ заразная одежда замачивается в дезрастворе. Все3. Проводится обеззараживание места аварии. По окончании работ заразная одежда замачивается в дезрастворе. Все сотрудники, находившиеся в зоне аварии, должны принять душ 4. При аварии во время работы на центрифуге крышку медленно открывают только через 30 -40 минут. Центрифужные стаканы и разбитое стекло помещают в дезинфицирующий раствор, поверхность крышки, внутренние части центрифуги, ее наружную поверхность дезинфицируют после отключения ее от электросети 5. При аварии с разбрызгиванием ПБА лица, находившиеся в помещении, покидают помещение, обрабатывают открытые части тела и слизистые, замачивают СИЗ в дезрастворе, принимают душ. Мероприятия по ликвидации последствий аварии осуществляют сотрудника лаборатории, одетые в притовочумный халат, косынку, сапоги, перчатки, очки, респиратор 6. О происшедшей аварии и проведенных мероприятиях руководитель лаборатории направляет докладную записку на имя руководителя организации и председателя комиссии по контролю за соблюдением требований биологической безопасности, в которой указывает час и дату происшедшей аварии, ее характер, перечисляет сотрудников, находившиеся на месте аварии, а также принятые меры

7. В лабораториях необходимо иметь:  Аптечку экстренной медицинской     7. В лабораториях необходимо иметь: Аптечку экстренной медицинской помощи. Состав: 70% этиловый спирт, раствор йода, сухие навески марганцовокислого калия, азотнокислого серебра и борной кислоты, стерильная дистиллированная вода, глазные пипетки, ножницы, перевязочные средства, пластырь, запас средств для экстренной профилактики и лечения (антибиотики, сыворотки и др. ) на 2 -4 человека Запас дезинфицирующих средств СИЗ 8. За лицами, находившимися в помещении, где произошла авария, устанавливается медицинское наблюдение на срок инкубационного периода 9. В лаборатории должен быть журнал регистрации аварий.

Примерный план действий в случае аварии 1 -го типа (в дополнение к вышеперечисленному) НакройтеПримерный план действий в случае аварии 1 -го типа (в дополнение к вышеперечисленному) Накройте разлитый материал Смочите покрывало дезинфектантом и нанесите дезинфектант вокруг места розлива Оставьте не менее чем на 2 часа Поместите все в контейнер, проавтоклавируйте Вымойте пол и оборудование с добавлением дезраствора

Примерный план действий при аварии 2 –го типа Покинуть помещение всем, кроме виновника инцидентаПримерный план действий при аварии 2 –го типа Покинуть помещение всем, кроме виновника инцидента Остановить циркуляцию воздуха, закрыть все щели Включить распылитель дезраствора, покинуть комнату и запечатать дверь Дать аппарату израсходовать весь объем дезраствора, оставить комнату не менее чем на 2 часа Надеть все элементы защитной одежды перед возвращением в комнату Залить пролитую культуру дезраствором и оставить на время Поместить осколки пробирок, остатки дезраствора в соответствующий контейнер Вымыть пол, стены и поверхности оборудования

 Примерный план действий при авариях внутри БШБ При небольшом образовании аэрозоля рекомендуется следующий Примерный план действий при авариях внутри БШБ При небольшом образовании аэрозоля рекомендуется следующий план действий: Накройте залитый участок Пропитайте использованный материал дезраствором Покиньте комнату на 2 часа Поместите все разбитые пробирки, тряпки в контейнер Вымойте внутреннюю часть шкафа с дезраствором, а также пол и оборудование, покиньте комнату В случае образования большого объема аэрозоля: БШБ не выключать и не входить в комнату 4 часа Включить аппарат для распыления дезраствора, оставить помещение до оседания аэрозоля Использовать формальдегид План

3. Культуральные методы исследования с применением плотны питательных сред 3. 1 Виды диагностического материала3. Культуральные методы исследования с применением плотны питательных сред 3. 1 Виды диагностического материала для микробиологических исследований при туберкулезе Кратность и сроки обследования больных туберкулезом микробиологическими методами определены приложениях к Приказу МЗ РФ № 109 от 21. 03. 06. Лаборатория противотуберкулезной службы должна быть готова получить любой биологический материал на исследование. Список различных диагностических материалов представлен в таблице №

Все диагностические материалы можно разделить на 2 группы:  Асептически собранный материал, как правило,Все диагностические материалы можно разделить на 2 группы: Асептически собранный материал, как правило, не содержащий другую микрофлору; Материал, содержащий обычную флору, либо собранный в антисептических условия.

   Мокрота Чаще всего для диагностики туберкулеза исследуется мокрота больного. Диагностический материал Мокрота Чаще всего для диагностики туберкулеза исследуется мокрота больного. Диагностический материал при внелегочном туберкулезе Асептически собранные жидкости Биологические жидкости (ликвор, перикардиальная, синовиальная, асцитическая, кровь, костный мозг) должны собираться врачом в асептических условиях в стерильный контейнер. К жидкостям, имеющим склонность к свертыванию, добавляются гепарин или оксалат калия. Материал доставляется в лабораторию немедленно. Асептически собранные ткани помещаются в стерильные контейнеры без добавления консервантов. В случае длительной транспортировки ткани необходимо поместить в стерильный физраствор, обложить сухим льдом.

Заведомо контаминированные материалы Моча собирается в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов.Заведомо контаминированные материалы Моча собирается в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Анализ мочи на микобактерии предусматривает троекратное исследование. В лаборатории мочу центрифугируют при 3000 об/мин, используют метод накопления осадка Менструальная кровь Менструальную кровь следует собирать вакуумным отсосом или колпачком Кафки. Исследуют ее также как кровь или другие материалы с примесью крови. Каловые массы Кал собирают в стерильную посуду. Для посева 1 г кала измельчают в ступке с 3 -5 мл дистиллированной воды, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, центрифугируют и исследуют полученный осадок. Взятие образцов для исследования с целью контроля эффективности химиотерапии должно проводиться в то время, когда концентрация препаратов в организме больного минимальна План

3. 2 Организация сбора, хранения и транспортировки диагностического материала Процедура сбора мокроты Сбор мокроты3. 2 Организация сбора, хранения и транспортировки диагностического материала Процедура сбора мокроты Сбор мокроты должен производиться в специально выделенном хорошо вентилируемом помещении, оснащенном бактерицидными лампами и средствами дезинфекции. Лицам, ответственным за сбор мокроты, необходимо руководствоваться следующими правилами: 1. Объяснить больному причины исследования и необходимость откашливать содержимое глубоких отделов дыхательных путей. Больному необходимо предварительно прополоскать полость кипяченной водой. 2. Медицинский работник должен быть одет в защитную одежду, иметь контейнер для сбора мокроты 3. Стоя позади больного медицинский работник должен наблюдать за сбором мокроты 4. После сбора мокроты, медицинский работник должен оценить количество и качество собранной мокроты. Контейнер закрывают крышкой и помещают в специальный бикс.

Контейнеры для сбора диагностического материала Для сбора диагностического материала должны использоваться специальные контейнеры, Контейнеры для сбора диагностического материала Для сбора диагностического материала должны использоваться специальные контейнеры, которые: Изготовлены из ударостойкого и прозрачного материала Имеют завинчивающиеся крышки с уплотнением Имеют объем 30 -50 мл Имеют широкое отверстие для сбора мокроты. Контейнеры для сбора диагностического материала

Наилучшим вариантом является использование для сбора диагностического материала одноразовых пластиковых прозрачных контейнеров  Наилучшим вариантом является использование для сбора диагностического материала одноразовых пластиковых прозрачных контейнеров объемом 50 -100 мл. материал, из которого изготовлен такой контейнер, должен расплавляться при автоклавировании. В случае повторного использования контейнеров во избежание лабораторного загрязнения диагностического материала лаборатория должна постоянно следить за качеством их обработки. Пластиковый контейнер

Хранение и транспортировка материала Материал сразу после сбора следует отправлять в лабораторию (в теченииХранение и транспортировка материала Материал сразу после сбора следует отправлять в лабораторию (в течении 24 часов). Отправка материала в лабораторию может осуществляться 2 раза в неделю. В этом случае собранный материал должен храниться в холодильнике при температуре 4 -8°С не более 72 часов. При хранении более 72 часов к диагностическому материалу добавляется консервант (срок хранения до 5 суток) Асептический материал должен отправляться в лабораторию немедленно!

Химические консерванты:  Если предполагаемая задержка не  превышает     Химические консерванты: Если предполагаемая задержка не превышает 24 часа, материал смешивают с равным объемом 10% раствора трехзамещенного фосфата натрия Материал смешивают с равным объемом 1% раствора цетил пиридина хлорида в 2%хлориде натрия. Микобактерии туберкулеза останутся жизнеспособны до 1 недели. К материалу добавляют двукратный объем 2 -3% раствора борной кислоты. При их применении материал может сохраняться при комнатной температуре. Однако консерванты токсичны для микобактерий, и их применение может снижать высеваемость микобактерий. Для снижения токсичности консервантов пробы рекомендуется сохранять в холодильнике при температуре от +4 до +8°С. Диагностический материал может быть заморожен.

 Во время транспортировки материал должен охлаждаться и не находиться на солнце.  С Во время транспортировки материал должен охлаждаться и не находиться на солнце. С каждым биксом следует сопроводительный лист, в который из регистрационного журнала медицинского учреждения переносятся данные о пациентах. Сопроводительный лист составляется в 2 экземплярах: один оставляется в лаборатории; другой – с подписью сотрудника, принявшего материал для исследования, возвращается в учреждение, направившее материал в лабораторию. Перед отправкой собранного материала медицинский работник должен проверить: 1. Соответствует ли количество контейнеров с мокротой их количеству, указанному в сопроводительном списке 2. Соответствие номеров 3. Соответствие данных о пациенте 4. Указать дату отправки материала на исследование и ставит свою подпись 5. Вкладывает в конверт сопроводительный список и направления на микроскопическое исследование на каждую пробу материала и прикрепляет конверт к биксу снаружи 6. Закрывает бикс План

3. 3 Прием и регистрация поступившего материала Прием анализов должен проводиться в специально выделенном3. 3 Прием и регистрация поступившего материала Прием анализов должен проводиться в специально выделенном месте с соблюдением следующих требований: Надеть одноразовые перчатки и антиаэрозольный респиратор Произвести внешний осмотр бикса. В случае если обнаруживается загрязнение бикса, проавтоклавировать его или погрузить в дезраствор Провести наружную обработку бикса дезинфектантом Открыть бикс и проверить целостность контейнеров. Битые контейнеры погружают в дезинфектант, кипятят и автоклавируют. Материал из таких образцов не исследуется Извлечь контейнеры из бикса, провести обработку дезинфектантом наружной поверхности контейнеров. Продезинфицировать внутреннюю часть бикса Проверить соответствие номеров в сопроводительном списке и направлениях номерам, обозначенным на контейнера Присвоить каждому образцу лабораторный номер. Пометить соответствующим номером контейнер и внести номер в бланк направления Сныть перчатки и поместить из в контейнер для дезинфекции, вымыть руки с мылом.

 Оценка объема и качества поступающего материала В лаборатории должны быть разработаны и документально Оценка объема и качества поступающего материала В лаборатории должны быть разработаны и документально оформлены правила выбраковки материала, включающие в том числе: Отказ от приема первичных проб без необходимой идентификационной документации и маркировки Поведение в отношении проб неудовлетворительного качества Меры при обнаружении поврежденных или не герметично закрыты контейнеров Удовлетворительное качество материала: Наличие слизистой или слизисто-гнойной мокроты Объем в пределах 3 -5 мл Все полученные первичные пробы должны быть зарегистрированы в лабораторном журнале. В день получения в лабораторию консервированного материала его центрифугируют, отмывают стерильной дистиллированной водой и без дополнительной деконтаминации используют осадок для приготовления мазков и засева на питательные среды План

3. 4 Обработка диагностического материала,  деконтаминация и концентрация образцов Большинство проб загрязнены быстрорастущими3. 4 Обработка диагностического материала, деконтаминация и концентрация образцов Большинство проб загрязнены быстрорастущими бактериями, бурный рост которых на богатых питательных средах мешает развитию микобактерий и затрудняет их выделение. Поэтому перед посевом диагностический материал подвергают специальной обработке, обеспечивающей деконтаминацию, то есть гибель гноеродной и гнилостной микрофлоры. Также, одновременно с деконтаминацией, мокроту и другие сходные материалы подвергают разжижению и гомогенизации. Частота контаминации посевов (количество проростов)в лаборатория, проводящих исследование свежесобранных проб, при культивировании мокроты на плотных яичных средах обычно составляет 2 -5%. Количество проростов менее 2% свидетельствует о чрезмерно жестком режиме деконтаминации, что может привести к гибели значительной части МБТ. План

3. 4. 1 Стандартные методы разжижения и деконтаминации Все реактивы, используемые приготовлении растворов для3. 4. 1 Стандартные методы разжижения и деконтаминации Все реактивы, используемые приготовлении растворов для обработки диагностического материала, должны иметь степень очистки не менее категории «химически чистый» .

Обработка материала 10 раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия Na₃PO₄ хорошо подавляет сопутствующую флору и дажеОбработка материала 10% раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия Na₃PO₄ хорошо подавляет сопутствующую флору и даже при 2 -3 -дневном хранении материала при +4°С не повреждает микобактерии и мало влияет на их способность к росту на питательных средах. Методика обработки 1. Исследуемый материал залить равным объемом 10% Na ² PO 3 , плотно закрыть емкость и поместить ее на 10 минут на встряхиватель 2. Пробирку или флакон с материалом, залитым деконтаминантом, поместить на 18 -20 часов в термостат при 37 °С 3. После пробирку центрифугировать при 3000 g в течении 15 минут 4. Надосадочную жидкость отобрать стерильной пипеткой на 5 -10 мл и перенести ее в емкость с дезраствором, оставив в каждой пробирке 1, 5 мл осадка. Использованную пипетку опустить в дезраствор 5. К осадку добавить несколько капель 6% соляной кислоты или 1% лимонной кислоты до получения нейтральной р. Н 6. Пробирку с осадком поместить в штатив в порядке регистрационных номеров материала 7. Проводят еще одну процедуру отмывки осадка 10 -15 мл дистиллированной водой 8. Супернатант удаляют, а осадок в объеме 0, 8 -1, 0 мл готовят к инокулированию и приготовлению мазка.

Реактивы 1. Трехзамещенный фосфорнокислый натрий    ( Na₃PO₄ ) – ГОСТ 4274Реактивы 1. Трехзамещенный фосфорнокислый натрий ( Na₃PO₄ ) – ГОСТ 4274 -76 2. Кислота соляная (НС l ) концентрированная– ГОСТ 3118 -77 1. Бумага индикаторная универсальная – ТУ 6 -09 -1181 -76 Приготовление растворов 1. 100 г Na 2 PO 3 растворяют в 800 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до 1 л 2. 6 мл концентрированной НС l добавляют к 94 мл дистиллированной воды. НИКОГДА НЕ ДОБАВЛЯТЬ КИСЛОТУ В ВОДУ!

 Методика обработки мочи 1. 50 -70 мл мочи заливают 20 мл Na 2 Методика обработки мочи 1. 50 -70 мл мочи заливают 20 мл Na 2 PO 3 и оставляют на 2 часа при комнатной температуре 2. Через 2 часа сливают надосадочную жидкость в дезраствор, а осадок переносят в центрифужную пробирку 3. Пробирки центрифугируют 15 минут при 3000 g 4. Надосадочную жидкость сливают в дезраствор, а осадок заливают равным объемом Na 2 PO 3 и инкубируют в термостате 18 -20 часов при температуре 37°С 5. Далее производят центрифугирование, как описано выше

Обработка материала 3 серной кислотой Общее время обработки кислотой не должно превышать 20 минут!Обработка материала 3% серной кислотой Общее время обработки кислотой не должно превышать 20 минут! Этот метод рекомендован для обработки мочи, гнойных экссудатов и отделяемого ран, резецированных тканей, органов экспериментальных животных Реактивы 1. Серная кислота ( Na 2 SO 4 ) концентрированная – ГОСТ 4201 -77 2. Едкий натр ( Na ОН) – ГОСТ 4328 -77 Приготовление растворов 1. 3% раствор серной кислоты – к 97 мл дистиллированной воды добавляют 3 мл концентрированной серной кислоты, наслаивая ее по стенкам 2. 4% раствор едкого натра – 40 г Na ОН заливают дистиллированной водой до объема 1 л

Методика обработки 1. Для получения осадка правильно собранный материал (60 -100 мл) используют целикомМетодика обработки 1. Для получения осадка правильно собранный материал (60 -100 мл) используют целиком 2. Из этого материала методом наслоения поэтапным центрифугированием получить осадок. Для этого перенести в 1 -2 центрифужные пробирки приблизительно по 15 -20 мл материала 3. Центрифугировать материал при 3000 g в течении 15 минут 4. Надосадочную жидкость отобрать пипеткой на 5 -10 мл и перенести ее в емкость с дезраствором, оставив в каждой пробирки 0, 8 -1, 2 мл осадка 5. Полученные в разных пробирках осадки одного и того же материала с помощью стерильной пипетки перенести в одну пробирку, плотно закрыть пробкой и встряхнуть 6. Использованную пипетку поместить в дезраствор 7. К полученному осадку добавить равный объем 3% раствора серной кислоты

8. Выдержать полученную смесь 10 минут при комнатной температуре. Не превышать время экспозиции! 9.8. Выдержать полученную смесь 10 минут при комнатной температуре. Не превышать время экспозиции! 9. Центрифугировать смесь при 3000 g в течении 10 минут 10. Стерильной пипеткой на 5 -10 мл отобрать надосадочную жидкость и перенести ее в емкость с дезраствором, оставив приблизительно 0, 8 -1, 2 мл осадка 11. К осадку добавить стерильной пипеткой 15 мл 0, 9% раствора хлористого натрия 12. Центрифугировать смесь при 3000 g в течении 15 минут 13. Стерильной пипеткой на 5 -10 мл отобрать надосадочную жидкость и перенести ее в емкость с дезраствором, оставив приблизительно 0, 8 -1, 2 мл осадка 14. Добавить в пробирку 1 -2 капли 4% едкого натра до получения нейтрального значения р. Н 15. Пробирку с осадком поместить в штатив, расположив ее по порядку регистрационных номеров материала

Обработка материала 4 раствором едкого натра (модифицированный метод Петрова) Общее время обработки материала щелочьюОбработка материала 4% раствором едкого натра (модифицированный метод Петрова) Общее время обработки материала щелочью не должно превышать 40 минут! Реактивы 1. Едкий натр ( Na ОН) – ГОСТ 4328 -77 2. Кислота соляная (НС l ) концентрированная – ГОСТ 3118 -77 Приготовление растворов 1. 4% раствор едкого натра — 40 г Na ОН заливают дистиллированной водой до объема 1 л 2. 10% раствор соляной кислоты – 10 мл концентрированной соляной кислоты добавляют к 910 мл дистиллированной воды Растворы стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере в течение 20 минут

   Методика обработки 1. Исследуемый материал залить двойным объемом 4 раствора едкого Методика обработки 1. Исследуемый материал залить двойным объемом 4% раствора едкого натра и поместить на 10 минут на встряхиватель 2. Выдержать полученную смесь 15 минут при комнатной температуре с периодическим встряхиванием 3. Стерильной пипеткой объемом 5 -10 мл перенести обработанный материал в пробирки 4. Центрифугировать материал при 3000 g в течении 15 минут 5. Стерильной пипеткой объемом 5 -10 мл перенести надосадочную жидкость в емкость с дезраствором, оставив приблизительно 0, 8 -1, 2 мл осадка 6. К осадку добавить стерильной пипеткой 15 мл стерильного 0, 9% раствора хлористого натрия План

1. Центрифугировать материал при 3000 g в течении 15 минут 2. Стерильной пипеткой объемом1. Центрифугировать материал при 3000 g в течении 15 минут 2. Стерильной пипеткой объемом 5 -10 мл перенести надосадочную жидкость в емкость с дезраствором, оставив приблизительно 1, 2 -1, 5 мл осадка 3. К осадку добавить 1 -2 капли 10% раствора соляной кислоты до получения нейтрального значения р. Н 4. Закрыть пробирки и встряхнуть ее содержимое 5. Пробирки с осадком поместить в штатив, расположив ее по порядку регистрационных номеров материала

3. 4. 2 Другие методы обработки материала Метод с использованием N- ацетил- L -цистеина3. 4. 2 Другие методы обработки материала Метод с использованием N- ацетил- L -цистеина и гидроокиси натрия ( N А L С – N а. ОН) Применение муколитического препарата N А L С, используемого для быстрого разжижения мокроты, позволяет ускорить процесс деконтаминации и снизить концентрацию деконтаминирующего вещества ( N а. ОН) до 1%. N А L С быстро теряет свою активность в растворенном виде, поэтому его раствор должен готовиться ежедневно и употребляться свежим. Методика применения данного препарата приводится в прилагаемой к нему инструкции.

Приготовление реагентов для обработки клинических образцов 1. Для получения деконтаминирующего раствора, содержащего 2 NПриготовление реагентов для обработки клинических образцов 1. Для получения деконтаминирующего раствора, содержащего 2% N а. ОН (с цитратом натрия), необходимо слить равные объемы 4% раствора N а. ОН и 2, 9% раствора цитрата натрия. Растворы стерилизуются и хранятся в стерильной закрытой посуде. 2. Для получения фосфатного буфера (р. Н=6, 8) готовят 2 раствора: 1. 9, 47 г безводного Na₂HPO₄ растворяют в 1 л дистиллированной воды 2. 9, 07 г KH₂PO₄ растворяют в 1 л дистиллированной воды Оба приготовленные растворы смешивают в равном количестве и проверяют уровень р. Н. Раствор (1) повышает значение р. Н, раствор (2) понижает

Обработку материала следует проводить в ламинарном шкафу по следующей схеме:  К образцу вОбработку материала следует проводить в ламинарном шкафу по следующей схеме: К образцу в центрифужной пробирке добавить равный объем N А L С – N а. ОН Плотно закрыв крышку, аккуратно смешать содержимое встряхиванием, достигнув полного разжижения Оставить образец на 15 минут при комнатной температуре для деконтаминации Добавить в пробирку стерильный фосфатный буфер до отметки 50 мл; плотно закрыть крышку и перемешать содержимое пробирки встряхиванием Центрифугировать образец в течении 15 -20 минут при зооо g в антиаэрозольной центрифуге для осаждения 95% имеющихся в материале микобактерий Удалить надосадочную жидкость в емкость с дезраствором с помощью стерильной пипетки, затем закрыть пробирку Добавить к осадку 0, 5 -2, 0 мл новой порции стерильного фосфатного буфера, затем ресуспендировать осадок и использовать его для инокуляции

Метод с использованием 5 щавелевой кислоты или 4 серной кислоты Этот метод дает хорошиеМетод с использованием 5% щавелевой кислоты или 4% серной кислоты Этот метод дает хорошие результаты в тех случаях, когда пробы мокроты оказываются массивно загрязненными Pseudo m onas s р. И другими грамотрицательными микроорганизмами Процедура обработки соответствует обработке 3% раствором серной кислоты. План

3. 4. 3 Материалы, не нуждающиеся в деконтаминации Следующие биологические жидкости и ткани не3. 4. 3 Материалы, не нуждающиеся в деконтаминации Следующие биологические жидкости и ткани не нуждаются в деконтаминации, если они были взяты в стерильные флаконы с соблюдением правил асептики: Спиномозговая, синовиальная и другие жидкости из закрытых полостей Костный мозг Гной из «холодных» абсцессов Резецированные ткани за исключением материала аутопсии) Пунктаты печени и лимфатических узлов. А также материалы биопсий (при отсутствии свища) План

3. 4. 4 Внутрилабораторный контроль качество деконтаминации Проводится ежедневно Для контроля качества деконтаминации необходимо3. 4. 4 Внутрилабораторный контроль качество деконтаминации Проводится ежедневно Для контроля качества деконтаминации необходимо провести обработку штаммов МБ, согласно применяемой процедуре деконтаминации одновременно с клиническими образцами. В качестве тест-штамма использовать лабораторный штамм М. Smegmatis или M. Fortuitum. Необходимо приготовить суспензию этой культуры, взяв ее бактериологической петлей с поверхности плотной среды, разлить суспензию контрольного штамма в 2 пробирки, одну из которых подвергнуть процедуре деконтаминации одновременно с клиническими образцами. Сделать из каждого из образцов несколько разведений следующим образом: Развести бактериальную суспензию по стандарту мутности № 5 (5∙ 10⁸ бактерий в 1 мл) – суспензия № 1 Приготовить 5 серийных 10 -кратных разведений каждой культуры из суспензии № 1, чтобы получить 5∙ 10₃ и 5∙ 10⁴ бактерий в 1 мл Далее засеять по 0, 2 мл обработанной и необработанной суспензии 5∙ 10₃ и 5∙ 10⁴ на чашки Петри с кровяным агаром. Инкубировать засеянные чашки при 37°С 24 часа. Засеянные разведения должны дать рост 1 -10 и 10 -100 колоний соответственно. Процедура деконтаминации считается удовлетворительной, если число колоний в контрольных пробах, подвергнутых деконтаминации, не более чем в 2 -4 раза ниже, чем в соответствующих необработанных контрольных пробах Результаты высева контрольных проб фиксируются в журнале регистрации посевов.

 Проводится ежемесячно В лабораториях с числом исследований 20 и менее образцов в день Проводится ежемесячно В лабораториях с числом исследований 20 и менее образцов в день допустимо ежемесячно контролировать уровень проростов пробирок, засеянных материалом после деконтаминации. При этом ведется учет всех засеянных и всех проросших пробирок. При доле проросших пробирок менее 2% процесс деконтаминации слишком сильно воздействует на микрофлору, и часть штаммов микобактерий могла погибнуть. В этом случае отрицательные результаты посева диагностического материала могут оказаться ошибочными. При доле проростов более 5% деконтаминация недостаточна. В этом случае необходимо также провести дополнительную санобработку помещений лаборатории. В случае проростов, обусловленных низшими грибами, необходимо также проверить температуру культивирования микроорганизмов. Доля проростов должна ежемесячно регистрироваться в одном из текущих регистрационных журналах. План

3. 5 Питательные среды, посев и культивирование 2. 5. 1 Характеристика питательных сред Для3. 5 Питательные среды, посев и культивирование 2. 5. 1 Характеристика питательных сред Для посева диагностического материала используют разнообразные питательные среды, среди которых можно выделить 3 основных группы: 1. Плотные питательные среды на яичной основе 2. Плотные или полужидкие питательные среды на агаровой основе 3. Жидкие синтетические и полусинтетические питательные среды Жидкие питательные среды: a. Пробирки BBL MGIT с модифицированной средой Миддлбрука 7 Н 9 b. Флаконы BACTEC 9000 MB Myco/F Lytic (для посева крови) c. Флаконы MB Blood-Bac. T Alert 3 D для посева крови

   Преимущества яичных сред Экономичность и простота приготовления Могут храниться в холодильнике Преимущества яичных сред Экономичность и простота приготовления Могут храниться в холодильнике до 4 недель Хорошо поддерживают рост большинства штаммов микобактерий туберкулеза Позволяют проводить предварительную идентификацию микобактерий по морфологии колоний Малахитовый зеленый, входящий в состав сред, подавляет рост быстрорастущей немикобактериальной флоры, уменьшая вероятность контаминации посевов Недостатки яичных сред Появление роста микобактерий в сроки от 2 до 12 недель и более Плотные яичные среды

  Среда Левенштейна-Йенсена применяется во всем мире в качестве стандартной среды для первичного Среда Левенштейна-Йенсена применяется во всем мире в качестве стандартной среды для первичного выделения возбудителя туберкулеза и определения его лекарственной чувствительности. Среда Левенштейна-Йенсена – это плотная ячная среда, на которой хороший рост микобактерий туберкулеза получают приблизительно на 18 -25 -й день после посева микроскопически положительного материала. В состав этой среды входит глицерин, который способствует росту M. Tuberculosis. Для выделения M. Bovis рекомендуется вариант среды Левенштейна-Йенсена, в состав которой вместо глицерина входит 0, 5 % раствор пирувата натрия

 Среда Финна – ll рекомендована в России как вторая стандартная среда для выделения Среда Финна – ll рекомендована в России как вторая стандартная среда для выделения микобактерий. Она отличается от среды Левенштейна-Йенсена тем, что вместо L -аспарагина в ней используется глутаминовокислый натрий и кислотность среды имеет более низкое значение (р. Н = 6, 3 -6, 5), чем кислотность среды Левенштейна-Йенсена (р. Н = 7, 2 -7, 4), и большую стабильность. Эти свойства обуславливают более высокую эффективность среды при засеве материала, обработанного щелочными детергентами. Рост микобактерий появляется на этой среде на несколько дней раньше, чем на среде Левенштейна-Йенсена, а процент выделения культур на 6 -8% выше.

Среда Школьниковой Наиболее широко распространенной и хорошо зарекомендовавшей себя в России жидкой питательной средойСреда Школьниковой Наиболее широко распространенной и хорошо зарекомендовавшей себя в России жидкой питательной средой является среда Школьниковой План

3. 5. 2 Приготовление питательных сред для культивирования микобактерий Все реактивы, используемые для приготовления3. 5. 2 Приготовление питательных сред для культивирования микобактерий Все реактивы, используемые для приготовления сред, должны иметь степень очистки не менее категории «химически чистый» (ХЧ). Недопустимо отступление от методики приготовления или модификация состава среды! Для получения качественной среды и во избежание загрязнения ее посторонней микрофлорой рекомендуется следовать следующим основным правилам. Помещение, где приготавливаются среды, содержите в максимальной чистоте. Используйте только стерильную посуду и оборудование. Используйте точно взвешенные количества реагентов. Правильно проводите разведение растворов: используйте мерную посуду, доводите объем раствора по нижней границе мениск

 Постоянно контролируйте температуру в свертывателе.  Не допускайте перегрева сред в свертывателе. Постоянно контролируйте температуру в свертывателе. Не допускайте перегрева сред в свертывателе. Строго соблюдайте асептику, например, обжигайте пробирки и колбы. При приготовлении яичной массы тщательно обрабатывайте поверхность яиц перед их разбиванием. Не подвергайте приготовленную среду воздействию УФ-лучей. Храните готовые среды в темноте, в холодильнике. Проводите контроль качества каждой партии сред. Не экономьте при разливе среды по пробиркам, рекомендуется разливать в пробирки по 5 мл среды Для приготовления плотных яичных питательных сред используют солевую основу, различающуюся по составу для различных сред, яичную массу и раствор антисептика малахитового зеленого, предотвращающего рост на среде немикобактериальной флоры.

   Среда Левенштейна–Йенсена Реактивы 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый KH 2 PO 4 Среда Левенштейна–Йенсена Реактивы 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый KH 2 PO 4 – ТУ-6 -09 -5324 -87. 2. Магний лимоннокислый Mg 3(C 6 H 5 O 7)2 × 14 H 2 O – ТУ-6 -09 -1770 -77. 3. Магний сернокислый Mg. SO 4 × 7 H 2 O – ГОСТ 4523 -77. 4. L- аспарагин C 4 H 8 N 2 O 3 × H 2 O – импортный реактив. 5. Глицерин C 3 H 8 O 3– ГОСТ 6259 -75. 6. Малахитовый зеленый C 52 H 54 O 12 N 4– ТУ-6 -09 -1557 -77. 7. Вода дистиллированная – ГОСТ 6709 -77. Состав среды 1) Раствор минеральных солей: 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый 2, 4 г 2. Магний лимоннокислый 0, 6 г 3. Магний сернокислый 0, 24 г 4. L- аспарагин 3, 6 г 5. Глицерин 12, 0 мл 6. Вода дистиллированная 600 м Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в теплой дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. L-аспарагин рекомендуется растворять отдельно и вносить последним. Затем солевой раствор стерилизуют в автоклаве при 1 атм. (121 °С) в течение 30 ми- нут. Срок хранения раствора составляет 3– 4 недели при комнатной температуре.

2) Раствор малахитового зеленого: 1. Малахитовый зеленый 2 г 2. Стерильная дистиллированная вода 1002) Раствор малахитового зеленого: 1. Малахитовый зеленый 2 г 2. Стерильная дистиллированная вода 100 мл Приготовление раствора требует большой аккуратности, в связи с тем, что порошок малахитового зеленого очень летуч. Взвешенный порошок малахитового зеленого растворить в стерильной теплой дистиллированной воде и поместить раствор в термостат на 1– 2, 5 часа для большего растворения (рекомендуется частое помешивание, поскольку порошок растворяется очень плохо). Затем профильтровать раствор через бумажный фильтр, разлить по флаконам или небольшим колбам и стерилизовать при 1 атм. (121 °С) в течение 30 минут. Приготовленный раствор не подлежит длительному хранению и при появлении осадка или изменении окраски его следует заменить свежим раствором.

3) Яичная масса. Свежие диетические куриные яйца без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают3) Яичная масса. Свежие диетические куриные яйца без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла. Далее яйца тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70% этиловый спирт на 30 минут. Перед тем как начать работу с чистыми и сухими яйцами, рекомендуется тщательно вымыть руки с мылом и щеткой. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 л. Внимание! Необходимое количество яичной массы определяется по объему, а не по количеству яиц! Тщательно взбивают яичную массу стерильным венчиком или в стерильном миксере при минимальной скорости. Необходимо минимизировать образование пены! Миксер для приготовления питательных сред

 Приготовление среды В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают следующие растворы: 1. Приготовление среды В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают следующие растворы: 1. раствор минеральных солей 600 мл; 2. гомогенизированная яичная масса 1000 мл. Смесь тщательно перемешивают и фильтруют через стерильный марлевый фильтр, имеющий не менее 4 слоев марли. Добавляют 20 мл раствора малахитового зеленого, тщательно перемешивают, избегая образования пены, и в течение не более 15 минут разливают в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок. Не допускайте попадания пены в пробирки. Свертывание среды Для свертывания среды используются специальные аппараты-свертыватели «АСПС» . Пробирки с разлитой в них средой помещают в специальные штативы с подобранным углом наклона для формирования косяка среды высотой 8– 10 см. Штативы устанавливают в свертыватель и проводят коагуляцию при 82– 83 °С в течение 40 минут. Внимание! Свертывание является не стерилизующей, а лишь коагулирующей процедурой. Стерильность среды обеспечивается стерильными условиями ее приготовления и разлива. Хранение среды Приготовленная партия среды должна иметь этикетку с датой изготовления и сохраняться в холодильнике при 4°С с тщательно закрытыми пробками для предотвращения высыхания. Срок хранения среды не должен превышать 4 недели. АСПС

      Среда Финна-II Реактивы 1. Магний сернокислый Mg. SO Среда Финна-II Реактивы 1. Магний сернокислый Mg. SO 4 × 7 H 2 O – ГОСТ 4523 -77. 2. Натрий лимоннокислый C 6 H 5 O 7 Na 3 × 5, 5 H 2 O – ГОСТ 22280 -86. 3. Квасцы железоаммонийные Fe(NH 4) • (SO 4)2 × 12 H 2 O – ГОСТ 4205 -77. 4. Калий однозамещенный фосфорнокислый KH 2 PO 4 – ТУ 6 -09 -5324 -87. 5. Аммоний лимоннокислый однозамещенный C 8 H 11 O 7 N – ГОСТ 7234 -79. 6. Натрий глутаминовокислый однозамещенный C 5 H 8 NNa. O 4 × H 2 O – ТУ 6 -09 -337 -70. 7. Глицерин C 3 H 8 O 3 – ГОСТ 6259 -75. 8. Малахитовый зеленый C 52 H 54 O 12 N 4 – ТУ 6 -09 -1557 -77. 9. Вода дистиллированная – ГОСТ 6709 -77. Состав среды 1) Раствор минеральных солей: 1. Магний сернокислый 0, 5 г 2. Натрий лимоннокислый 1, 0 г 3. Квасцы железоаммонийные 0, 05 г 4. Калий однозамещенный фосфорнокислый 20 г 5. Аммоний лимоннокислый однозамещенный 5 г 6. Натрий глутаминовокислый однозамещенный 10 г 7. Глицерин 20 мл 8. Вода дистиллированная до 1000 мл

Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводяВышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Кислотность не корригируют. Стерилизуют в автоклаве при 1 атм. (121 °С) в течение 30 минут. Срок хранения раствора составляет 3– 4 недели при комнатной температуре. 2) Раствор малахитового зеленого. 3) Яичная масса. См. аналогичные разделы в описании среды Левенштейна– Йенсена Приготовление среды. Свертывание среды. Хранение среды. См. аналогичные разделы в описании среды Левенштейна– Йенсена

 Среда Школьниковой Реактивы 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый KH 2 PO 4 – ТУ Среда Школьниковой Реактивы 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый KH 2 PO 4 – ТУ 6 -09 -5324 -87. 2. Натрий двузамещенный фосфорнокислый Na 2 HPO 4 – ГОСТ 4172 -76. 3. Магний сернокислый Mg. SO 4 × 7 H 2 O – ГОСТ 4523 -77. 4. Натрий лимоннокислый C 6 H 5 O 7 Na 3 × 5, 5 H 2 O – ГОСТ 22280 -86. 5. Лимоннокислое аммиачное железо Fe. NH 4 C 6 H 5 О 7– ТУ 6 -09 -1114 -76. 6. L- аспарагин C 4 H 8 N 2 O 3 × H 2 O – импортный реактив. 7. Глицерин C 3 H 8 O 3 – ГОСТ 6259 -75. 8. Вода дистиллированная – ГОСТ 6709 -77. Состав среды 1. Калий однозамещенный фосфорнокислый 1, 5 г 2. Натрий двузамещенный фосфорнокислый 2, 5 г 3. Магний сернокислый 0, 5 г 4. Натрий лимоннокислый 1, 5 г 5. Лимоннокислое аммиачное железо 0, 05 г 6. L- аспарагин 1, 0 г 7. Глицерин 30 мл 8. Вода дистиллированная до 1000 мл

Приготовление среды Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в небольшом количестве теплой дистиллированной воды в указанной последовательностиПриготовление среды Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в небольшом количестве теплой дистиллированной воды в указанной последовательности при слабом подогревании на водяной бане. Каждый ингредиент добавляется после полного растворения предыдущего. Оставшаяся часть дистиллированной воды добавляется после абсолютного растворения всех солей. Среду фильтруют через бумажный фильтр и разливают в колбы. Кислотность среды обычно не корригируют, так как она содержит буферную смесь солей с р. Н = 7, 0– 7, 2. В случае необходимости подводят р. Н до значения 7, 0 40% едким натром. Стерилизуют среду в автоклаве при 1 атмосфере (121 °С) в течение 30 минут. Срок хранения среды составляет 2– 3 месяца при комнатной температуре. Перед посевом диагностического материала в среду стерильно вводят стерильную инактивированную при 70 °C сыворотку крупного рогатого скота или стерильную лошадиную сыворотку в количестве 10% от общего объема раствора. План

3. 5. 3 Внутрилабораторный контроль качества приготовления яичных сред Тест на стерильность После свертывания3. 5. 3 Внутрилабораторный контроль качества приготовления яичных сред Тест на стерильность После свертывания каждая вновь приготовленная партия среды первоначально подвергается контролю на стерильность. С этой целью 6 пробирок из свежеприготовленной партии среды помещают в термостат при 37 °С и выдерживают в течение 3 суток, что достаточно для роста загрязняющих микроорганизмов. Если прорастает, по крайней мере, 1 пробирка, то аналогичным образом должны быть проверены 10 дополнительных пробирок. Если хотя бы в одной из этих 10 пробирок появляется рост, аналогичным образом должны быть проверены все пробирки данной партии. Все пробирки с ростом загрязняющей микрофлоры следует удалить. Остальные неконтаминированные пробирки могут быть использованы.

    Тест на проверку ростовых качеств среды Необходимо проводить тестирование ростовых Тест на проверку ростовых качеств среды Необходимо проводить тестирование ростовых качеств каждой партии среды с помощью стандартного тест-штамма. В качестве тест-штамма рекомендуется использовать лабораторный (музейный) штамм M. tuberculosis H 37 Ra. Для приготовления суспензии этой культуры необходимо сделать смыв с 4 -недельного косяка плотной среды с обильным/сплошным ростом, гомогенизировать суспензию с помощью встряхивания со стеклянными бусами на встряхивателе в течение 1 минуты и приготовить несколько ее разведений следующим образом: Разведите бактериальную суспензию по стандарту мутности № 5 (5× 108 КОЕ мл) – суспензия № 1. Приготовьте 5 серийных 10 -кратных разведений каждой культуры из суспензии № 1, чтобы получить 5× 103 и 5× 104 бактерий в 1 мл. Далее засейте по 0, 2 мл каждой из суспензий (5× 103 и 5× 104) на две пробирки новоприготовленной партии среды. Распределите инокулят по поверхности пробирок. Дальнейшую инкубацию производите в обычном порядке. Регистрируйте еженедельно рост и относительный размер колоний в пробирках, сравнивая рост на новоприготовленной партии среды с результатами роста, полученными на предшествующей партии среды и зафиксированными в журнале приготовления сред (срок появления роста, количество и размер колоний). Засев разведений 5× 103 и 5× 104 должен дать рост 1– 10 и 10– 100 колоний соответственно. При таком росте на контролируемых средах они считаются удовлетворительными. Контроль ростовых свойств среды можно проводить одновременно с посевом диагностического материала.

Регистрация результатов контроля качества среды Результаты контроля качества сред фиксируются в журнале приготовления сред.Регистрация результатов контроля качества среды Результаты контроля качества сред фиксируются в журнале приготовления сред. В журнале приготовления сред должны быть указаны: дата приготовления среды; объем приготовленной среды или количество разлитых пробирок; Ф. И. О. лаборанта, приготовившего среду; результаты теста на стерильность и на ростовые качества (время появления роста для обоих штаммов, количество колоний в различных разведениях, их размер и морфология); дата проведения контроля; Ф. И. О. лаборанта, проводившего контроль качества среды; заключение о годности среды. Новая среда пригодна к употреблению, если рост на ней эквивалентен или лучше, чем на предыдущей среде. Не используйте партию среды, если рост на ней хуже, чем на предыдущей партии План

3. 5. 4 Техника посева и инкубации Микроскопическое и культуральное исследования должны производиться параллельно3. 5. 4 Техника посева и инкубации Микроскопическое и культуральное исследования должны производиться параллельно только из одной и той же пробы диагностического материала.

Процедура посева Рабочее место микробиолога организуется таким образом, чтобы оно было удобно для оператораПроцедура посева Рабочее место микробиолога организуется таким образом, чтобы оно было удобно для оператора и позволяло максимально исключить операторские ошибки. Рабочее место для проведения процедуры посева

Перед процедурой посева необходимо подготовить пробирки с питательными средами,  пронумеровать их,  согласноПеред процедурой посева необходимо подготовить пробирки с питательными средами, пронумеровать их, согласно регистрационным номерам анализов, и последовательно расположить в вертикальном штативе. Аналогичным образом подготовить и пронумеровать предметные стекла Маркировка пробирок

Перед началом забора посевного материала в пипетку следует убедиться в том, что номер пробиркиПеред началом забора посевного материала в пипетку следует убедиться в том, что номер пробирки с посевным материалом соответствует номерам пробирок с питательной средой и номеру предметного стекла для приготовления мазка. Набрать стерильной мерной (предпочтительно одноразовой пластиковой) или пастеровской пипеткой 1, 0– 1, 2 мл подготовленного осадка, оставив приблизительно 0, 1– 0, 2 мл для последующего приготовления мазка для микроскопии. Соблюдая условия стерильности, внести равные объемы набранного материала (примерно по 0, 5– 0, 6 мл) в 2 пробирки с разными плотными питательными средами. Пробирки с питательной средой при посеве должны находиться в наклонном положении (под углом 45°). Посевной материал нанести на верхнюю треть косяка питательной среды. Засеянные пробирки закрыть ватно-марлевыми пробками и поместить в вертикальном положении в штатив таким образом, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей поверхности косяка питательной среды. Остаток осадка забрать той же пипеткой и нанести на заранее подготовленное и пронумерованное предметное стекло 2– 3 капли осадка для получения мазка для микроскопического исследования, распределив материал равномерным слоем в центре стекла на площади примерно 1× 2 см. Использованную для посева и приготовления мазка пипетку опустить в емкость с дезраствором. По завершении посева всех проб засеянные пробирки переместить в горизонтальные штативы и поместить в термостат при температуре 37 °С.

 Инкубация Температура инкубации – 37 °С. При первичном посеве микроскопически отрицательного материала средняя Инкубация Температура инкубации – 37 °С. При первичном посеве микроскопически отрицательного материала средняя продолжительность роста микобактерий на плотных питательных средах может составить 20– 46 дней. Рост отдельных штаммов появляется через 60 и даже более дней. Это обуславливает необходимость при отсутствии роста микобактерий для выдачи отрицательного результата выдерживать посевы в термостате до 10 недель. В процессе инкубации посевов необходимо соблюдать следующее: по истечении первых 2– 3 суток инкубации ватно-марлевые или дренированные силиконовые пробки заменяют герметичными пробками (силиконовыми или резиновыми) пробирки переводят в вертикальное положение инкубацию проводят в течение 10 недель при обязательном еженедельном просмотре засеянных пробирок для облегчения процедуры еженедельного просмотра и учета посевы, выполненные в течение одного дня, желательно размещать в отдельных ящиках или штативах в порядке номеров регистрации; каждый штатив или ящик следует сопровождать этикеткой, на которой указывать дату посева, первый и последний регистрационный номер партии План

3. 5. 5 Оценка и учет результатов посева диагностического материала При оценке результатов культурального3. 5. 5 Оценка и учет результатов посева диагностического материала При оценке результатов культурального исследования диагностического материала необходимо соблюдать следующие правила. 1. Наблюдение за посевами и просмотр засеянных пробирок следует проводить еженедельно. 2. При отсутствии роста посевы должны выдерживаться в термостате в течение 10 недель. Отрицательный результат культурального исследования может быть выдан только по истечении этого срока инкубации. 3. Во время очередного просмотра следует отбирать все пробирки, в которых имеется рост колоний, расставляя их по порядку номеров регистрации материала. Рост культуры в пробирке (на яичной питательной среде)

4. При оценке результатов регистрировать следующие параметры:  «появление роста» – дату появления роста4. При оценке результатов регистрировать следующие параметры: «появление роста» – дату появления роста в пробирках (в том случае, если рост только в одной из пробирок, а во второй рост отсутствует, рекомендуется зарегистрировать дату появления роста и показатель роста в пробирке с выросшей культурой и использовать ее для дальнейшей работы, не дожидаясь появления роста колоний в другой пробирке. Вторую пробирку оставляют в термостате для дальнейшей инкубации и при наличии в ней роста в дальнейшем регистрируют полученные результаты «интенсивность роста» – число колоний, выросших в каждой из пробирок. При наличии одновременного роста во всех пробирках рекомендуется оценить суммарное число колониеобразующих единиц (КОЕ) во всех пробирках, засеянных данным материалом. Этот показатель имеет важное диагностическое и прогностическое значение, особенно если посевы производятся в динамике наблюдения за больным в процессе химиотерапии «загрязнение посева» посторонней микрофлорой или грибами при наличии такового; «отсутствие роста» (указанный параметр регистрируется через 10 недель культивирования) Пробирки с выросшими культурами

При этом необходимо иметь в виду следующие показатели:  появление роста кислотоустойчивых микобактерий вПри этом необходимо иметь в виду следующие показатели: появление роста кислотоустойчивых микобактерий в течение 7– 10 дней культивирования на плотных питательных средах может свидетельствовать о выделении быстрорастущих нетуберкулезных микобактерий, которые не относятся к комплексу M. tuberculosis, поэтому перед выдачей ответа такие культуры должны подвергнуться первичной идентификации появление роста кислотоустойчивых микобактерий после 3– 4 недель культивирования свидетельствует о выделении M. tuberculosis, а также других медленнорастущих микобактерий, которые могут относиться к потенциально патогенным нетуберкулезным микобактериям или к безвредным кислотоустойчивым сапрофитам прежде чем дать отрицательный ответ после 10 недель культивирования, необходимо убедиться в отсутствии роста очень медленно растущих микобактерий, в числе которых могут быть и M. tuberculosis

В ряде случаев некоторые микроорганизмы, загрязняющие посевы,  обладают способностью разлагать составные ингредиенты средыВ ряде случаев некоторые микроорганизмы, загрязняющие посевы, обладают способностью разлагать составные ингредиенты среды с образованием кислоты; это приводит к снижению p. H-среды. На такой среде микобактерии не растут, и такие пробирки подлежат удалению. Посевы с частичным загрязнением желательно выдержать до окончания срока инкубации или до развития хотя бы нескольких колоний микобактерий, так как позднее появление загрязнения не исключает роста M. tuberculosis. В таких случаях необходимо сделать мазок, окрасить его по методу Циля–Нильсена и при наличии кислотоустойчивых микобактерий попытаться обработать выросшую культуру 3– 4% раствором серной кислоты, а после отмывания ее изотоническим раствором хлористого натрия вновь засеять осадок на питательные среды.

Характеристика колоний M. tuberculosis Вирулентные культуры микобактерий туберкулеза обычно растут на плотных питательных средахХарактеристика колоний M. tuberculosis Вирулентные культуры микобактерий туберкулеза обычно растут на плотных питательных средах в виде R-колоний различной величины и вида, имеют желтоватый или слегка кремовый оттенок (цвет слоновой кости), шероховатую поверхность, напоминающую манную крупу или цветную капусту. Колонии, как правило, сухие, морщинистые, но в случае диссоциации могут встречаться и влажные, слегка пигментированные колонии, розовато-желтый пигмент которых резко отличается от оранжевого или желтого пигмента сапрофитных или некоторых нетуберкулезных микобактерий. Последние обычно растут в S-форме. Следует отметить, что на среде Финна колонии часто выглядят более влажными, чем на среде Левенштейна–Йенсена. Колонии микобактерий туберкулеза на яичной среде

При приготовлении мазков для микроскопического исследования колонии микобактерий туберкулеза проявляют свои физико-химические особенности: ониПри приготовлении мазков для микроскопического исследования колонии микобактерий туберкулеза проявляют свои физико-химические особенности: они не эмульгируются в изотоническом растворе, а образуют зернистую крошковидную суспензию. При микроскопическом исследовании мазков из выросших колоний, окрашенных по Цилю–Нильсену, обнаруживаются яркие малиново-красные палочковидные бактерии, лежащие одиночно или группами. При культивировании на жидких средах или в условиях повышенной влажности M. tuberculosis образуют скопления или переплетения в виде войлока или кос – феномен «корд-фактора» . Если морфология колоний или микобактерий вызывает сомнения в их принадлежности к роду Mycobacterium , мазки дополнительно обесцвечивают 3% солянокислым спиртом в течение 40– 45 минут. Окончательное заключение о принадлежности выделенной культуры к комплексу M. tuberculosis можно сделать только после проведения первичной дифференциации культуры, выполняемой в ходе постановки теста на ЛЧ МБТ. При необходимости проводится дальнейшая идентификация выделенной культуры, позволяющая отнести микобактерии к тому или иному виду. Корд-фактор. Окраска по Цилю-Нильсену.

 Учет результатов посева При выделении культуры кислотоустойчивых микобактерий,  отвечающих определенным характеристикам, а Учет результатов посева При выделении культуры кислотоустойчивых микобактерий, отвечающих определенным характеристикам, а именно: появление роста колоний на плотных питательных средах не ранее чем через 3– 4 недели инкубации, наличие колоний характерной морфологии и окраски микроскопическое подтверждение кислотоустойчивости выделенного микроорганизма при окраске по методу Циля–Нильсена Следует произвести количественную оценку интенсивности роста. Интенсивность роста обозначают по 3 -балльной системе: (1+) – 1– 20 КОЕ (скудное бактериовыделение); (2+) – 21– 100 КОЕ (умеренное Бактериовыделение (3+) – >100 КОЕ (обильное бактериовыделение) Пробирки с различной интенсивностью роста МБТ на среде Финна

Окончательная величина КОЕ (число колониеобразующих единиц), регистрируемая как итоговый показатель интенсивности роста, высчитывается какОкончательная величина КОЕ (число колониеобразующих единиц), регистрируемая как итоговый показатель интенсивности роста, высчитывается как суммарное по результатам подсчета числа колоний, выросших во всех пробирках. Одновременно рекомендуется зарегистрировать число КОЕ, выросших в каждой из пробирок с разными питательными средами. Все характеристики выросших на плотных питательных средах микобактерий заносятся в лабораторный журнал учета результатов культуральных исследований, в бланки ответов, а также в картотеку План

3. 6 Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса, видовая идентификация микобактерий 3. 6. 1 Предварительная идентификация3. 6 Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса, видовая идентификация микобактерий 3. 6. 1 Предварительная идентификация комплекса M. Tuberculosis (родовая идентификация) Алгоритм первичной идентификации комплекса M. tuberculosis В бактериологических лабораториях всех уровней должно проводиться определение принадлежности выделенных или доставленных из лаборатории 1 -го уровня культур микроорганизмов. На основании: скорости роста бактерий– более 10 дней морфологии и окраски колоний результатов исследования мазков, приготовленных из выделенной культуры и окрашенных по Цилю–Нильсену врач-бактериолог делает заключение о принадлежности культуры к комплексу микобактерий туберкулеза (МБТ) и выдает ответ по результату культурального исследования

Колонии МБТ на большинстве питательных сред выглядят сухими, светло-кремового цвета,  шероховатыми (R-форма), толстыми,Колонии МБТ на большинстве питательных сред выглядят сухими, светло-кремового цвета, шероховатыми (R-форма), толстыми, приподнятыми в центре, с узловатой или морщинистой поверхностью и неровными краями (напоминают сморчки или кочан цветной капусты Колонии M. T uberculosis на среде Левенштейна-Йенсена. Колонии микобактерий туберкулеза на яичной среде

На некоторых питательных средах (среда «Новая» , Финна-II, лиофилизированная среда Левенштейна–Йенсена) или при обработкеНа некоторых питательных средах (среда «Новая» , Финна-II, лиофилизированная среда Левенштейна–Йенсена) или при обработке диагностического материала 1% раствором серной кислоты (без последующей нейтрализации) колонии выглядят полушаровидными, гладкими (S-форма), мягкими, влажными, иногда слегка складчатыми. Рост культуры МБТ характеризуется как пышный – эугонический. После курса химиотерапии от больных туберкулезом могут выделяться гладкие колонии с влажным ростом (S-формы). M. bovis на среде Левенштейна–Йенсена показывает стелющийся дисгонический рост. Колонии большинства НТМБ морфологически не сходны с МБТ. Сапрофитные микобактерии могут варьировать по форме колоний. Они бывают гладкие, круглые, влажные, блестящие, куполообразные, маслянистые. Хорошо эмульгируются в воде. Иногда могут иметь промежуточную форму. Колонии кремового цвета М. fortuitum, M. chelonae, М. kansasii и М. terrae complex бывают сухие и морщинистые, поэтому их иногда ошибочно принимают за МБТ. Окраска колоний НТМБ может быть от бело- го, телесного и кремового цвета до слабо-желтого, желтого и оранжевого. Рост культуры НТМБ может быть пышным или стелющимся, выпотевающим – дисгоническим. Рост культуры в пробирке на яичной питательной среде

Главной отличительной особенностью рода микобактерий является строгая кислото , щелоче и спиртоустойчивость, поэтому первойГлавной отличительной особенностью рода микобактерий является строгая кислото , щелоче и спиртоустойчивость, поэтому первой ступенью идентификации является микроскопия всех выделенных культур с окраской мазков по Цилю–Нильсену. Методика выполнения 1. Приготовить мазки из всех культур, отобранных при просмотре посевов. 2. Окрасить мазки по методу Циля–Нильсена. 3. Провести микроскопию мазков. При окраске по Цилю–Нильсену кислотоустойчивые МБ выглядят красными на синем фоне. Микобактерии имеют вид тонких слегка изогнутых палочек или коротких, длиной 1– 10 (чаще 1– 4) мкм, шириной 0, 2– 0, 6 мкм, гомогенных или зернистых с незначительно закругленными концами. В мазках культуры МБТ, выросшей на полужидкой или жидкой среде, можно увидеть микроколонии МБ в виде кос и жгутов, феномен корд-фактора.

Характеристика микобактерий и родственных таксонов  Характеристика микобактерий и родственных таксонов

На основании тинкториально-морфологических свойств и скорости роста проводится определение рода выделенной культуры. У родственныхНа основании тинкториально-морфологических свойств и скорости роста проводится определение рода выделенной культуры. У родственных микроорганизмов отмечается слабая или частичная кислотоустойчивость, быстрый рост на простых и яичных средах, выраженная окраска по методу Грама и значительный полиморфизм при микроскопическом исследовании мазка. Нокардии и родококки не имеют важного клинического значения и могут изучаться в научных лабораториях. Род микобактерий характеризуется строгой кислотоустойчивостью при окраске по методу Циля–Нильсена и слабой окраской по Граму. В мазке микобактерии представлены в виде длинных, тоненьких или коротких палочек. Микобактерии характеризуются медленным ростом при посеве диагностического материала на яичные среды. План

3. 6. 2 Дифференциация M.  T uberculosis complex от нетуберкулезных микобактерий Культуры, отнесенные3. 6. 2 Дифференциация M. T uberculosis complex от нетуберкулезных микобактерий Культуры, отнесенные по морфологическим свойствам к микобактериям туберкулезного комплекса, необходимо дифференцировать от нетуберкулезных микобактерий. При первичном выделении культуры из урогенитального диагностического материала следует также выдавать положительный ответ только после дифференциальной диагностики. Это объясняется не только тем, что подобный материал имеет наиболее высокую вероятность загрязнения микобактериями окружающей среды, но и тем, что сапрофитные МБ могут быть нормальной флорой человека. Следует с особым вниманием выдавать ответ на впервые выделенную культуру из детского диагностического материала, так как врач несет большую ответственность за выдачу ложноположительного результата исследования у ребенка. Разделение микобактерий туберкулезного комплекса и НТМБ основано на их культуральных свойствах и способности расти на дифференциально диагностических средах.

Бактериологическая характеристика микобактерий туберкулеза 1. На среде Левенштейна–Йенсена образуют сухие колонии с неровными краями,Бактериологическая характеристика микобактерий туберкулеза 1. На среде Левенштейна–Йенсена образуют сухие колонии с неровными краями, цвета слоновой кости. 2. Рост только при 35– 37 °С. 3. Рост на плотных питательных средах не ранее 3 недель. Рост субкультуры может появиться через 10– 14 дней. 4. Отсутствие роста на среде с салициловым натрием или паранитробензойной кислотой (ПНБК).

Дифференциально-диагностические среды Среда Левенштейна–Йенсена,  содержащая 500 мкг/мл и 1000 мкг/мл салицилового натрия РеактивыДифференциально-диагностические среды Среда Левенштейна–Йенсена, содержащая 500 мкг/мл и 1000 мкг/мл салицилового натрия Реактивы 1. Среда Левенштейна–Йенсена 300 мл (до свертывания). 2. Натрий салициловый. Методика выполнения Раствор 1. Приготовить навеску натрия салицилового 500 мг и добавить 5 мл дистиллированной воды, получаем разведение 100 000 мкг/мл. Раствор 2. К 2 мл раствора № 1 прибавить 2 мл дистиллированной воды, получаем разведение 50 000 мкг/мл. Приготовленные растворы натрия салицилового (№ 1 и № 2) в пробирках подогреть над пламенем горелки до кипения и дать остыть до комнатной температуры. По 1 мл раствора № 1 и № 2 добавить в две колбы с 99 мл среды Левенштейна–Йенсена и тщательно размешать. Получаем рабочее разведение натрия салицилового соответственно 1000 и 500 мкг/мл. Контрольную среду без препарата готовить одновременно с опытными средами. Среду с салициловым натрием в двух разведениях и контрольную среду разлить в пробирки по 5 мл и стерилизовать при 85°С в течение 45 мин.

Среда Левенштейна – Йенсена,  содержащая 500 мкг/мл паранитробензойной кислоты (ПНБК) Реактивы 1. СредаСреда Левенштейна – Йенсена, содержащая 500 мкг/мл паранитробензойной кислоты (ПНБК) Реактивы 1. Среда Левенштейна–Йенсена 200 мл (до свертывания). 2. Паранитробензойная кислота. 3. 4% раствор едкого натра. 4. 10% раствор соляной кислоты. 5. Индикаторные бумажки. Методика выполнения Навеску ПНБК (50 мг) хорошо растереть в стерильной ступке, добавить 5 мл дистиллированной стерильной воды и 20– 24 капли 4% раствора едкого натра до получения р. Н 8, 0 (по индикаторной бумажке). Затем с помощью 10% раствора соляной кислоты довести р. Н до 7, 0. Приготовленный раствор добавить к 95 мл среды Левенштейна – Йенсена, тщательно размешать. Опытную и контрольную среду разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при температуре 85 °С в течение 45 мин. Для разделения микобактерий туберкулезного комплекса и нетуберкулезных микобактерий 0, 2 мл бактериальной суспензии исследуемой культуры в стандартном разведении (суспензию, соответствующую по оптической плотности стандарту мутности № 5, развести в 10 раз), засеять на среду с салициловым натрием (салицилатный тест) или на среду с ПНБК и в контрольную пробирку. Определение способности роста МБ на одной из этих диагностических сред проводится одновременно с определением их лекарственной устойчивости.

Микобактерии туберкулезного комплекса не растут на средах с добавлением салициловокислого натрия или ПНБК. ОднакоМикобактерии туберкулезного комплекса не растут на средах с добавлением салициловокислого натрия или ПНБК. Однако около 10% культур МБТ дают незначительный рост на среде с 500 мкг/мл салициловокислого натрия. Культуры же НТМБ хорошо растут в присутствии этой концентрации салициловокислого натрия. В то же время некоторые культуры НТМБ на среде с 1000 мкг/мл салицилового натрия имеют очень слабый пленочный рост, который иногда может остаться незамеченным, тогда как культуры МТБ не дают рос- та на среде с этой концентрацией вещества. Чтобы избежать диагностических ошибок, следует использовать среду с салициловокислым натрием в концентрациях 500 и 1000 мкг/мл, в сомнительных случаях увеличивать срок инкубации до 4 недель и проводить тщательный осмотр поверхности среды. Наличие стелющегося роста культуры расценивается как положительный результат. В некоторых случаях при постановке салицилатного теста наблюдается почернение, побурение среды с салициловым натрием без изменения цвета среды в контроле. Способность вызывать деградацию салицилового натрия является отличительной особенностью M. fortuitum и M. chelonae. М. fortuitum формы розетки кластерные, восковой колоний, которые иногда сферическую форму. Среда Левенштейна-Йенсена

Дифференциальная диагностика микобактерий туберкулезного комплекса и нетуберкулезных микобактерий Свойство культуры M. Tuberculosis,  M.Дифференциальная диагностика микобактерий туберкулезного комплекса и нетуберкулезных микобактерий Свойство культуры M. Tuberculosis, M. Bovis НТМБ Появление видимых колоний в течение 1 недели — ± Пигментация колоний — ± Строгие мезофиллы (рост только при 35 -37°С) + — Рост на среде с салициловым натрием — + Рост на среде с ПНБК — + На основании отсутствия роста на диагностических средах с салициловым натрием или ПНБК, образования сформированных непигментированных колоний в течение 3– 4 недель при температуре 37 °С исследованную культуру можно отнести к комплексу микобактерий туберкулеза План

3. 6. 3 Видовая идентификация микобактерий туберкулезного комплекса должна проводиться во всех лабораториях второго3. 6. 3 Видовая идентификация микобактерий туберкулезного комплекса должна проводиться во всех лабораториях второго и третьего уровней. Наиболее актуальными представителями этого комплекса, встречающимися в наших регионах, являются М. tuberculosis, M. bovis и M. bovis-BCG. Их видовая идентификация основана на фенотипической характеристике и ряде биохимических тестов.

Для видовой идентификации туберкулезного комплекса проводятся следующие тесты:  Определения нитратредуктазы Восстановление нитратов ОпределениеДля видовой идентификации туберкулезного комплекса проводятся следующие тесты: Определения нитратредуктазы Восстановление нитратов Определение ниацина (ниациновый тест) Определение потребности в кислороде Определение способности роста культуры на среде с гидразид тиофен-2 -карбоксиловой кислотой (тсн) Определение способности роста культуры на среде с никотинамидом Определение чувствительности к циклосерину

Определение нитратредуктазы  Для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулезного комплекса применяется реакция восстановления нитратов вОпределение нитратредуктазы Для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулезного комплекса применяется реакция восстановления нитратов в нитриты. Сущность метода заключается в определении активности нитратредуктазы по количеству восстановленного из нитрата нитрита, который дает цветную реакцию (желтое или красное окрашивание в зависимости от применяемого метода)

Метод определения нитратредуктазы по Гриссу Для определения способности микобактерий восстанавливать нитраты их культуру выращиваютМетод определения нитратредуктазы по Гриссу Для определения способности микобактерий восстанавливать нитраты их культуру выращивают на плотной яичной среде Левенштейна–Йенсена с добавлением нитрата калия или нитрата натрия в количестве 1 г на 1 л готовой среды Реактивы 1) Среда Левенштейна–Йенсена. Среду Левенштейна–Йенсена готовят в соответствии со стандартной прописью и способом приготовления. В готовую к свертыванию среду вносят нитрат калия или натрия из расчета 100 мг на 100 мл среды. Перед посевом в пробирки со средой вносят по 0, 2– 0, 3 мл физиологического раствора или любой жидкой питательной среды. 2) Приготовление реактива Грисса: a) при использовании готового реактива 7, 5 г вещества растворяют в стерильной дистиллированной воде; раствор может храниться в холодильнике, в посуде из темного стекла, до 2 недель; b) приготовлении реактива Грисса непосредственно в лаборатории его готовят на основе 5 -нормального раствора ледяной уксусной кислоты (143 мл ледяной уксусной кислоты довести дистиллированной водой до 500 мл). Раствор А : 2 г сульфаниловой кислоты растворить в 250 мл 5 N уксусной кислоты. Раствор Б : 1, 25 г 1 -нафтиламина (α-нафтиламина) растворить в 250 мл 5 Н уксусной кислоты. Растворы А и Б могут храниться в посуде из темного стекла в холодильнике 1 год (или до появления осадка). Перед употреблением растворы А и Б смешиваются в равных объемах. Полученный реактив Грисса используют сразу.

Методика выполнения 0, 2 мл разведенной в 10 раз суспензии клинического изолята микобактерий туберкулезаМетодика выполнения 0, 2 мл разведенной в 10 раз суспензии клинического изолята микобактерий туберкулеза с оптической плотностью, соответствующей стандарту № 5, засевают в пробирки со средой, как при обычном посеве. Определение нитратредуктазы проводят на 8– 12 -й день с момента посева. Для этого используют 7, 5% раствор реактива Грисса. В одну из контрольных пробирок от каждой выделенной культуры закапывают с помощью медицинской капельницы 2– 3 капли 7, 5% раствора Грисса. При появлении в контрольной пробирке в течение последующих 1– 3 минут красного или ржаво-красного окрашивания поверхности среды и конденсата, а также изменении цвета реактива от слабо-красного (розоватого) до ржаво-красного реактив Грисса закапывают в опытные пробирки. Учет результата проводится по окрашиванию поверхности среды и конденсата в пробирках. Изменение окраски среды и реактива может варьировать от малинового до бурого. При отрицательной реакции реактив Грисса не меняет цвет, а поверхность среды приобретает ярко-синий цвет или слабо-фиолетовое окрашивание, либо не меняет окраски. Назад

Метод восстановления нитратов по Tsukamura Метод используется для дифференциации МТБ,  M. bovis иМетод восстановления нитратов по Tsukamura Метод используется для дифференциации МТБ, M. bovis и некоторых видов НТМБ, которые обладают морфологически сходными колониями, одинаковой скоростью роста и способностью к пигментообразованию. МБТ, M. kansasii, M. S zulgai и М. fortuitum имеют положительную реакцию, M. bovis и M. chelonae – отрицательную. Реактивы 1. 1. Культура, выращенная на плотной питательной среде в течение 3– 4 нед. 2. Для приготовления М/15 фосфатного буфера р. Н 7, 1 готовят: a) М/15 раствор однозамещенного фосфорнокислого калия (9, 078 г КН 2 РО 4 на 1 л дистиллированной воды); b) М/15 раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия (11, 876 г Na 2 HPО 4 на 1 л дистиллированной воды). Для получения 100 мл фосфатного буфера р. Н 7, 1 берут 33, 4 мл раствора а и 66, 6 мл раствора б. 3. Готовят 0, 1% раствор нитрата натрия в фосфатном буфере. Навеску в 100 мг Na. NО 3 растворяют в 100 мл фосфатного буфера, стерилизуют в течение 20 мин при температуре 120 °С, хранят в холодильнике. Перед постановкой реакции нагревают до комнатной температуры. 4. Готовят реактив Эрлиха: 2 г парадиметиламинобензальдегида на 100 мл 10% раствора соляной кислоты.

Методика выполнения 10 мг влажной массы испытуемой культуры со среды Левенштейна – Йенсена вносятМетодика выполнения 10 мг влажной массы испытуемой культуры со среды Левенштейна – Йенсена вносят в пробирку с 1 мл 0, 1% раствора нитрата натрия в фосфатном буфере. Инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Добавляют 2 капли реактива Эрлиха и 0, 5 мл 10% раствора соляной кислоты. Окрашивание раствора в желтый цвет свидетельствует о восстановлении нитратов – положительный тест. Для внутрилабораторного контроля в качестве положительного контроля следует использовать штамм M. tuberculosis, в качестве отрицательного – M. bovis или M. avium. Результат выражается в крестах от + до ++++ в сравнении с контролем. На получение правильного результата влияет возраст исследуемой культуры (3– 4 нед. ) и ее количество. В случае получения отрицательного результата рекомендуется повторить тест. Назад

Модификация теста восстановления нитратов по Tsukamura В контрольную пробирку с хорошим ростом культуры послеМодификация теста восстановления нитратов по Tsukamura В контрольную пробирку с хорошим ростом культуры после определения ее лекарственной устойчивости вносят 1 мл 0, 1% раствора нитрата натрия в фосфатном буфере. Инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. В пробирку с реагирующей смесью добавляют 2 капли реактива Эрлиха и 0, 5 мл 10% раствора соляной кислоты. Преимущество модифицированного метода заключается в использовании «свежей» культуры в достаточном количестве.

Метод восстановления нитратов по Virtanen Реактивы 1. Культура, выращенная на среде Левенштейна–Йенсена в течениеМетод восстановления нитратов по Virtanen Реактивы 1. Культура, выращенная на среде Левенштейна–Йенсена в течение 3– 4 недель. 2. Раствор нитрата натрия – 0, 01 М раствор Na. NO 3 в 0, 45 М фосфатном буфере (р. Н 7, 0). Для приготовления раствора взять: навеску нитрата натрия (Na. NO 3) – 0, 085 г; навеску однозамещенного фосфорнокислого калия (KH 2 PO 4) – 0, 117 г; навеску двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na 2 HPO 4) × 12 H 2 O – 0, 485 г. Растворить приготовленные навески в 100 мл дистиллированной воды. 3. Реагент № 1 – 50% соляная кислота (HCl) (к 10 мл дистиллированной воды прибавить 10 мл концентрированной соляной кислоты). 4. Реагент № 2 – 0, 2% раствор сульфаниламида (0, 2 г растворить в 100 мл дистиллированной воды). 5. Реагент № 3 – 0, 1% водный раствор N-нафтил- этилендиамингидрохлорида (0, 1 г растворить в 100 мл дистиллированной воды, хранить в холодильнике) 6. Стерильные пробирки и пипетки.

Методика выполнения 1. 1. 10 мг влажной массы испытуемой культуры со среды Левенштейна –Методика выполнения 1. 1. 10 мг влажной массы испытуемой культуры со среды Левенштейна – Йенсена вносят в пробирку (13× 100 мл), содержащую 2 мл раствора нитрата натрия в фосфатном буфере. 2. Поместить пробирку с культурой в водяную баню при температуре 37 °С на 2 часа. Образование нитритов определяется реактивом Грисса (см. выше). 3. В каждую пробирку с исследуемой культурой добавить: pеагент № 1 – 1 капля; pеагент № 2 – 2 капли; pеагент № 3 – 2 капли. После прибавления реагентов незамедлительно смотрят на появление красного окрашивания. 4. Результат выражается в крестах от + до ++++ по сравнению с контролем. Назад

Определение ниацина (ниациновый тест) Все микобактерии продуцируют ниацин (никотиновую кислоту).  Большинство видов микобактерийОпределение ниацина (ниациновый тест) Все микобактерии продуцируют ниацин (никотиновую кислоту). Большинство видов микобактерий содержат фермент, который превращает ниацин в никотинамид аденин динуклеид. M. tuberculosis блокирует этот фермент, и ниацин аккумулируется в культуре и в среде, на которой они растут, в большом количестве. Реакция основана на том, что никотин вступает в реакцию с цианистым бромидом и анилином и дает желтое окрашивание. Реактивы 1. 3– 4 недельная культура микобактерий на среде Левенштейна–Йенсена не менее 50– 100 колоний. 2. Диагностические полоски DIFCO – ниациновые полоски. 3. Стерильный физиологический раствор. 4. Стерильные пипетки и пробирки с пробками.

     Методика выполнения 1. В пробирку с культурой МБ на Методика выполнения 1. В пробирку с культурой МБ на среде Левенштейна–Йенсена налить 3 мл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора (0, 85% раствор Na. Cl). Пользуясь пипеткой, осторожно соскоблить поверхностный рост культуры, чтобы сделать более доступной экстракцию ниацина. 2. Наклонить пробирку так, чтобы поверхность среды была в горизонтальном положении и вся покрывалась жидкостью. В таком положении оставить при комнатной температуре на 30 мин. 3. Осторожно стерильной пипеткой отобрать 0, 6 мл полученного экстракта и перенести в стерильную пробирку 13× 100 мм. 4. Используя обожженный над пламенем пинцет, поместить индикаторную ниациновую полоску в 0, 6 мл экстракта (в опытные пробирки, положительный и отрицательный контроль). Плотно закрыть пробку. Интенсивно встряхнуть пробирки, чтобы смешать жидкость с реагентом на конце полоски. Оставить пробирки при комнатной температуре. 5. Время экспозиции 12– 15 минут (не более 30). Появление желтого окрашивания раствора указывает на положительный ниациновый тест. 6. После окончания теста пробирки автоклавируют. Необходимо помнить, что ряд нетуберкулезных микобактерий – M. simiae, M. chelonae и некоторые штаммы M. marinum также блокируют ниацин. Хромогенные штаммы НТМБ могут давать ложно-положительные реакции. Отрицательный результат не является окончательным, так культуры МБТ, выделенные от больных длительно получавших ПТП, слабо продуцируют ниацин. В подобных случаях необходимо повторить тест. Культуру пересеять, чтобы получить пышный рост и использовать для тестирования 5– 6 -недельную культуру.

Определение ниацина с применением барбитуровой кислоты Реактивы 1. 0, 1 N раствор едкого натра.Определение ниацина с применением барбитуровой кислоты Реактивы 1. 0, 1 N раствор едкого натра. Навеску 0, 45 г растворить в 100 дистиллированной воды. 2. 0, 5 N раствор соляной кислоты. 2, 1 мл концентрированной соляной кислоты аккуратно добавляем к 50 мл дистиллированной воды. 3. 5% раствор барбитуровой кислоты. Навеску 2, 5 г барбитуровой кислоты растворяем при нагревании в смеси, состоящей из 25 мл ДМСО (диметилсульфаксид), 12, 5 мл спирта и 12, 5 мл дистиллированной воды. 4. 5% раствор роданистого аммония. Навеску 5 г роданистого аммония растворить в 100 мл дистиллированной воды. 5. 5% раствор хлорамина. Навеску 5 г хлорамина растворить в 100 мл дистиллированной воды.

Методика выполнения 1. Культура микобактерий на среде Левенштейна–Йенсена, возраст 4– 5 недель.  ВМетодика выполнения 1. Культура микобактерий на среде Левенштейна–Йенсена, возраст 4– 5 недель. В пробирку с культурой налить 2 мл стерильной дистиллированной воды. Пробирки переместить в наклонное положение так, чтобы вода покрывала всю поверхность с выросшей культурой. Инкубировать при температуре 37 °С в течение 20– 24 час. 2. На следующий день отсасывают пипеткой по 1 мл экстракта ниацина в пробирки 13× 100 мм. 3. В каждую пробирку закапывают приготовленные реактивы в строго установленном порядке: а) раствор соляной кислоты – 1 капля; б) раствор роданистого аммония – 1 капля; в) раствор хлорамина – 8 капель (0, 5 мл); г) раствор едкого натра – 5 капель (0, 2 мл); д) раствор барбитуровой кислоты – 5 капель (0, 2 мл). 4. Пробирки с экстрактом ниацина и реагентами подогреваем на водяной бане 60 °С в течение 2– 5 мин. Наблюдаем появление розового окрашивания жидкости – положительный результат у МБТ. Назад

    Определение потребности в кислороде Известно, что M. bovis относится к Определение потребности в кислороде Известно, что M. bovis относится к микроаэрофилам. Уменьшенная потребность в кислороде проявляется при росте на полужидкой среде Лебека. МБТ дают на этой среде поверхностный пленочный рост, а M. bovis растут, отступив на 1 см вглубь от поверхности среды в виде беловатого облачка. Среда ЛЕБЕКА Реактивы 1. Приготовить навески: L-аспарагин – 0, 4 г Двузамещенный фосфорнокислый калий (К 2 НРО 4) – 0, 05 Лимонная кислота – 0, 2 г Магний сернокислый (Mg. SO 4 × 6 H 2 O) – 0, 05 г Аммоний лимоннокислый – 0, 005 г Глицерин – 6, 0 мл 2. Растворить приготовленные реактивы в 80 мл дистиллированной воды, нагревая для улучшения растворения. Прибавить глицерин и установить (с помощью едкого натра и индикаторной бумажки) р. Н 7, 2. 3. Добавить 2 г простого агара (агар-агар), для растворения агара в течение 1 часа прогревать содержимое колбы на водяной бане, многократно взбалтывая. 4. Стерилизовать при 1 атмосфере в течение 30 мин, охладить раствор до 50 °С. 5. В пробирки разлить по 0, 5 мл инактивированной сыворотки крупного рогатого скота и подогреть на водяной бане до 50 °С. Вместо бычьей сыворотки можно использовать сыворотку человека, кролика и морской свинки. 6. В пробирки с сывороткой добавить по 4 мл среды при температуре 50 °С. Легким покачиванием пробирок перемешать сыворотку со средой. Среда должна быть прозрачной Анаэростат

Методика выполнения По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевают на приготовленнуюМетодика выполнения По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевают на приготовленную среду. Инкубировать в термостате при температуре 37 °С в течение 3– 4 недель. Для контроля качества использовать M. tuberculosis H 37 Rv и M. bovis. При просмотре выросших культур определяем характер роста и расположение его в пробирке. МБТ дают поверхностный рост. M. bovis растут в глубине среды на 1 см от ее поверхности в виде белого облачка Назад

Определение способности роста культуры на среде с гидразид тиофен-2 -карбоксиловой кислотой (тсн) Метод используетсяОпределение способности роста культуры на среде с гидразид тиофен-2 -карбоксиловой кислотой (тсн) Метод используется для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулезного комплекса. M. tuberculosis резистентны к ТСН и дают хороший рост на этой среде. M. bovis и M. bovis-BCG чувствительны к ТСН и не растут на среде, содержащей это соединение. Реактивы 1. Среда Левенштейна-Йенсена 600 мл (до свертывания). 2. Гидразид тиофен-2 -карбоксиловой кислоты. 3. Приготовить навеску ТСН 20 мг, растворить в 20 мл стерильной дистиллированной воды. Получили разведение 1000 мкг/мл. Раствор А. 4. К 12 мл стерильной дистиллированной воды прибавить 3 мл раствора А. Получили разведение 200 мкг/мл. Раствор Б. 5. Приготовление среды Левенштейна–Йенсена с ТСН: a) разведение – 199 мл среды + 1 мл раствора Б – разведение 1 мкг/мл; b) разведение – 195 мл среды + 5 мл раствора Б – разведение 5 мкг/мл; c) контрольная пробирка со средой без реактива. 6. Опытные и контрольную среды разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при температуре 85 °С в течение 45 мин.

 Методика выполнения По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевается на Методика выполнения По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевается на поверхность среды. Инкубация при температуре 37 °С. Просмотр роста культур через 3– 4 недели. Определение чувствительности микобактерий к ТСН проводится одновременно с определением их лекарственной устойчивости. Метод используется для дифференциации микобактерий туберкулезного комплекса. М. tuberculosis устойчивы ко всем концентрациям ТСН, M. bovis чувствительны к ТСН в концентрации 1 и 5 мкг/мл (следует помнить, что M. bovis иногда дает слабый рост на среде с концентрацией 1, 0 мкг/мл, но никогда не растет на среде с 5 мкг/мл). M. bovis-BCG чувствителен ко всем испытуемым концентрациям Назад

Определение способности роста культуры на среде с никотинамидом M. tuberculosis чувствительны к никотинамиду. Определение способности роста культуры на среде с никотинамидом M. tuberculosis чувствительны к никотинамиду. M. bovis и вакцинный штамм M. bovis-BCG обладают естественной резистентностью к никотинамиду. На этом свойстве основана дифференциация туберкулезного комплекса. реактивы 1. Среда Левенштейна–Йенсена (до свертывания). 2. Никотинамид. 3. Приготовление основного раствора никотинамида: навеску никотинамида 1000 мг растворить в 10 мл стерильной дистиллированной воды; стерилизовать через бактериальный фильтр или кипячением на водяной бане при 100 °С в течение 30 мин. 4. Приготовление рабочего раствора: Раствор А – к 4 мл дистиллированной воды прибавить 1 мл основного раствора. Разведение 20 мг/мл. Раствор Б – к 3 мл дистиллированной воды прибавить 2 мл основного раствора. Разведение 40 мг/мл. 5. Приготовление среды с никотинамидом: a) к 95 мл среды Левенштейна–Йенсена прибавить 5 мл рабочего раствора А; конечная концентрация – 1 мг/мл; b) к 95 мл среды Левенштейна–Йенсена прибавить 5 мл рабочего раствора Б; конечная концентрация – 2 мг/ мл; c) одновременно приготовить 100 мл контрольной среды Левенштейна–Йенсена. Опытные и контрольную среды разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при температуре 85 °С в течение 45 мин. По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевается на приготовленные среды, инкубация при температуре 37 °С в течение 3 недель. Назад

Определение чувствительности к циклосерину У всех штаммов M. bovis-BCG отмечается устойчивость к 30– 50Определение чувствительности к циклосерину У всех штаммов M. bovis-BCG отмечается устойчивость к 30– 50 мкг/мл циклосерина. Эта биологическая особенность вакцинного штамма BCG является важным диагностическим тестом в его идентификации. Реактивы 1. Среда Левенштейна–Йенсена 200 мл (до свертывания). 2. Циклосерин. 3. Навеску циклосерина 20 мг растворить в 5 мл дистиллированной воды, разведение 4000 мкг/мл. 4. К 99 мл среды Левенштейна–Йенсена прибавить 1 мл приготовленного раствора. Конечная концентрация препарата – 40 мкг/мл. 5. Одновременно приготовить 100 мл контрольной среды. 6. Опытную и контрольную среды разлить в пробирки по 5 мл, стерилизовать при температуре 85 °С в течение 45 мин. По 0, 2 мл исследуемой культуры в стандартном разведении засевается на приготовленные среды, инкубация при температуре 37 °С в течение 3 недель. M. tuberculosis и M. bovis чувствительны к циклосерину, вакцинный штамм BCG дает рост на среде с циклосерином. Назад

Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса Биохимические тесты и свойства микобактерий M.  Tuberculosi s M.Дифференциация микобактерий туберкулезного комплекса Биохимические тесты и свойства микобактерий M. Tuberculosi s M. Bovis-BCG Восстановление нитратов + — — Ниациновый тест + — — Потребность в кислорое Аэрофил микроаэрофил Аэрофил Рост на среде Левенштейна-Йенсена Пышный эугоническ ий Стелющийся дисгонический Пышный эугонический Чувствительность к пиразинамиду S R R Чувствительность к ТСН: 1 мкг/мл 5 мкг/мл R R V S S S Чувствительность к циклосерину 40 мкг/мл S S R Примечание. S – чувствительный штамм R – устойчивый штамм V – варьирует результат

Ввиду появления случаев БЦЖ-осложнений у детей необходимо проводить дифференциальную диагностику между M. tuberculosis иВвиду появления случаев БЦЖ-осложнений у детей необходимо проводить дифференциальную диагностику между M. tuberculosis и M. bovis-BCG. С этой целью рекомендуется использовать три теста: определение нитратредуктазы, ниацина и способность к росту на среде с никотинамидом или циклосерином. Культуры M. bovis. BCG не имеют ниацина, не восстанавливают нитраты и дают рост на этих средах. Культуры, не поддающиеся идентификации в условиях лаборатории противотуберкулезного диспансера, рекомендуется направлять в бактериологические региональные референс-лаборатории для проведения углубленной идентификации. План

3. 6. 4 Внутрилабораторный контроль качества предварительной идентификации и определения вида микобактерий Для внутрилабораторного3. 6. 4 Внутрилабораторный контроль качества предварительной идентификации и определения вида микобактерий Для внутрилабораторного контроля качества проводимых процедур одновременно с диагностическими пробами необходимо тестировать контрольные культуры M. tuberculosis H 37 Rv, M. bovis и M. fortuitum или M. gordonae. В связи с этим необходимо вести музей этих культур. Следует обратить внимание на то, что M. fortuitum, так же, как и M. tuberculosis, дает положительную нитратредуктазную реакцию. Результаты внутрилабораторного контроля качества исследований должны регистрироваться в специальном журнале или в журнале регистрации исследований на лекарственную чувствительность и видовую идентификацию. План

3. 7 Регистрация бактериологических исследований и их результатов В отличие от исследований методом прямой3. 7 Регистрация бактериологических исследований и их результатов В отличие от исследований методом прямой микроскопии при регистрации бактериологических исследований каждому исследованию диагностического материала присваивается индивидуальный номер. Все поступившие в лабораторию образцы (за исключением выбракованных) должны быть зарегистрированы в Журнале регистрации исследований. Исследованию поступившего образца должен быть присвоен лабораторный номер. Нумерация исследований должна начинаться в первый рабочий день года и продолжаться непрерывно в течение всего года.

Регистрационный номер, присвоенный образцу,  должен быть нанесен на контейнер с образцом и сопровождатьРегистрационный номер, присвоенный образцу, должен быть нанесен на контейнер с образцом и сопровождать его на всех этапах бактериологического исследования: на центрифужной пробирке, в которой образец центрифугируют после деконтаминации, на пробирках с ростовой средой, на предметных стеклах, на которые наносится материал для микроскопии перед посевом и для подтверждения принадлежности выросшей культуры к кислотоустойчивым бактериям (окраска по Цилю–Нильсену).

Данные о враче или медицинском учреждении необходимы для того,  чтобы: 1. передать результатыДанные о враче или медицинском учреждении необходимы для того, чтобы: 1. передать результаты исследования направившему материал врачу; 2. в случае выбраковки результатов (пророст, неудовлетворительная деконтаминация, прочее) сообщить о случившемся лечащему врачу и совместно принять решение о целесообразности повторного исследования. В графе «Диагностический материал» указывается вид диагностического материала в соответствии с направлением. В графе «Цель исследования» отмечают галочкой случаи ранее не леченных (н/л) и ранее леченных (р/л) больных в соответствии с отметкой в направлении. В случае контроля химиотерапии в соответствующих клетках формы (н/л или р/л) указывают регистрационный номер больного (из направления). Данные о виде диагностического материала и целях исследования необходимы для проведения ретроспективного анализа эффективности работы лаборатории.

В графе «Результат микроскопии»  указывают результат микроскопии препаратов из диагностического материала (прямая микроскопия)В графе «Результат микроскопии» указывают результат микроскопии препаратов из диагностического материала (прямая микроскопия) или из осадка деконтаминированного материала после центрифугирования в соответствии с полуколичественной градацией. В графе «Регистрации роста» указывается интенсивность роста для каждой из использованных сред по полуколичественной шкале. «Интенсивность роста» : (1+) 1 – 20 КОЕ; (2+) 21 – 100 КОЕ; (3+) > 100 КОЕ.

В журнале необходимо также зарегистрировать время появления роста или,  в случае отсутствия роста,В журнале необходимо также зарегистрировать время появления роста или, в случае отсутствия роста, даты выдачи заключения об этом. Прежде чем дать отрицательный результат, необходимо убедиться в отсутствии роста очень медленно растущих микобактерий после 10 недель культивирования. В лабораториях третьего уровня дополнительно целесообразно вести Журнал регистрации нетуберкулезных микобактерий. На каждого пациента, из диагностического материала которого выделены культуры микобактерий, в лаборатории должна быть заведена карточка в которой помимо паспортных данных и данных о заболевании бактериовыделителя регистрируются результаты всех бактериологических исследований (в том числе и отрицательных при контроле химиотерапии), проведенных в течение его лечения.

Результаты исследования не выдаются на руки пациенту, а передаются в направившее материал на исследованиеРезультаты исследования не выдаются на руки пациенту, а передаются в направившее материал на исследование медучреждение или лечащему врачу. Сроки выдачи результатов: микроскопия (из осадка) – 2 рабочих дня, посев – 2– 10 недель, лекарственная чувствительность – в соответствии с применяемым методом исследования. Сроки выдачи результатов должны быть утверждены и указаны в Руководстве по обеспечению качества каждой лаборатории. План

Форма 1. Лабораторный журнал регистрации анализов (баклаборатория противотуберкулезной службы) Лаб.  номе р ДатФорма 1. Лабораторный журнал регистрации анализов (баклаборатория противотуберкулезной службы) Лаб. номе р Дат а ФИО пациента По л Год рожден ия Полный адрес ФИО направи вшего врача Диаг ности ч. мате риал План

Лабораторный журнал регистрации анализов,  страница 2 н/с – новый случай – ранее неЛабораторный журнал регистрации анализов, страница 2 н/с – новый случай – ранее не леченный пациент р/л – ранее леченный пациент

Форма 2. Лабораторный журнал регистрации лекарственной чувствительности выделенных культур План Форма 2. Лабораторный журнал регистрации лекарственной чувствительности выделенных культур План

Форма 3. Бактериограмма ФИО пациента       Год рожд. Форма 3. Бактериограмма ФИО пациента Год рожд. Пол Адрес . Название ЛПУ Диагноз Дата постановки на учет Рег. № пациента Тип больного : «впервые выявленный (новый случай)» «Рецедив» «Лечение после неэфф. курса имиотерапии» «Лечение после прерывания курса химиотерапии» «Переведенный» «Прочие» . Дата начала лечения . План

Форма 4. ТБ лабораторная форма Направление на проведение анализа Название лечебного учреждения  Форма 4. ТБ лабораторная форма Направление на проведение анализа Название лечебного учреждения . ФИО больного Год рождения Пол . Адрес Район . Классификация заболевания: Легочный Внелегочный . Причины проведения анализа: Диагностика Контроль химиотерапии . Категория пациента: Новый случай Ранее лечившийся . Лаб. Номер образца Районный рег. номер больного . Вид анализа: Бактериоскопия Посев . Дата сбора материала Подпись лечащего врача . ……………………. . линия отрыва………………………………. План

Результат микробиологического исследования на МБ Микроскопия по Цилю–Нильсену (люминесцентный метод) Лабораторный номер образца МатериалРезультат микробиологического исследования на МБ Микроскопия по Цилю–Нильсену (люминесцентный метод) Лабораторный номер образца Материал Название учреждения Фамилия И. О. Адрес больного Причина проведения анализа Диагностика _____Контр/х______ Новый случай_______Р/леченный_____ Результат ______________ Дата ____ «______» _____200 г. Подпись __________ Результат микробиологического культурального исследования ( посев на МБТ) Лабораторный номер образца Материал Название учреждения Фамилия И. О. Адрес больного Причина проведения анализа Диагностика _____Контр/х______ Новый случай_______Р/леченный____ Результат ______________ Дата ____ «______» _____200 г. Подпись __________

Форма 5. ТБ лабораторная форма результатов видовой идентификации и лекарственной чувствительности Определение лекарственной чувствительностиФорма 5. ТБ лабораторная форма результатов видовой идентификации и лекарственной чувствительности Определение лекарственной чувствительности МБТ Лабораторный номер исследования _____ Материал ____ __ Дата____ Название лечебного учреждения: ______________________ _ . Фамилия И. О. больного: ___________ Год рождения: _____ _ Пол: м/ж . Адрес (полностью): ___________________ Район: ______ . Классификация заболевания: Легочный______ Внелегочный ____ . Причины проведения анализа: Диагностика ___ Контр. химиотерапии ___ Категория пациента: _____ новый случай _____ ранее лечившийся . Выделена культура ___________________________ _ (указать вид культуры или комплекс микобактерий туберкулеза – МБТ) Препараты (мкг/мл): Изониазид 1 Рифампицин 40 Этамбутол 2 Стрептомицин 10 Канамицин 30 Этионамид 30 Циклосерин 30 Капреомицин 30 Офлоксацин 2 ПАСК 1 Дата ____ «__» _____200__ г. Подпись __________ План

Действующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Катионные поверностно активные веществаДействующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Катионные поверностно активные вещества (КПАВ): четвертичны е аммониевые соединения; соли аминов; производны е гуанидина и пр. Бактерии, грибы, некоторые вирусы Не повреждают обрабатываемые объекты; стабильны при хранении; имеют относительно низкую токсичность, особенно при ингаляционном воздействии; наличие моющих свойств; остаточное антимикробное действие Избирательное вирулицидное и слабое туберкулоцидное действие, отсутствие спороцидного действия; нейтрализация мылами и синтетическими моющими стредствами Дезинфекци я поверхносте й в помещениях , предметов обстановки, аппаратов, приборов, санитарно-т ехнического оборудовани я Хлорактивн ые соединения Бактерии, вирусы, грибы, споры микроорган измов Низкая стоимость; широкий спектр антимикробного действия, включая микобактерии; высокая активность и быстрота действия; наличие дезодорирующего и отбеливающего эффекта Снижение активности в присутствии органических веществ; резкий запах; раздражающее действие на слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей; образование в воде устойчивых галогеноорганическ их соединений Дезинфекци я санитарно-т ехнического оборудовани я, выделений, биологическ их жидкостей, медицински х отходов и других биологическ их субстратов. Таблица № 1 Основные характеристики действующих веществ дезинфицирующих средств

Действующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Кислородосо держащие соединения (перикисьДействующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Кислородосо держащие соединения (перикись водорода, пероксогидр ат фторида калия и др. ) Бактерии, вирусы, грибы, споры микроорган измов Широкий спектр антимикробного действия, включая микобактерии; отсутствие запаха; распад в окружающей среде на нетоксические продукты – молекулярный кислород и воду Проявление антимикробного действия в высоких концентрациях; раздражающее действие на слизистые оболочки и кожу; повреждающее действие на металлы, ткани и другие материалы; низкая стабильность Дезинфекци я, предстерили зационная очистка и стерилизаци я ИМН надкислоты Бактерии, вирусы, грибы, споры микроорган измов Широкий спектр антимикробного действия, включая микобактерии; высокая активность и быстрота действия. Резкий запах; раздражающее действие на слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей; возможно повреждающее действие на некоторые металлы; низкая стабильность Дезинфекци я и стерилизаци я ИМН

Действующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Альдегиды (глутаровый,  ортофталевДействующ ее вещество Активность Преимущества Недостатки Преимущес -твенное испо-льзова ние Альдегиды (глутаровый, ортофталев ый и др. ) Бактерии, вирусы, грибы, споры микроорган измов Широкий спектр антимикробного действия, включая микобактерии; хорошая совместимость с металлами Высокая токсичность; иногда необходима активация средства перед применением; фиксирует белковые загрязнения; сорбируется материалами, в связи с чем требует тщательного отмыва с обработанных объектов, длительного проветривания. Дезинфекци я, предстерили зационная очистка и стерилизаци я ИМН фенолы Бактерии, грибы, некоторые вирусы Эффективность в отношении микобактерий; не повреждает обрабатываемые поверхности Резкий запах; избирательное действие на вирусы, отсутствие спороцидного действия Дезинфекци я поверностей в помещения, выделений больных Спирты (этиловый, пропиловый и др. ) Бактерии, вирусы Относительно низкая токсичность Слабое туберкулоцидное и фунгицидное действие; отсутствие спороцидного действия; фиксирует белковые загрязнения, пожароопасность Кожные антисептики , дезинфекци я небольши по площади поверхносте й План

Таблица № 2 список видов диагностических материалов (Приложение 1 к Приказу Минздравсоцразвития № 690Таблица № 2 список видов диагностических материалов (Приложение 1 к Приказу Минздравсоцразвития № 690 от 02. 10. 2006, учетная форма № 05 -ТБ/у 1 Мокрота 14 Спиномозговая жидкость 2 Отделяемое верхних дыхательных путей, полученное после аэрозольной ингаляции 15 Плевральная жидкость 3 Промывные воды бронхов 16 Перикардиальная жидкость 4 Бронхоальвеолярные смывы(БАС) 17 Синовиальная жидкость 5 Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) 18 Асцитическая жидкость 6 Материал, полученный при бронхоскопии 19 Кровь 7 Транстрахеальный биоптат 20 Гной, гнойно-некротические массы 8 Внутрилегочной биоптат 21 Пунктат костного мозга 9 Аспират из бронхов 22 Резецированная ткань 10 Мазки из гортани 23 Грануляции 11 Экссудат 24 Соскоб синовиальных оболочек 12 Промвные воды желудка 25 Лимфатический узел или его пнктат 13 моча 26 другие План

Приложение. Стандарты мутности 1. Соотношение стандартов мутности Мак. Фарланда и ГНИИСК им. Л. А.Приложение. Стандарты мутности 1. Соотношение стандартов мутности Мак. Фарланда и ГНИИСК им. Л. А. Тарасевича Стандарт Мак. Фарланд Стандарт ГНИИС Единицы мутности Предполагаемая концентрация микроорганизмо в (число микробных тел / мл) Единицы мутности 0, 5 1, 5× 10⁸ 1, 0 3, 0× 10⁸ 5, 0 2, 0 6, 0× 10⁸ 3, 0 9, 0× 10⁸ 10, 0 4, 0 12, 0× 10⁸ 5, 0 15, 0× 10⁸

2. Приготовление стандарта мутности по Мак. Фарланду в условиях лаборатории В качестве стандарта мутности2. Приготовление стандарта мутности по Мак. Фарланду в условиях лаборатории В качестве стандарта мутности Мак. Фарланда применяется взвесь слаборастворимой в воде соли сульфата бария. Для ее приготовления используют следующие растворы: Ba. Cl 2 × 2 H 2 O – 1% раствор, H 2 SO 4 – 1% раствор Единицы мутности по стандарту Макфарланда Число микробных тел / мл Количество 1% раствора Ba. Cl 2 × 2 H 2 O (мл) Количество 1% раствора H 2 SO 4 (мл) 0, 5 1, 5× 10⁸ 0, 05 9, 95 1, 0 3, 0× 10⁸ 0, 1 9, 9 2, 0 6, 0× 10⁸ 0, 2 9, 8 3, 0 9, 0× 10⁸ 0, 3 9, 7 4, 0 12, 0× 10⁸ 0, 4 9, 6 5, 0 15, 0× 10⁸ 0, 5 9, 5 6, 0 18, 0× 10⁸ 0, 6 9, 4 7, 0 21, 0× 10⁸ 0, 7 9, 3 8, 0 24, 0× 10⁸ 0, 8 9,