Федеральная целевая программа Научные и научно-педагогические кадры инновационной

Федеральная целевая программа «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 - 2013 годы Проект «Изучение закономерностей взаимодействий низкомолекулярных органических соединений и специфических антител с использованием флуоресцентных маркеров и разработка новых методов индивидуального и класс-специфического определения антибиотиков, пестицидов и микотоксинов» Государственный контракт N 16. 740. 11. 0158 от 2 сентября 2010 г. Организация – исполнитель – Институт биохимии им. А. Н. Баха РАН Руководитель работ – д. х. н. , проф. С. А. Еремин

Методы: Ø Поляризационный флуороиммуноанализ Ø Мембранный иммуноанализ с флуоресцентной детекцией Маркеры: Ø Низкомолекулярные флуорофоры (производные флуоресцеина) Ø Коллоидные флуоресцентные наночастицы (квантовые точки) Объекты: Ø Пестициды Ø Микотоксины Ø Антибиотики

ПРИНЦИП ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРОИММУНОАНАЛИЗА Sensors Быстрое вращение Низкая поляризация Медленное вращение Высокая поляризация F – флуоресцентная метка Ag – антиген Ab – антитело F-Ag – трейсер = меченное флуоресцентной меткой производное определяемого вещества

РАЗРАБОТКА И ОПТИМИЗАЦИЯ ПФИА Разработка и оптимизация флуоресцентного иммуноанализа должна включать в себя ряд последовательных процедур: Ø определение аффинности (константы связывания) антител; Ø подбор оптимального трейсера; Ø подбор оптимальной длины и структуры спейсерного мостика; Ø подбор оптимального состава среды проведения анализа а) материал иммунохимического планшета; б) природа и концентрация детергента.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПФИА ГЕРБИЦИДОВ Градуировочные кривые ПФИА метсульфурон-метила и хлорсульфурона Аналитические параметры ПФИА метсульфурон-метила и хлорсульфурона Параметр ПФИА МСМ ПФИА ХС 5, 4± 2, 3 9, 89± 3, 35 123, 3± 7, 8 93, 1± 7, 6 30 -1000 15 -500 0, 91± 0, 03 0, 76± 0, 06 RSD intra, % 0, 9 4, 6 RSD inter, % 7, 1 12, 8 Предел обнаружения, мкг/мл IC 50, мкг/мл Линейный диапазон, мкг/мл Наклон

СПЕЦИФИЧНОСТЬ ПФИА АНТИБИОТИКОВ Коэффициенты перекрестного реагирования Анализируемый Перекрестнореагирующее соединение антибиотик Хлорамфеникол Название CR, % Тиамфеникол <0. 1 Пенициллин G 1 Метициллин 7 Амоксициллин 15 Метампициллин 40 Азлоциллин 30 Бакампициллин 20 Дигидрострептомицин 75 Ампициллин Стрептомицин

Применение квантовых точек как маркеров в иммунохроматографии Коллоидное золото Квантовые точки

Свойства: v поглощение в широком диапазоне длин волн v поглощение, зависящее от размера v высокий квантовый выход v фото- и химическая стабильность Флуоресценция Поглощение v Invitrogen v ядро – Cd. Se, оболочка - Zn. S v водорастворимые с полимерным покрытием v пик эмиссии при 625 нм v свободные СООН – группы v диаметр около 10 нм

Иммунохроматографический анализ хлорамфеникола с использованием квантовых точек Контрольная зона Тестовая зона Визуальная детекция Флуоресцентный ридер Аналитические характеристики тест-системы Предел обнаружения 0, 03 нг/мл* Диапазон определяемых содержаний 0, 04 -3 нг/мл Предел обнаружения при визуальной детекции 1 нг/мл Время анализа 20 минут * ПДК хлорамфеникола в молоке (Сан. Пи. Н 2. 3. 2 1078 -01) составляет 0, 3 нг/мл Berlina A. N. et al. (2013). Analytical & Bioanalytical Chemistry. 405 (14): 4997 -5000

Многозонные тест-системы Предложена высокопроизводительная мультипараметрическая тест-система для одновременного контроля определения 3 -х пороговых уровней ХФ с целью контроля степени превышения нормативов пищевой безопасности. Принцип многозонной тест-системы заключается в расположении на мембране 3 -х тестовых зон, в которых сорбировано различное количество конъюгата ХФ-Белок. С увеличением концентрации ХФ в пробе происходит исчезновение одной или нескольких тестовых зон: § при С(ХФ)= 0 нг/мл наблюдается 3 полосы; § при С(ХФ)= 1 нг/мл наблюдается 2 полосы; § при С(ХФ)= 10 нг/мл наблюдается 1 полосы;

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!