ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ КЛИНИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА Карантин госпитализация

ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

КЛИНИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА Карантин, госпитализация, вакцинация

3 основных подхода к лабораторной (вирусологической, серологической) диагностике вирусных инфекций 1) Исследование материала на наличие вирусов - Световая микроскопия биоптата (ЦПД) - Электронная микроскопия (вирусов) - Поиск АГ вирусов - Поиск НК (РНК, ДНК) вирусов - ПЦР

2) Изоляция и идентификация вирусов Вирусы выращивают на культуре клеток или птичьем эмбрионе Индикация (да, нет) Идентификация вируса 3) АТ больного в динамике зб (серодиагностика - РСК)

ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСОВ

КАК ПРАВИЛО, БЕРУТСЯ: – при респираторных инфекциях – носоглоточный смыв; – при энтеровирусных инфекциях – смыв и фекалии (рео-, энтеровирусы); – при поражениях кожи и слизистых оболочек – соскобы, содержимое пузырьков (герпес, ветряная оспа); – при экзантемных инфекциях – смывы (корь, краснуха); – при арбовирусных инфекциях – кровь, СМЖ.

I. ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ (ДА, НЕТ) - По ЦПД (= ЦПЭ) - Гемадсорбцией (НА+) - По появлению негативных колоний (фагов)

SMALLPOX VIRUS POCKS ON THE HORIOALLANTOIC MEMBRANE OF A DEVELOPING CHICK.

Plaque Assay: A method of quantifying the number of infectious units by inoculatinrg serial dilutions of a viral suspension on a cell culture monolayer, overlaying with a medium containing agarose and after several days incubation, counting the number of plaques formed; recorded as plaque forming units/ml. These plaques can sometimes be detected visually using colony counters, in much the same way as bacterial colonies are counted. This technique requires counting the number of plaques formed by a virus sample, from which the actual virus concentration can be determined. Зубной налет пробирного: Метод количественной оценки числа инфекционных единиц прививки серийных разведений вирусного подвески монослоя культуры клеток, с наложением на среде, содержащей агарозном и после нескольких дней инкубации, подсчет числа бляшек сформирован; учитываются как бляшкообразование ЕД / мл. Эти бляшки иногда можно обнаружить визуально, используя колонию счетчиками, во многом так же, как подсчитываются бактериальных колоний. Этот метод требует подсчета числа бляшек образуются вирус образцов, из которых фактическая концентрация вируса может быть определена.

II. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ (КАКОЙ ВИРУС? )

ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ

ПЦР (праймеры*) Поиск НК (РНК или ДНК) Иммуноблот Поиск чаще АГ РТГА Поиск АГ ИФМ (= РИФ) Поиск АГ РН (= реакция нейтрализации) Нейтрализация вируса антителами

ИММУНОБЛОТ 1) ЭТАП ЭФ /= ЭЛЕКТРОФОРЕЗА/

Иммуноблот 2) этап ИФА

ИММУНОБЛОТ (= Вестерн-блот)

Молекулярные биологи назвали разновидности этого теста по сторонам розы ветров.

Разгонка «Игра слов» (ЭФ) West - WESTERN запад blot Вестерн Белки South - SOUTHERN blot юг Саузерн ДНК East - EASTERN восток blot Истерн Белки North - NORTHERN blot север Нозерн РНК

Foot-and-mouth disease virus (FMDV) particles interact with clathrin during virus internalization. FMDV type O 1 Campos was adsorbed to monolayers of MCF-10 A cells (MOI of 100 PFU/cell) for 1 h at 4°C, and then the incubation temperature was shifted to 37°C. Cells were fixed with paraformaldehyde 5 min after the temperature shift and stained with monoclonal antibodies against the viral capsid protein VP 1 (red) and clathrin (green). Colocalization of virus and clathrin is shown in yellow. Cells were counterstained with TOPROiodide to reveal the nuclei (blue).

Accumulation of simian virus 40 (SV 40) virions at the nuclear envelope at a late stage during viral replication. Shortly after nuclear envelope localization of VP 1, the host nuclear, endoplasmic reticulum, and plasma membranes become permeabilized, facilitating the release of viral progeny. BS-C-1 cells were infected with SV 40, fixed at 72 h postinfection, and immunostained for the viral capsid protein VP 1. This image shows a rotated three-dimensional reconstruction of the central portion of a VP 1 -stained nucleus.

Foot-and-mouth disease virus (FMDV) particles interact with clathrin during virus internalization. FMDV type O 1 Campos was adsorbed to monolayers of MCF 10 A cells (MOI of 100 PFU/cell) for 1 h at 4°C, and then the incubation temperature was shifted to 37°C. Cells were fixed with paraformaldehyde 5 min after the temperature shift and stained with monoclonal antibodies against the viral capsid protein VP 1 (red) and clathrin (green). Colocalization of virus and clathrin is shown in yellow. Cells were counterstained with TOPRO-iodide to reveal the nuclei (blue).

Human glioblastoma tumor cells were infected with a recombinant that expressed a VSV-G protein fused to a green fluorescent protein reporter in the plasma membrane. Calcein blue AM was used to label the cytoplasm of live cells, and dead cells were stained with the red-orange ethidium homodimer. VSV was one of nine replication-competent viruses tested that might selectively infect and destroy brain tumor cells.

Confocal microscopy images of BHK-21 cells infected with Bunyamwera virus show a massive recruitment of mitochondria (labeled in red) toward the Golgi complex (labeled in blue) where the viral factory is built. Viral replication and assembly take place in these large perinuclear complexes. Actin filaments are labeled in green.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА - ПОИСК АГ (ИФМ, ИФА, РИА) - ДИНАМИКА АТ (РТГА, РСК) - Динамика синтеза АТ - Диагностика гепатитов …