Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии

Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии ПОДГОТОВИЛ : УСЕНОВ ЮРИЙ ЮРЬЕВИЧ 340 ГРУППА

• Согласно мировой статистике, 3, 3 -4, 7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40 -46 % случаев приходится на детей 2 -6 лет.

• Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у 60 -70 % больных. • неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения. • вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лйкоз/лимфома взрослых; вирус Эпштейна. Барр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина)

• Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т. д, ) и признаки подавления нормального кроветворения.

Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов: • 1. гиперпластического • 2. геморрагического • 3. анемического • 4. интоксикационного • 5. инфекционных осложнений

• Л. - опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клеткипредшественники. Субстрат опухоли представлен бластами.

FAB-классификация, 1976 • Лф: L 1, L 2, L 3 • Миело: М 0, М 1, М 2, М 3, М 4, М 5, М 6, М 7

Иммунофенотипирование • CD – кластер дифференцировки • Антитела (мембранные гликопротеины, карбогидраты, гликолипиды) • Проточная цитометрия является современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.

Образцы для проточной цитометрии • • кровь костный мозг ликвор суставная жидкость плевральная жидкость асцитическая жидкость клетки тканей (например, опухолей)

Проточные цитофлюориметры

• Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки.

Иммунологическая идентификация включает: • Определение линейной принадлежности злокачественных клеток • Анализ клеточного созревания, т. е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток • Аберрантности, т. е. отличия от нормальных аналогов • Клональности • Определение количества гемопоэтических клеток • Контроль и мониторинг эффективности терапии • Выявление минимальной остаточной болезни

• Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л. клеток относятся:

• Коэкспрессия антигенов нескольких линий • Асинхронная экспрессия антигена • Избыточная экспрессия антигенов • Отсутствие экспрессии или низкий уровень экспрессии антигена • Фенотипический профиль, практически не встречающийся в норме

Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПи. ДХ

Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ

Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза • 1995, 2009 • Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ.

Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза Баллы Маркеры В ряда Маркеры Т ряда Маркеры миелоряда 2 CD 79 a cy. Ig. M cy. CD 22 CD 3 cy/mem TCRαβ TCRγδ MPO 1 CD 19 CD 10 CD 2 CD 5 CD 8 CD 13 CD 33 0, 5 Td. T CD 24 Td. T CD 7 CD 1 a CD 14 CD 15 CD 64 CD 117

За последние 5 лет в НЦПи. ДХ было выявлено 6 бифенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В -линейной и миелоидной направлений дифференцировки.

Суммарный иммунофенотип Т+миело: CD 7+m. CD 3+CD 2+CD 117+CD 13+CD 15+HLADR+CD 34+MPO+ В+миело: CD 19+CD 22+CD 79 а+CD 13+CD 33+CD 117+CD 15+HLA-DR+CD 34+MPO+Td. T+

Мегакариоцитарный лейкоз (М 7) • С 2010 по 2014 гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, см Дауна - 3 • CD 42 a+CD 42 b+CD 41+CD 33+HLA-DR-CD 34 MPO • CD 33+CD 41 a+CD 42 b+CD 61+HLA-DRCD 34 -MPO-, • Коэкспрессия CD 4, CD 7, CD 56

Мегакариоцитарный лейкоз (М 7)

Эритробластный лейкоз (М 6)

Плазмобластный лейкоз

Спасибо за внимание!