Эксцизионная репарация оснований суперсемейство Ung суперсемейство Nth суперсемейство

Эксцизионная репарация оснований

суперсемейство Ung суперсемейство Nth суперсемейство Fpg/Nei суперсемейство формилтрансфераз ДНК-гликозилазы E. coli и человека

ДНК-гликозилазная активность: гидролиз N-гликозидной связи

равновесие между закрытой (гемиацетальной) и открытой (альдегидной) формами АП-сайта

АП-эндонуклеаза: гидролиз фосфодиэфирной связи

дезоксирибо-5’-фосфатлиаза: b-элиминация

транс-2-гидрокси-5-оксопентен-3-фосфат

ДНК-гликозилазная активность: гидролиз N-гликозидной связи АП-лиазная активность: b-элиминация

АП-эндонуклеаза: гидролиз фосфодиэфирной связи

транс-2-гидрокси-5-оксопентен-3-фосфат

ДНК-гликозилазная активность: гидролиз N-гликозидной связи АП-лиазная активность: b-элиминация АП-лиазная активность: d-элиминация

АП-эндонуклеаза или полинуклеотидкиназа / 3’-фосфатаза: гидролиз фосфоэфирной связи

доказана причинно-следственная генетическая связь эпидемиологическая ассоциация утеря гетерозиготности в клетках опухоли Болезни, связанные с дефектами эксцизионной репарации оснований

клинический фенотип биохимический фенотип Мыши с инактивированными генами ДНК-гликозилаз

-T-A-C-G-A- -A-T-G-C-T- -T-A-U-G-A- -A-T-G-C-T- -T-A---G-A- -A-T-G-C-T- -T-A-Y-G-A- -A-T-X-C-T- + AID UNG репликация репликация АП-эндонуклеаза -T-A-X-G-A- -A-T-G-C-T- ошибочная репарация

8-oxodG(syn)•dA(anti) 8-oxodG(anti)•dC(anti) Образование хугстеновской пары 8-oxoG:A

Схема функционирования GO-системы (Fpg) OGG1 MUTYH

MUTYH: известные полиморфизмы

генотипирование в случае аутосомно-рецессивного наследования рака ободочной и прямой кишки в родословной превентивная колонэктомия в возрасте 20–30 лет в случае гомозиготного или составного гетерозиготного генотипа по известным инактивирующим мутациям MUTYH MUTYH: медико-генетические рекомендации

Ферменты репарации как лекарства липосомы, содержащие: фотолиазу DenV фага T4 AGI Dermatics

Ферменты репарации как лекарства липосомы, содержащие: фотолиазу DenV фага T4 Находятся на стадии клинических испытаний в фазе III для предотвращения солнечного кератоза у пациентов с пигментной ксеродермой и в фазе II для предотвращения повторного развития рака кожи у пациентов, подвергающихся лечению иммунодепрессантами после трансплантации почки

Ферменты репарации как лекарства липосомы, содержащие: Fpg OGG1 MUTYH доклинические испытания для предохранения клеток от генотоксичных воздействий (противоопухолевая терапия, O2)

MPG Снижает эффективность действия алкилирующих противоопухолевых средств: дакарбазин темозоломид Эксцизионная репарация оснований TDG, SMUG1, MBD4 Снижают эффективность действия противоопухолевых средств — аналогов урацила: 5-фторурацил 5-иододезоксиуридин

Ингибиторы ферментов репарации как лекарства

ингибиторы AP-эндонуклеазы доклинические испытания CRT0044876 лукантон Ингибиторы ферментов репарации как лекарства

Эксцизионная репарация оснований урацил-ДНК-гликозилазы вирусов Необходимы для репликации: герпесвирусов (вирус простого герпеса, вирус ветряной оспы, вирус Эпштейна–Барр, цитомегаловирус) поксвирусов (вирус натуральной оспы, вирус коровьей оспы, вирус осповакцины, вирус контагиозного моллюска) лентивирусов (вирус иммунодефицита человека)

ингибиторы урацил-ДНК-гликозилазы доклинические испытания Ингибиторы ферментов репарации как лекарства

Сайт-направленный мутагенез: метод Кункеля U U U U U U U U U

U U U U U U U U U Сайт-направленный мутагенез: метод Кункеля

U U U U U U U U U Сайт-направленный мутагенез: метод Кункеля

Предотвращение контаминации ПЦР-реакций

Безрестриктазное клонирование ПЦР-продуктов 5’-AGCUTACNNN..................NNNTGACGT-3’ 3’-TCGAATGNNN..................NNNACUGCA-5’ TACNNN..................NNNTGACGT TCGAATGNNN..................NNNAC SacI AatII AGCTTACNNN..................NNNTGACGT TCGAATGNNN..................NNNACTGCA Ung, затем щелочь или AP-эндонуклеаза ДНК-лигаза

Принцип метода кометографии (comet assay) Электрофорез в агарозном геле Клетки с разным количеством разрывов ДНК Singh et al. (1988) Exp. Cell. Res. 175:184-91

Варианты метода кометографии Электрофорез в неденатурирующем геле Электрофорез в щелочном геле Предварительная обработка ферментами репарации; электрофорез в щелочном геле двухцепочечные разрывы одноцепочечные разрывы апурин-апиримидиновые сайты поврежденные основания

Организмы-индикаторы