ДИНАМИКА ИММУННОГО ОТВЕТА Неспецифические защитные реакции гуморальные

ДИНАМИКА ИММУННОГО ОТВЕТА

Неспецифические защитные реакции (гуморальные) Активация комплемента по альтернативному пути через С 3 компонент Белки острой фазы воспаления (СРП, фибронектин и др) препятствуют адгезии и микробной инвазии и активируют лектиновый путь активации комплемента Естественные антитела

Неспецифические защитные реакции (клеточные) Фагоцитоз микробных клеток нейтрофилами и макрофагами Действие естественных киллеров (НКклеток (перфорин, АЗКЦ)

Специфические защитные реакции на Тнезависимые АГ ■ Т-независимые АГ - высокомолекулярные чужеродные структуры, ■ Имеют выраженный заряд (например, полисахариды бактерий), ■ Способны связать перекрестно не менее 2 -х молекул специфических поверхностных Ig. М или Ig. D на поверхности В-лимфоцита, ■ Это является необходимым условием дифференцировки, пролиферации В-клеток и превращения их в плазмоциты.

Специфические защитные реакции на Т-зависимые АГ Основные стадии: 1. Представление АГ 2. Индуктивная фаза 3. Эффекторная фаза

Механизмы образования Т-хелперов-1 и Т-хелперов-2: Т-хелперы-1 - АГ представляется в комплексе с HLA-II дендритными клетками и макрофагами Активируются ИЛ-1, ИЛ-12, ИЛ-18, подавляются ГКС Т-хелперы-2 - АГ представляется в комплексе с HLA-II В-лимфоцитами. Активируются ИЛ-4

Цитокины Т-хелперов-1 и Т-хелперов-2: Т-хелперы-1 образуют ИЛ-2, -интерферон, -ФНО Т-хелперы-2 образуют ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-13

Эффекторная фаза: 1. Активация фагоцитов и фагоцитоз 2. Цитотоксическое действие Т-киллеров и NK-клеток 3. Бласттрансформация В-лимфоцитов, образование плазмоцитов, антителогенез

Основные стадии и механизмы иммунного цитолиза: 1. Распознавание мишени и активация CD 8+ цитотоксического лимфоцита 2. Летальный удар с выделением перфорина, гранзимов, активацией апоптоза через CD 95 3. Лизис клетки-мишени

Естественное угнетение иммунного ответа: 1. Смена костмулирующих молекул, ведущая к торможению клеточного деления 2. Апоптоз активированных клеток (например, плазмоцитов) 3. Идиотип-антидиотипическая регуляция

Генетические основы разнообразия АТ и ТКР H и L цепи Ig кодируются несколькими генными сегментами, расположенными в разных хромосомах. В ДНК половых клеток они разобщены и объединяются непосредственно в Вл и плазмоцитах. n Вариабельные участки L цепей кодируются V -сегментами (несколько сотен вариантов) и Jсегментами. n Вариабельные участки Н цепей кодируются V, D, J-генными сегментами. n

n n Каждый такой сегмент формируется из нескольких участков ДНК. При объединении фрагментов генома в единую последовательность ДНК происходят множественные рекомбинации и мутации, т. е. количество вариантов нарастает. Разнообразие АТ увеличивается и при последовательном переключении классов Ig (Ig. M и Ig. D на Ig. G, A и т. д. ), продуцируемых одной клеткой. Разнообразие Ig продолжает увеличиваться и после контакта СИ с АГ, что связано с постоянными мутациями ДНК, таким образом в организме предсуществуют миллиарды вариантов Ig (также происходит и с ТКР).

Первичный иммунный ответ: 1. Развивается после латентного периода (2 -3 дня). 2. Первоначально образуются АТ класса Ig. M (на 2 -3 день). К концу 2 -й недели образуются Ig. G. Аффинность и авидность АТ невысокая. Одновременно в пролиферацию вступают специфические Т-клетки. 3. Затихает через 2 -3 недели с образованием клеток памяти

Вторичный иммунный ответ: 1. Быстро развивается после повторного контакта с АГ (на 1 -3 день). 2. Резко увеличивается количество АТ класса Ig. G. Аффинность и авидность АТ высокая. 3. Максимальная быстрая активация всех Т-клеточных субпопуляций.

n РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ МЕЧЕНЫХ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ

Твердофазный иммуноферментный анализ

Методы иммунодиагностики

Реакция агглютинации (от лат. аgglutinato- склеивание) – склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др. ) антителами в присутствии электролитов. Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий), «склеенных» антителами. Реакция агглютинации используют для: определения возбудителя, выделенного от больного; определения антител в сыворотке крови больного; определения групп крови.

Определение возбудителя, выделенного от больного Ориентировочная реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1: 10) добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.

Развернутая реакция агглютинации с возбудителем, выделенным от больного. К разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного.

Определение антител в сыворотке крови больного Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови больного. К разведениям сыворотки больного добавляют диагностикум. - Агглютинация с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие О-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. - Агглютинация с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие жгутиковый Н -антиген) – крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Реакция непрямой (пассивной) гемаггютинации В РПГА выявляют антитела сыворотки крови больного с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на инх антигенами.

Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки» . РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.

Иногда применяют антительный эритроцитарный диагностикум – эритроциты, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему дагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации - РОНГА).

Реакция преципитации С растворимым антигеном ð ð Объемная В геле (иммунодиффузия) 1. Простая (по Манчини) 2. Двойная или встречная (по Оухтерлони) ð ð Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) Другие варианты 1. Иммуноэлектрофорез 2. Иммуноблотинг

Реакция кольцепреципитации

Реакция радиальной иммунодиффузии

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

Реакция связывания комплемента 1 ФАЗА – инкубация смеси, ФАЗА содержащей антиген + антитело + комплемент 2 ФАЗА (индикаторная) – выявление в ФАЗА смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы (свободный комплемент вызывает гемолиз).

Схема РСК с сывороткой больного

Схема РСК с сывороткой здорового

Твердофазный иммуноферментный анализ