Скачать презентацию Электрофорез История развития Voltaic pile История Скачать презентацию Электрофорез История развития Voltaic pile История

Electrophoresis_ekukaev.pptx

  • Количество слайдов: 22

Электрофорез Электрофорез

История развития (Voltaic pile) История развития (Voltaic pile)

История развития (электроосмос) П. И. Страхов, ректор МГУ (1805/7), декан ФМФ Ф. Ф. Рейс, История развития (электроосмос) П. И. Страхов, ректор МГУ (1805/7), декан ФМФ Ф. Ф. Рейс, профессор МГУ(1801/32) и ММХА (1817/39)

История развития (электроосмос и электрофорез. Ф. Ф. Рейс) История развития (электроосмос и электрофорез. Ф. Ф. Рейс)

Тизелиус, 1937 Уравнение седиментации… Тизелиус, 1937 Уравнение седиментации…

 • • • Ионный состав и ионная сила электрофоретических буферов Температура Значение р. • • • Ионный состав и ионная сила электрофоретических буферов Температура Значение р. Н буфера Напряжение электрического тока Тип, пористость и вязкость неподвижной фазы (электрофоретического геля)

Буферные растворы 1) Слабая к-та + соль этой к-ты СН 3 СООН СН 3 Буферные растворы 1) Слабая к-та + соль этой к-ты СН 3 СООН СН 3 СОО─ + Н+ СН 3 СООNa → CH 3 COO─ + Na+ + основание + к-та ОН─ + Н Н+ + СН СОО─→ СН 3 СООН 3 ОН─ + Н+ → Н 2 О ОН─ + СН 3 СООН → → СН 3 СОО─ + Н 2 О р. Н не меняется

Буферные растворы 2) Слабое основание + соль этого основания NH 4 OH NH 4+ Буферные растворы 2) Слабое основание + соль этого основания NH 4 OH NH 4+ + OH─ NH 4 Cl → NH 4+ + Cl─ + основание + к-та ОН─ + Н H+ + OH─ → H 2 O OH─ + NH 4+ → NH 4 OH H+ + NH 4 OH → NH 4+ + H 2 O р. Н не меняется

Изоэлектрическая точка 1) Z=0, 2) ς=0 - p. I=p. H. Изоэлектрическая точка 1) Z=0, 2) ς=0 - p. I=p. H.

Тип, пористость и вязкость неподвижной фазы (электрофоретического геля) Тип, пористость и вязкость неподвижной фазы (электрофоретического геля)

Виды электрофоретических методов n 1. Электрофорез с подвижной границей (moving boundary electrophoresis, MBE). 2. Виды электрофоретических методов n 1. Электрофорез с подвижной границей (moving boundary electrophoresis, MBE). 2. Дисковый электрофорез (discontinuous electrophoresis, DE). 3. Зоновый электрофорез (zone electrophoresis, ZE). 4. Изоэлектрическое фокусирование (isoelectric focusing, IEF). 5. Электрофорез в полиакриламидном геле (polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE). 6. Двумерное картирование (2 -D maps). 7. Изотахофорез (isotachophoresis, ITP). 8. Иммунофорез (immunoelectrophoresis, IE). 9. Капиллярный электрофорез (capillary electrophoresis, CE).

Электрофорез с подвижной границей (moving boundary electrophoresis, MBE) Разделение ионизированных компонентов на основе их Электрофорез с подвижной границей (moving boundary electrophoresis, MBE) Разделение ионизированных компонентов на основе их электрофоретической подвижности. Можно разделить компоненты, очень сильно отличные по заряду Неподвижная фаза: разгоняющий буфер (1), содержащий предварительно введенный образец, заполненный в U-образную трубку:

Дисковый электрофорез Разделение компонентов на основе двух параметров: поверхностного заряда и молекулярной массы Неподвижная Дисковый электрофорез Разделение компонентов на основе двух параметров: поверхностного заряда и молекулярной массы Неподвижная фаза: разгоняющий гель (1) + концентрирующий гель (2) + гель образца (3)

Концентирирование в DE Концентирирование в DE

Разделение в DE Разделение в DE

Зоновый электрофорез Разделение компонентов смеси на дискретные зоны, стабилизируемые на особых средах с помощью Зоновый электрофорез Разделение компонентов смеси на дискретные зоны, стабилизируемые на особых средах с помощью градиентов плотности (растворов неионизируемых в-в: ЭГ, глицерин, сахароза) Неподвижная фаза = стабилизирующая пористая среда (фильтровальная бумага, ацетат целлюлозы, гель, крахмал, поливинил…)

Изоэлектрическое фокусирование Разделение компонентов на основе различий их изоэлектрических точек (p. I) в равновесном Изоэлектрическое фокусирование Разделение компонентов на основе различий их изоэлектрических точек (p. I) в равновесном градиенте р. Н. Компонент в градиенте р. Н движется до тех пор, пока не достигнет р. Н=p. I, а затем тормозится. Неподвижная фаза = амфолит-носитель: олигопротоносодержащая амино карбоновая кислота, имеющая >4 слабые протеолитические группы

Изотахофорез Разделение компонентов смеси на основе их различных электрофоретических подвижностей, когда данные компоненты вводятся Изотахофорез Разделение компонентов смеси на основе их различных электрофоретических подвижностей, когда данные компоненты вводятся на границе между разгоняющим и тормозящим электролитами Разгоняющий электролит содержит вытесняющий ион (leading ion, L) Тормозящий электролит содержит тормозящий ион (terminating ion, T) Подвижность двух компонентнов анализируемой смеси (А и В): μ(L) > μ(A) > μ(B) > μ(T)

Электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) Электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE)

Электрофорез в полиакриламидном геле Разделение компонентов на основе таких параметров, как-то: заряда молекулы, молекулярной Электрофорез в полиакриламидном геле Разделение компонентов на основе таких параметров, как-то: заряда молекулы, молекулярной массы и размера (радиуса Сток Неподвижная фаза = разгоняющий гель (1) + концентрирующий гель (2)-опционально Параметр Движущая сила Отмена влияния силы Заряд молекулы Потенциал тока; р. Н буферов добавление детергентов (SDS-PAGE) Стоксов радиус молекулы Диффузия в поры геля Денатурация компонентов (мочевина, формамид); Разная вязкость гелей Молекулярная масса Фильтрация компонентов порами геля Градиентные гели (+концентрирующий гель)

Капиллярный электрофорез Разделение компонентов по любым из описанных выше принципов в капилляре. Капилляр: носитель Капиллярный электрофорез Разделение компонентов по любым из описанных выше принципов в капилляре. Капилляр: носитель неподвижной фазы (геля) >>> минимизация диффузионных эффектов, размывов и турбулизаций потока >>> сверхвысокие разрешения при разделении компонентов

Serum protein electrophoresis Serum protein electrophoresis