ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ ПРАКТИКА Исследование крови является очень важным

ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ ПРАКТИКА Исследование крови является очень важным, а часто и решающим методом в диагностике многих заболеваний. Изменения в состоянии крови тонко отражают физиологические и патологические воздействия на организм. В зависимости от задач выполняется общий клинический анализ крови, биохимический анализ крови и другие методы, позволяющие оценить функциональный статус 19 -1 системы крови.

ОСНОВНЫЕ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ (в международной системе единиц – СИ) Гемоглобин: мужчины 132 -160 г/л; женщины 120 -140 г/л; Эритроциты: мужчины 4, 0 -5, 1 1012/л; женщины 3, 9 -4, 7 1012/л; Цветовой показатель 0, 86 -1, 05 у. е. ; Лейкоциты 4, 0 -8, 8 9/л; 10 Тромбоциты 180 -320 109/л; Скорость оседания эритроцитов: мужчины 2 -10 мм/час; женщины 2 -14 мм/час; Вязкость крови: 4, 2 -5, 0 у. е. ; плазмы 1, 7 -2, 2; Относительная плотность: крови 1, 05 -1, 06; плазмы 1, 029 -1, 034; эритроцитов 1, 09; Гематокрит: мужчины 0, 4 -0, 48; женщины 0, 36 -0, 42; Активная реакция р. Н: артериальная кровь 7, 30 -7, 42; венозная кровь 7, 27 -7, 3; Точка замерзания крови - 0, 54 -0, 590 о. С Осмотическая резистентность эритроцитов: максимальная 0, 320, 34 % Na. CI; минимальная 0, 46 -0, 48 % Na. CI; 19 -2

19 -3

19 -4

19 -5

19 -6

19 -7

19 -8

19 -9

19 -10

19 -11

19 -12

19 -13

Подсчет эритроцитов В норме в 1 мкл крови человека содержится 4, 5 – 5 млн. эритроцитов (или 4, 5– 5 1012 в 1 л). Для работы необходимы: микроскоп, камера Горяева, смеситель для подсчета эритроцитов, скарификатор, чашка для разбавления цитратной крови, фильтровальная бумага, 3% раствор Na. Cl, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования – человек.

Для того чтобы получить наиболее точные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют следующее правило: «К данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся» .

Подсчитав таким образом сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм 3, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм 3 разведенной крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм 3 цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая: х = (Э 4000 200)/80, где х – искомое число эритроцитов в 1 мм 3 (мкл) цельной крови; Э – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах. В итоге полученное число эритроцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т. е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм 3 (мкл), умножают на 1012. Результаты работы и их оформление. Запишите, сколько эритроцитов содержится в 1 л исследованной крови. Сравните

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ ПО МЕТОДУ САЛИ Гемоглобин – сложный хромопротеид – содержится в эритроцитах. В крови содержится в среднем 14 г% гемоглобина, у женщин – 12, 1– 13, 8, у мужчин – 13, 8– 15, 6 г% (соответственно 121– 138 и 138– 156 г/л). Определение гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет совпадать, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество гемоглобина в стандартном растворе (16, 7 г%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах.

Для работы необходимы: гемометр Сали, стерильный скарификатор, 0, 1 н раствор HCl, фильтровальная бумага, вата, йод, спирт, эфир, дистиллированная вода. Объект исследования – человек. Гемометр Сали (рис. 20) представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены капилляр (с меткой 20 мм 3), стеклянная палочка и пипетка.

Проведение работы. В среднюю пробирку гемометра наливают раствор HCl до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек с помощью фильтровальной бумаги. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотой из верхнего слоя. После того содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну, и оставляют стоять на 8– 10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин.

Затем к раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора станет таким же, как цвет стандартного (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в граммах на 100 г исследуемой крови (при переводе в единицы СИ полученную цифру умножают на 10, получая величину гемоглобина в граммах на 1 л крови). Можно вычислить также относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Результаты работы и их оформление. Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Вычислите относительное процентное содержание гемоглобина следующим образом. Допустим, количество гемоглобина в крови соответствует 14 делениям гемометра. Тогда по пропорции 16, 7 г% – 100% 14, 0 г% – х вычисляем относительное содержание гемоглобина в процентах: x = (100 14, 0)/16, 7. Сравните полученное значение с нормой.

Формула рассчета цветового показателя (ЦП): ЦП = (гемоглобин (г/л) * 3) / первые 3 цифры количества эритроцитов в крови Например, гемоглобин 134 г/л, эритроциты 4, 26 млн/мкл, тогда цветовой показатель равен (134 * 3) / 426 = 0, 94. Цветовой показатель в норме 0, 85 -1, 05. При повышении цветового показателя говорят о гиперхромии эритроцитов, и при снижении — о гипохромии. Именно на основании этих данных можно определить вид анемии. Читайте о диагностике анемии в статье «Диагностика анемии. Какие анализы стоит сдавать? » . В 12 дефицитная анемия, фолиеводефицитная анемия принадлежит к гиперхромным, а железодефицитная и хроническая потгеморрагическая (со сниженным уровнем железа в крови) — к гипохромным.

19 -28

19 -29

19 -30

19 -31

19 -32

19 -33

19 -34

19 -35

19 -36

19 -37

19 -38

19 -39

19 -40

19 -41

19 -42

19 -43

ПОДСЧЕТ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ Подсчет форменных элементов – необходимый и существенный компонент клинического анализа крови. Для подсчета форменных элементов взятую из пальца кровь разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Разбавленной кровью заполняют специальную счетную камеру и подсчитывают под микроскопом число форменных элементов. Зная объем камеры и разбавление крови, вычисляют число кровяных телец в 1 мкл цельной крови (Система SGS). 19 -44

19 -45

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из них дополнительно расчерчены на 16 маленьких. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь – 1/20= = 1/400 мм 2. Объем разведенной крови, помещающийся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм 2 1/10 мм = = 1/4000 мм 3. Перед работой необходимо рассмотреть под микроскопом сетку. 19 -46

Для разбавления крови используют меланжеры, или смесители (рис. 18). Смеситель представляет собой капилляр с расширением в средней части. В расширенном участке находится стеклянная бусинка для перемешивания разведенной крови. На капиллярах нанесена градуировка – метки 0, 5 и 1, 0. Третья метка находится в смесителе: для подсчета эритроцитов – 101, лейкоцитов – 11. Для забора крови на меланжер надевают резиновую грушу, сдавливанием и расправлением которой достигается насасывание в него и крови и 19 -47 разбавляющих растворов.

19 -48

Для подсчета эритроцитов в меланжер набирают кровь до метки 0, 5 и раствор до метки 101, при этом кровь разбавляется в 200 раз. В меланжер для подсчета лейкоцитов набирают кровь до метки 1, а раствор – до 11, при этом кровь разбавляется в 10 раз. При подсчете эритроцитов в качестве разбавляющего раствора применяют 3% раствор Na. Cl. Эритроциты в нем сморщиваются и становятся заметнее. При подсчете лейкоцитов кровь разбавляют 5% раствором уксусной кислоты. В этих условиях эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты (точнее, их ядра). Уксусную кислоту подкрашивают метиленовым синим, при этом ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее. 19 -49

Подсчет эритроцитов В норме в 1 мкл крови человека содержится 4, 5– 5 млн. эритроцитов (или 4, 5– 5 1012 в 1 л). Для работы необходимы: микроскоп, камера Горяева, смеситель для подсчета эритроцитов, скарификатор, чашка для разбавления цитратной крови, фильтровальная бумага, 3% раствор Na. Cl, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования – человек. Проведение работы. Камеру помещают под микроскоп и рассматривают сетку вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец. 19 -50

Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0, 5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с раствором Na. CI, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т. е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол. 19 -51

Для подсчета эритроцитов берут заполненный смеситель, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя III и I пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля втягивается под покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Считать эритроциты лучше при объективе малого увеличения ( 8), 19 -52 но использовать при этом окуляр 15.

Для того чтобы получить наиболее точные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют следующее правило: «К данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся» . 19 -53

Формула для подсчета эритроцитов где: Х - искомое число эритроцитов в 1 мм 3; Э - сумма эритроцитов в 80 малых квадратах; 80 - количество малых квадратов; 200 – разведение крови; 1/4000 - объем малого квадрата Рекомендации к оформлению протокола. При оформлении протокола нарисовать сетку Горяева и вписать в 80 малых квадратов найденное количество эритроцитов. Сравнить результат исследований крови с нормой. При отклонении от нормы указать возможные причины данного несоответствия. 19 -54

Эритроциты подсчитывают в 5 расположенных по диагонали сетки квадратах, разделенных на малые, т. е. в 80 малых квадратах. Для этого под микроскопом находят верхний левый квадрат сетки (разделенный на 16 малых) и подсчитывают число эритроцитов в нем. При этом целесообразно придерживаться определенной последовательности подсчета эритроцитов: ередвигаться п из одного малого квадрата в другой по горизонтали, например, один ряд справа налево, другой ряд слева направо и т. д.

ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТОВ В ИССЛЕДУЕМОЙ КРОВИ. ЦЕЛЬ: Освоить методику подсчета лейкоцитов в камере Горяева, используя знания о функциях лейкоцитов и механизмах регуляции их количества в периферической крови уметь оценивать результаты лабораторного исследования количества лейкоцитов. Методика выполнения работы. Подсчет лейкоцитов производится так же в камере Горяева, но не в малых, а в больших квадратах. Сторона такого квадрата равна 1/5 мм, а объем жидкости над каждым квадратом в камере равен 1/51/51/10=1/250 мм 3. Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 (10) раз 6% раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Уксусная кислота разрушает оболочки эритроцитов, благодаря чему последние не мешают подсчету лейкоцитов, а окраска ядер лейкоцитов метиленовой синью улучшает их видимость. 19 -56

Последовательность выполнения работы. Обработать безымянный палец левой руки спиртом, проколоть скарификатором, снять ватным тампоном каплю крови. Выдавить следующую каплю и натянуть в капилляр смесителя для лейкоцитов до отметки 0, 5. Быстро втянуть раствор уксусной кислоты до метки 11, перемешать кровь с раствором в расширенной части смесителя и заполнить счетную камеру. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении микроскопа (окуляр 15, объектив 20). Сосчитать число лейкоцитов в 25 больших квадратах. Как и при подсчете эритроцитов, учитывают лейкоциты, лежащие внутри квадрата, на левой и верхней границах его и не учитывают те, которые лежат на правой и нижней границах. Вычисляют среднее количество лейкоцитов в одном квадрате. Определить количество лейкоцитов в 1 19 -57 куб. мм. неразведенной крови и в 1 литре (по СИ)

ФОРМУЛА ДЛЯ ВЫЧИСЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ: где: Х - искомое число лейкоцитов в 1 мм 3 крови, Л - сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах, 20 – разведение, 1/250 - объем большого квадрата в мм 3. Рекомендации к оформлению протокола. При оформлении протокола нарисовать сетку Горяева и вписать в 25 больших квадратов найденное количество лейкоцитов. Сравнить результат исследований крови с нормой. При отклонении от нормы указать возможные причины данного несоответствия. 19 -58

19 -59

19 -60