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Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex Gmb. H, Idstein

Die Herausforderung Die Herausforderung

Das Problem Das Problem

Die Lösung Column i. d. Flow rate Sensitivity 1. 0 m. L/min S/N = Die Lösung Column i. d. Flow rate Sensitivity 1. 0 m. L/min S/N = 1 [4. 6 mm] [75 µm] 200 n. L/min S/N = 3800

Die Praxis 1. Lösungsmittel und Additive: Nur beste Qualitäten nutzen! 2. Probenvorbereitung: Gemäß GLP Die Praxis 1. Lösungsmittel und Additive: Nur beste Qualitäten nutzen! 2. Probenvorbereitung: Gemäß GLP für HPLC! Zentrifugieren Online Clean-Up 3. Totvolumina: Sind tatsächlich tödlich! 4. MS-Interfacing: Hardware (+), Software (+/-). 5. Stoff- & Volumenüberladung: Vermeiden durch “Preconcentration”! Peak-Verbreiterung Schlechte Trennleistung 6. Säulenauswahl: (Fast) alles geht! MS-Kompatibilität Robustheit & Geschwindigkeit 7. Automatisierung: MDLC!

Extra-Column Dispersion Extra-Column Dispersion

oid Volume Due to Bad Connections oid Volume Due to Bad Connections

tfalls of Preconcentration Techniques Separation of a 500 fmol tryptic digest of -galactosidase with tfalls of Preconcentration Techniques Separation of a 500 fmol tryptic digest of -galactosidase with preconcentration. The data shown are for a system without (upper trace) and with (lower trace) void volume and are a comparison of MS base peak chromatograms (BPC). Because of the void volume and mixing effects, the signals for hydrophilic peptides are lost. From Mitulovic et al. , 2003.

Die “Bibel” Special Issue Paper An improved method for tracking and reducing the void Die “Bibel” Special Issue Paper An improved method for tracking and reducing the void volume in nano HPLC–MS with micro trapping columns Goran Mitulović, Marek Smoluch, Jean-Pierre Chervet, Ines Steinmacher, Andreas Kungl, Karl Mechtler

Preconcentration Column Set-up Gradient 200 n. L/min Trap Column 300 µm i. d. x Preconcentration Column Set-up Gradient 200 n. L/min Trap Column 300 µm i. d. x 5 mm Capillary Column 75 µm i. d. x 150 mm

State-of-the-Art Nano LC Systems Agilent Eksigent Dionex Waters State-of-the-Art Nano LC Systems Agilent Eksigent Dionex Waters

dvanced Column Switching Technologies Automated Offline 2 D-LC dvanced Column Switching Technologies Automated Offline 2 D-LC

“It is all a matter of mass transfer and column permeability” (C. Huber) PS-DVB “It is all a matter of mass transfer and column permeability” (C. Huber) PS-DVB (Silica) particles PS-DVB monolith

Danke für Ihre Aufmerksamkeit! Danke für Ihre Aufmerksamkeit!