Скачать презентацию ФИЗИОЛОГИЯ ГЕМОСТАЗА Струкова Светлана Михайловна 2 Вторичный гемостаз Скачать презентацию ФИЗИОЛОГИЯ ГЕМОСТАЗА Струкова Светлана Михайловна 2 Вторичный гемостаз

[Медкниги]Физиология гемостаза. Вторичный гемостаз.ppt

  • Количество слайдов: 45

ФИЗИОЛОГИЯ ГЕМОСТАЗА Струкова Светлана Михайловна 2. Вторичный гемостаз. 2. 1. Особенности и фазы процесса ФИЗИОЛОГИЯ ГЕМОСТАЗА Струкова Светлана Михайловна 2. Вторичный гемостаз. 2. 1. Особенности и фазы процесса свертывания крови

Классическая ферментативная теория свертывания крови А. А. Шмидта 1. Зимопластические Са 2+ субстанции Активная Классическая ферментативная теория свертывания крови А. А. Шмидта 1. Зимопластические Са 2+ субстанции Активная форма клеток и тканей ( тромбокиназа) 2. Протромбин Фибринопластическая субстанция (тромбин) 3. Фибриноген Фибрин Александр Шмидт (1831 -1894)

1964 г КАСКАД СВЕРТЫВАНИЯ Earl Davie (University of Washington) Серия реакций протеолиза профермента в 1964 г КАСКАД СВЕРТЫВАНИЯ Earl Davie (University of Washington) Серия реакций протеолиза профермента в фермент, идущих с ускорением

ОСНОВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОЦЕССА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ 1. Ограниченный протеолиз факторов свертывания. 2. Локализация процесса свертывания ОСНОВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОЦЕССА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ 1. Ограниченный протеолиз факторов свертывания. 2. Локализация процесса свертывания на поверхности активированных клеток крови и стенки сосуда. 3. Необходимость кофакторов свертывания, рецепторов, ингибиторов 4. Aктивация механизмов отрицательной и положительной обратной связи, регулирующей образование тромбина.

КИНЕТИКА ТРОМБО- ОБРАЗОВАНИЯ Прижизненный имидж развития тромба в участке механического повреждения артериолы мыши с КИНЕТИКА ТРОМБО- ОБРАЗОВАНИЯ Прижизненный имидж развития тромба в участке механического повреждения артериолы мыши с помощью флуорес. -меченых АВ к : ТФ(зел); Трц (к. ГПIIв)(крас); фибр(гол); Тц-ТФ (жел) ; ТФ-Фр (бирюз); Тц-Фр (малин); Тц-Фр – ТФ(бел) и видео визуализации флуор. конфокал. микроскопией

Локализация свертывания крови на мембране клеток и Tissue factor (TF) is the main trigger Локализация свертывания крови на мембране клеток и Tissue factor (TF) is the main trigger of the coagulation микрочастиц TF– основной триггер процесса CD 40 L

ИНДУКЦИЯ провоспалительными и др. агонистами ЭКСПРЕССИИ РАЗНЫХ ФОРМ ТКАНЕВОГО ФАКТОРА (TF)- TF-связанный с клетками, ИНДУКЦИЯ провоспалительными и др. агонистами ЭКСПРЕССИИ РАЗНЫХ ФОРМ ТКАНЕВОГО ФАКТОРА (TF)- TF-связанный с клетками, TF- ассоциированный с микрочастицами( лейкоцитов, тромбоцитов, EC, VSMC) и образуемый альтернативным сплайсингом (as. TF) растворимый TF

Тканевой фактор (TF)-кофактор FVIIa/FVII и рецептор Легкая цепь X-ray crystal structure of the complex Тканевой фактор (TF)-кофактор FVIIa/FVII и рецептор Легкая цепь X-ray crystal structure of the complex s. TF and i (inhibited)VIIa Гидролиз одной связи Arg 152/Ile 153 в протеазном домене (тяжелая цепь) FVII ведет к образованию F VIIa.

СТРУКТУРА ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ Arg 152/Ile 153 СТРУКТУРА ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ Arg 152/Ile 153

Свойства 4 групп факторов свертывания крови 1. Факторы протромбинового комплекса БЕЛКИ ГЕН /размер (т. Свойства 4 групп факторов свертывания крови 1. Факторы протромбинового комплекса БЕЛКИ ГЕН /размер (т. п. о) t 1/2 жизни Конц(н. М)в плазме/ Mr (k. Da) 1400 / 72 ПРОТРОМБИН (фактор II) 11 p 11 -q 12/21 ФАКТОР VII 13 q 34 / 12. 8 0. 25 10 / 50 ФАКТОР IX Xq 26/34 1. 0 90 / 57 ФАКТОР X 13 q 34 / ПРОТЕИН С 2 q 13 -q 14 / 11 0. 25 60 / 62 ПРОТЕИН S 3 p 11 -q 11/80 1. 75 300 / 69 ПРОТЕИН Z 13 q 3/ 2, 5 2. 5 47 / 62 2. 5 ФУНКЦИИ ПРОФЕРМЕНТ 27 1. 25 170 / 58, 5 ПРОФЕРМЕНТ КОФАКТОР ПРОТЕИНА С КОФАКТОР ингибитора Xa - ZPI

Домены Проферментов. Факторов Свертывания Крови и Участки ограниченного Протеолиза активаторами Домены Проферментов. Факторов Свертывания Крови и Участки ограниченного Протеолиза активаторами

Цикл витамина К и его функция как кофактора γглутамилкарбоксилазы γ 3 3 Вит т Цикл витамина К и его функция как кофактора γглутамилкарбоксилазы γ 3 3 Вит т Варфарин 1. КО –витамин КО(эпоксид)-редуктаза чувствительная к варфарину 2. К- витамин К-редуктаза-устойчивая к варфарину 3. γ-глутамилкарбоксилаза

Флоппаза отвечает за реакцию флип-флоп в мембране клетки и экспозицию на поверхность отрицательно заряженного Флоппаза отвечает за реакцию флип-флоп в мембране клетки и экспозицию на поверхность отрицательно заряженного фосфолипида- фосфатидилсерина(ФС). ФС через Са 2+ связывает с поверхностью клетки факторы протромбинового комплекса, имеющие Гла –домен на N-конце молекулы Фосфатидилсерин

2 ФАЗА РАСПРОСТРАНЕНИЯ ТКАНЕВОЙ ФАКТОР 1 ФАЗА 2 ФАЗА XIa VIIa / VIIa/VII X 2 ФАЗА РАСПРОСТРАНЕНИЯ ТКАНЕВОЙ ФАКТОР 1 ФАЗА 2 ФАЗА XIa VIIa / VIIa/VII X IX IXa Xa X-аза VIIIa ПРОТРОМБИН n. M ТРОМБИН V Va VIIIa PAR 1, TM 1 ФАЗА ИНИЦИАЦИИ X Xa Va ПРОТРОМБИН >n. M ТРОМБИН Фибриноген ФИБРИН Протромбиназа

2. Кофакторы и рецепторы Белки Ген /размер (т. п. о) t 1/2 Конц(н. М)в 2. Кофакторы и рецепторы Белки Ген /размер (т. п. о) t 1/2 Конц(н. М)в плазме/ жизни Функции Mr (k. Da) Фактор V 1 q 23/80 0. 5 20/330 Кофактора Xa Фактор VIII Xq 28/186 0. 3 -0. 5 0. 7/ 285 Кофактора IXa 1 p 22 -p 21/12. 4 -/44 Кофактор и рецептор фактора VII 20 p 11. 2/ 4 -/100 Кофактор и рецептор тромбина Тканевой фактор Тромбомодулин

Фаза распространения FVIII Фаза распространения FVIII

Активация факторов V и VIII тромбином Активация факторов V и VIII тромбином

СТРУКТУРА FV И FVa СТРУКТУРА FV И FVa

ЛОКАЛИЗАЦИЯ ФАКТОРОВ Vа И ФXа на МЕМБРАНЕ Фактор Vа, гетеродимер (А 1 -А 2/А ЛОКАЛИЗАЦИЯ ФАКТОРОВ Vа И ФXа на МЕМБРАНЕ Фактор Vа, гетеродимер (А 1 -А 2/А 3 -С 1 -С 2), состоит из тяжелой(A 1 -A 2) и легкой цепей(A 3 -C 1 -C 2), стабилизированных Са 2+. Участки связывания протромбина и фактора Xa локализованы в тяжелой цепи фактора Va ( А 1 и А 2), а за связывание с фосфолипидами мембраны клеток отвечают участки легкой цепи. (С 1 и С 2)

Ассамблеи факторов (VIIa, IXa и Xa )с рецепторами (TF) и кофакторами (VIIIa и Va) Ассамблеи факторов (VIIa, IXa и Xa )с рецепторами (TF) и кофакторами (VIIIa и Va) свертывания крови на поверхности клеток тенназа протромбиназа ТРЕТЬЯ ОСОБЕННОСТЬ ПРОЦЕССА СВЕРТЫВАНИЯнеобходимость КОФАКТОРОВ или РЕЦЕПТОРОВ - ФАКТОРОВ Vа , VIIIа и ТКАНЕВОГО ФАКТОРА (TF)

Ассамблея факторов IXa и VIIIa (тенназа), активирующих фактор X на мембране тромбоцита Ассамблея факторов IXa и VIIIa (тенназа), активирующих фактор X на мембране тромбоцита

СТРУКТУРА, БИОСИНТЕЗ ПРОТРОМБИНА И ОБРАЗОВАНИЕ ТРОМБИНА Аминокислотная последовательность препротромбина СТРУКТУРА, БИОСИНТЕЗ ПРОТРОМБИНА И ОБРАЗОВАНИЕ ТРОМБИНА Аминокислотная последовательность препротромбина

МЕХАНИЗМ АКТИВАЦИИ ПРОТРОМБИНА МЕХАНИЗМ АКТИВАЦИИ ПРОТРОМБИНА

3. Факторы контактной фазы 4 q 35/23 Фактор XI 2. 53. 3 30 3. Факторы контактной фазы 4 q 35/23 Фактор XI 2. 53. 3 30 / 160 Профермент Фактор XII 5 q 33 -qter/12 2 -3 375 / 78 Профермент Прекалли- креин 4 q 34 -q 35 / 22 Профермент 450 / 82 Прекалликреин 4. Субстрат и профермент Фибриноген 4 q 23 -q 32 / 50 3 -5 Фактор XIIIa 6 p 24 -p 25 160 9 -10 8800 /340 70 / 320 Cтруктурный Белок (фактор I) Профермент

Контактная активация свертывания крови инициируется in vitro при контакте плазмы с отрицательно заряженной поверхностью Контактная активация свертывания крови инициируется in vitro при контакте плазмы с отрицательно заряженной поверхностью полифосфаты тромбо цит Gailani , Renne, 2007 модиф. PRCP- пролилкарбоксипептидаза, ВМК- высокомолекулярный кининоген, УК-урокиназа,

Активация каликреин-кининовой системы и фактора XII PRCP U-PAR-рецептор активатора плазминогена урокиназного типа PRCP-пролилкарбоксипептидаза g. Активация каликреин-кининовой системы и фактора XII PRCP U-PAR-рецептор активатора плазминогена урокиназного типа PRCP-пролилкарбоксипептидаза g. Clq. R –рецептор q-субъединицы 1 компонента комплемента HMK-высокомолекулярный кининоген PK-прекалликреин CK 1 -цитокератин 1

АКТИВАЦИЯ ТРОМБОЦИТОВ И ДВУХ ПУТЕЙ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ( внутреннего и TF-пути) НА ПЛАТФОРМЕ NETs АКТИВАЦИЯ ТРОМБОЦИТОВ И ДВУХ ПУТЕЙ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ( внутреннего и TF-пути) НА ПЛАТФОРМЕ NETs

3. ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР ПРОЦЕССОВ СВЕРТЫВАНИЯ, ВОСПАЛЕНИЯ и др. сопряженных процессов 3. ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР ПРОЦЕССОВ СВЕРТЫВАНИЯ, ВОСПАЛЕНИЯ и др. сопряженных процессов

ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР СВЕРТЫВАНИЯ и ВОСПАЛЕНИЯ ++ СВЕРТЫВАНИЕ - Активация тромбоцитов, Освобождение PGI ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР СВЕРТЫВАНИЯ и ВОСПАЛЕНИЯ ++ СВЕРТЫВАНИЕ - Активация тромбоцитов, Освобождение PGI 2 Факторов V, VIII, XIII Активация Протеина С(PC) Образование фибрина Антикоагулянт Прокоагулянт ТРОМБИН Экспрессия Р, Е-селектинов Экспонирование PAF ЭК Стимуляция пролиферации Стимуляция ангиогенеза Хемотаксис лейкоцитов Ускорение заживления кожных ран Освобождение цитокинов (IL 6, IL 8) Стимуляция освобождения NO ЭК, тучными клетками и МО Освобождение факторов роста (PDGF) ЭК и тромбоцитами Дестабилизация эндотелиального барьера ++ ВОСПАЛЕНИЕ -

СТРУКТУРА ТРОМБИНА В КОМПЛЕКСЕ С ИНГИБИТОРОМ Di Cera, 2008 Тромбин + S 195, H СТРУКТУРА ТРОМБИНА В КОМПЛЕКСЕ С ИНГИБИТОРОМ Di Cera, 2008 Тромбин + S 195, H 57 и D 102 - Активный центр тромбина АВЕ I-анионсвязывающий экзосайт 1, (Exosite. I)-Arg 68, Lys 154 ; ABEII- анионсвязывающий экзосайт 2 Arg 89, Lys 174 Arg 245, Lys 247, Lys 248, Lys 252

Структура молекулы тромбина: активный центр и дополнительные участки связывания рецепторов и субстратов АВЕ I-анионсвязывающий Структура молекулы тромбина: активный центр и дополнительные участки связывания рецепторов и субстратов АВЕ I-анионсвязывающий экзосайт 1; ABEII- анионсвязывающий экзосайт 2

АЛЛОСТЕРИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОНФОРМАЦИИ МОЛЕКУЛЫ ТРОМБИНА ПРИ СВЯЗЫВАНИИ ИОНОВ Nа ОПРЕДЕЛЯЮТ ЕГО ПРО- ИЛИ АНТИКОАГУЛЯНТНЫЕ АЛЛОСТЕРИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОНФОРМАЦИИ МОЛЕКУЛЫ ТРОМБИНА ПРИ СВЯЗЫВАНИИ ИОНОВ Nа ОПРЕДЕЛЯЮТ ЕГО ПРО- ИЛИ АНТИКОАГУЛЯНТНЫЕ ФУНКЦИИ Связывание тромбином Nа+ приводит к изменению конформации молекулы от «медленной» (свободной от Na+) формы к «быстрой» (cвязанной с Na+) и повышению скорости гидролиза фибриногена и др прокоагулянтных специфических субстратов и рецепторов.

ПРЕВРАЩЕНИЕ ФИБРИНОГЕНА В ФИБРИН Формула фибриногена (A B γ)2 Домены D-E-D Стадии превращения ПРЕВРАЩЕНИЕ ФИБРИНОГЕНА В ФИБРИН Формула фибриногена (A B γ)2 Домены D-E-D Стадии превращения фибриногена в фибрин 1. Отщепление тромбином Nконцевых фибринопептидов – 2 А и 2 В от A - и B - цепей фибриногена; 2. Спонтанная полимеризация фибрин-мономеров 3. Стабилизация полимеров изопептидными связями

Связывание активированных фибринмономеров Связывание активированных фибринмономеров

ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ И СТАБИЛИЗАЦИЯ ФИБРИНА ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ И СТАБИЛИЗАЦИЯ ФИБРИНА

ПРЕВРАЩЕНИЕ ФАКТОРА XIII В АКТИВНУЮ ФОРМУ-ТРАНСГЛУТАМИНАЗУ ПРЕВРАЩЕНИЕ ФАКТОРА XIII В АКТИВНУЮ ФОРМУ-ТРАНСГЛУТАМИНАЗУ

СТАДИИ АКТИВАЦИИ ФАКТОРА XIII СТАДИИ АКТИВАЦИИ ФАКТОРА XIII

ТРОМБИН АКТИВИРУЕТ КЛЕТКИ свертывающей, иммунной, сердечнососудистой, нервной и др систем MC- тучные клетки, SMCгладкомышечные ТРОМБИН АКТИВИРУЕТ КЛЕТКИ свертывающей, иммунной, сердечнососудистой, нервной и др систем MC- тучные клетки, SMCгладкомышечные клетки, MC THROMBIN MC СМ- кардиомиоциты Ruf (2003)

АКТИВАЦИЯ PAR РЕЦЕПТОРОВ Агонисты PAR 1 ТРОМБИН , АРС Трипсин, Факторы VIIa/TF/FXa, Гранзим А, АКТИВАЦИЯ PAR РЕЦЕПТОРОВ Агонисты PAR 1 ТРОМБИН , АРС Трипсин, Факторы VIIa/TF/FXa, Гранзим А, Плазмин Агонисты PAR 2 ТРИПСИН, Триптаза ТК, Факторы Xa, TF/VIIa, ММР Агонист PAR 3 Тромбин Агонисты PAR 4 ТРОМБИН Катепсин G, Факторы VIIa/X

АГОНИСТЫ PAR АКТИВИРУЮТ ВОСПАЛЕНИЕ, РЕПАРАЦИЮ ТКАНЕЙ … АГОНИСТЫ PAR АКТИВИРУЮТ ВОСПАЛЕНИЕ, РЕПАРАЦИЮ ТКАНЕЙ …

Дугина, Струкова , 2002 Дугина, Струкова , 2002

Свертывание Воспаление Репарация тканей Протеазы- активаторы ТРОМБИН, Xa, VIIa, АРС Протеазы –ингибиторы Кат С, Свертывание Воспаление Репарация тканей Протеазы- активаторы ТРОМБИН, Xa, VIIa, АРС Протеазы –ингибиторы Кат С, Плазмин, Эластаза Рецепторы PARs PAR 1, PAR 3, PAR 4 ; PAR 2, ? Корецепторы- TF, GP 1 b, EPR 1 , TM, EPCR, ? ? ? Нейрогенное воспаление, выживание клеток, боль

АПОПТОЗ, РОСТ И ПОДВИЖНОСТЬ КЛЕТОК, ИММУННЫЕ ОТВЕТЫ, ВОСПАЛЕНИЕ И НЕЙРОВОСПАЛЕНИЕ, РЕПАРАЦИЮ ТКАНЕЙ АПОПТОЗ, РОСТ И ПОДВИЖНОСТЬ КЛЕТОК, ИММУННЫЕ ОТВЕТЫ, ВОСПАЛЕНИЕ И НЕЙРОВОСПАЛЕНИЕ, РЕПАРАЦИЮ ТКАНЕЙ

Функции тромбина и других протеиназ гемостаза в ЦНС FXa Noorbakhsh et al　(2003), Kiseleva Функции тромбина и других протеиназ гемостаза в ЦНС FXa Noorbakhsh et al　(2003), Kiseleva et al, (2005), Strukova et al(2006), Gorbacheva et al(2007)