Ein großer Schritt in die Welt der kleinen

Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex Gmb. H, Idstein

Die Herausforderung

Das Problem

Die Lösung Column i. d. Flow rate Sensitivity 1. 0 m. L/min S/N = 1 [4. 6 mm] [75 µm] 200 n. L/min S/N = 3800

Die Praxis 1. Lösungsmittel und Additive: Nur beste Qualitäten nutzen! 2. Probenvorbereitung: Gemäß GLP für HPLC! Zentrifugieren Online Clean-Up 3. Totvolumina: Sind tatsächlich tödlich! 4. MS-Interfacing: Hardware (+), Software (+/-). 5. Stoff- & Volumenüberladung: Vermeiden durch “Preconcentration”! Peak-Verbreiterung Schlechte Trennleistung 6. Säulenauswahl: (Fast) alles geht! MS-Kompatibilität Robustheit & Geschwindigkeit 7. Automatisierung: MDLC!

Extra-Column Dispersion

oid Volume Due to Bad Connections

tfalls of Preconcentration Techniques Separation of a 500 fmol tryptic digest of -galactosidase with preconcentration. The data shown are for a system without (upper trace) and with (lower trace) void volume and are a comparison of MS base peak chromatograms (BPC). Because of the void volume and mixing effects, the signals for hydrophilic peptides are lost. From Mitulovic et al. , 2003.

Die “Bibel” Special Issue Paper An improved method for tracking and reducing the void volume in nano HPLC–MS with micro trapping columns Goran Mitulović, Marek Smoluch, Jean-Pierre Chervet, Ines Steinmacher, Andreas Kungl, Karl Mechtler

Preconcentration Column Set-up Gradient 200 n. L/min Trap Column 300 µm i. d. x 5 mm Capillary Column 75 µm i. d. x 150 mm

State-of-the-Art Nano LC Systems Agilent Eksigent Dionex Waters

dvanced Column Switching Technologies Automated Offline 2 D-LC

“It is all a matter of mass transfer and column permeability” (C. Huber) PS-DVB (Silica) particles PS-DVB monolith

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