диагностика некоторых инфекционных заболеваний 1 Основные методы

диагностика некоторых инфекционных заболеваний 1

Основные методы § § § § Бакпосев Культура клеток Эл. микроскопия Гемагглютинация серология ELISA (ФА и др. ) ПЦР § «экспресс-методы» § в клинике § дома § «мокрые» или лабораторные 2

Главные характеристики тестов: § Чувствительность § «…таки ДА!» § Специфичность § «…ну нет, так НЕТ» 3

Fit for purpose means… (соответствие задаче или за что я готов расстреливать менеджеров…) 4

Материал для исследования ПЦР § § § § Вирусный иммунодефицит кошек Вирусная лейкемия кошек Коронавирусный энтерит собак Инфекционный перитонит кошек Парвовирусный энтерит собак Панлейкопения кошек Чума плотоядных Аденовироз(гепатит "питомниковый кашель") § Ринотрахеит кошек (герпес) § Дирофиляриоз(D. repens) § Хламидиоз § § § § Кровь с ЭДТА кал Кал, соскоб, асцит Кровь с ЭДТА Кал диар. Кал не диар. Кровь, коньюн. Сыворотка (+акт) Смывы Н, К, кал Сыворотка (+акт) § Мазок. смыв К, НГ, Язвы § Кровь с ЭДТА § Мазоксмыв коньюнктива 5

Зависимость флюоресценции от количества копий 6

Чума собак § § § Canidae, макаки, енот, куница, байкальские и каспийские тюлени, азиатский слон (субклин) Перинатальное заражение – атрофия тимуса Эпидидимит-орхит MDA пп 8, 4 дня Антитела- 3% in utero, 97% MDA § § § FA, ELISA (? нервн. ) антитела – с 6 -8 дня; CSF, сыворотка ПЦР кровь, CSF, моча(!), buffy coat, кал, смывы конъюнктивы и носа вакцинация MLV 7

Коронавирус (FCo. V, FIP) § § § § § SARSr Co. V, geneta WC и бриддерство… До 2 и после 10 лет Резервуар – собаки Носители – не «болетели» (10%) Стресс = выделение х 101 -106 раз ОРЗ, диарея, замедл. развитие Эффузивный FIP – сухой FIP Пиогранулематозный васкулит! Радужка коричневая (синий→зелен) § Проба Ривальта (98% уксусн. к) § У 50% с выпотом - FIP § Белок до 35 гл § A/G 0, 45 -0, 8 § FIP Immunocomb, Biogal Speed-F Corona, Bioveto § Ложно «+» § Эффузивный ложно «–» § ↑титр больной кошки ↓риска важнее, чем у кошки ↑риска § Выпот = кровь § Rt-ПЦР 8

9

Коронавирус (FCo. V, FIP) § § § Более точен реал-тайм Обратная транскрипция Для серо «-» с клиникой Выявление «выделителей» Количественно (локализация): § Кишечная – «мало» § Системная – «много» Rt-ПЦР § Кровь – не информативно § «+» у здор. , особенно серо «+» § «-» не гарантирует отс. Заболевания § Выпот § § § «+» высоко подозрителен у больных «-» не исключает FIP… Концентрация образца § Коньюнктива § «+» высоко подозрителен § «-» не исключает наличие § Кал § Выявление «выделителей» !!! § Пожизненные > 9 месяцев (1 размесяц) 10

Primucell, Pfizer (интраназально) § DF 2 -FIPV, термозависимый штамм § 4 дня выделяют вирус! (сероконверсия) § С 16 нед. , 2 -кратно, инт. 3 недели § Эффективность – 50 -75% § Серонегативность=эффект § Предварительное тестирование § § § Чистокровные – группа риска! Мелкий однопометник – сигнал! «синдром страуса» - главный враг Отделить «выделителей» (2 -3 мес) Вязка: § «+» + «+» § «-» + «-» § «-» + «+» с ограничениями § Отьем котят в 5 -6 недель 11

Коронавирусный энтерит собак (CCov) § Инкубационный период 1 -4 суток, мутагенны § Нехарактерны: кровь в кале, t, лейкопения (парвовирус) § Не растут в культурах клеток § ПЦР в кале § Титры антител малополезны… § MLV и инактивированные вакцины § безопасны, но слабые § только ослабляют репликацию § Штамм СВ5 …. ? § Возможно заражение человека 12

Парвовирусный энтерит собак (CPV) § Чрезвычайно устойчив § CPV-2 (2 а, 2 b и 2 c) GLU 426 § Общий и биохимия: § § § Лейкопения (≤ 1030мкл) Эозинопения Лимфоцитопения Моноцитопения Холестерин ↓ (↑ плохо!) Триглицериды ↑ § Экспресс ELIZA(антиген) § § Чувствителен 4 -8 дней «+» подтверждает диагноз «+» (слабый) 4 -8 дней поствак. «-» требует ПЦР § Наиболее чувствителен(2 нед. поствак) § Количественно позволяет дифференцировать вакцинный вирус от полевого § Титры Ig. M, Ig. G (перед вакцин. ) § Вакцинация § Влияние MDA § «окно» - за 2 -3 нед до вакц. 13

14

Парвовирус собак (CPV)… у кошек § CPV-2 а, 2 b и, у крупных экзотов, +2 c § Клиника похожа на панлейкопению (FPV) § Лаборатория: § Явная лимфопения (при FPV умеренная) § Умеренная лейкопения (при FPV явная) § Нет простых, надежных методов дифференциации от FPV § Профилактика § Перекрестная реактивность против CPV при FPV вакцинации § Титр антител против CPV ниже, особенно 2 с § У гепардов часто титр против CPV недостаточен… 15

Ринотрахеит кошек (герпес, FHV-1) § § § § Типичный α-герпесвирус, нестоек (18 часов в среде) подобен герпесу тюленей и собак Распространенность: молодняк, скученное содержание Секреции глаз, носа, слюна; передача - прямым контактом Питомники, приюты и гостиницы – косвенная передача (18 часов) Высокая численность носителей – гарант успешности FHV -1 НОСИТЕЛЬСТВО: § Все переболевшие – латентно зараженные носители (пожизненно) § Стимуляция выделения – стресс (через 1 -2 недели) и длится 3 недели § Потомство с низким MDA может стать латентным носителем без клиники § КЛИНИКА § Синдром воспаления верхних дыхательных путей: § § § § Чихание Серозные назо-окулярные выделения → слизисто-гнойные (корки у глаз и ноздрей) Слюноотделение-слюнотечение Коньюнктивит, язвенный кератит, стромальный кератит, увеит и т. п. Стоматит, язвы морды, носа Редко: одышка, кашель, пневмония Больше страдают коротконосые (Персидские, Гималайские) 16

Ринотрахеит кошек (герпес, FHV-1) ДИАГНОСТИКА § «по клинике» : § Язвы ротовой полости – Кальцивироз § Чихание+более тяжелые респираторные – Ринотрахеит § Яркий, стойкий коньюнктивит – Хламидиоз § Серология – не информативна из-за распространенности антител § Классически – выделение в культуре клеток § ПЦР § § Материал – ротоглоточные мазки, реже – коньюнктивальные Наиболее информативен реал-тайм ПЦР Количественная оценка последовательных проб Интраназальные вакцины могут давать «+» 17

Ринотрахеит кошек (герпес, FHV-1) ЧТО ДЕЛАТЬ? § Вакцинация FHV-1+FCV § MLV интраназальная – MLV парентеральная (осторожно!) § Выставка-гостиница - интраназальная (быстрый ответ) § § Выявление носителей Карантин Риски «вязок» и от новых производителей выше, чем «выставочные» СТРЕСС 18

Хламидиоз (Сp. Felis) § Хламидофилы: § § § Cp. psittaci, Cp. pneumonia, Cp. pecorum, Cp. abortus, Cp. suis, Cp. caviae, Cp. felis + титры антител у 10% здоровых домашних и 45% бродячих кошек 30% кошек с конъюнктивитом Активнее в теплое время года Кошки: лихорадка, выделения из глаз, чихание Собаки: кератоконьюнктивит, ОРЗ, родопатология , артрит, атеросклероз Диагностика § Бакпосев: среды для транспортировки, 4 С, 24 часа § ИФА, самая низкая чувствительность и специфичность § Серология: колебания титров не отражают статус § ПЦР § Не требует сред и условий; детекция погибших; смывы-соскобы конбюнктивы § Чувствительность: § бакпосев 72, 9%, ПЦР 85, 7% § при лечении 1 день, 5 дней 19

Вирусная лейкемия кошек (Fel. V) 1964, Уильям Джаррет 20

Вирусная лейкемия кошек (Fel. V) § Ретровирус (брат FIV) § § § Стадии ВЛК Основной бич у кошек Причина большинства смертей Наибольшее к-во синдромов Гренландия, Вест-Индия, Гренада, Галапагоссы, Изабелла США -3, 3%, Европа 1 -15, 6% Бродячие 1 -8%, больн. 38% Передача - укусы (слюна) Вирус в крови = в слюне Ятрогенное инфицирование Носительство - пожизненно § Ранее: § Невыявляемая ( «регрессоры» ) § Трансиентная § Персистентная § После ПЦР: § § Абортивная инфекция Регрессивная (выд. 3 -6 нед) ELIZA, FA «-» Прогрессивная (выд. постоянно) Фокальная (или атипичная) 21

Вирусная лейкемия кошек (Fel. V) Клиника Смертность: 50% 2 г. , 80% 3 г. Скученность Ко-инфекции 15% Анемия 11% Лимфома 6% Лейкопениятромбоцитпения 5% Лейкозмиелопролиферативная бол. 4% Котята – атрофия тимуса, гибель Зрелые –прогрессирующая форма Старше – абортивнрегресспрогресс Опухоли 90% лимфомы и лейкоз(30% всех опухолей кошек) Фибросаркомы остеохондромы Нейробластомы рецепторов носоглотки 22

Вирусная лейкемия кошек (Fel. V) Диагностика § ELIZA (выявление антигенов) § § § прогностичность «+» 80%, «-» около 100% Возможны ложноположительные результаты «+» подтверждение ПЦР или контроль тем-же тестом (немедленно) Сыворотка, плазма, кровь Тесты для слюны, слез – менее точны § ПЦР (выявление возбудителя) § § § Возможны ложно «-» , вследствие мутаций «+» - прогностичность 100% ПОКАЗАНИЯ: § Подтверждение ELIZA «+» § Подозрение на регрессирующую (латентную) ВЛК с лимфомой и хроническим воспалением десен (ELIZA и FA не работают) § Количественно дифф. прогрессивная-регрессивная (в 300 раз) § Обнаружение в слюне (выделители) 23

Вирусный гепатит собак (CAV-1) Общий + биохимия: § § § § Лейко-, лимфопения с нейтропенией Увеличение к-ва активных лимфоцитов и ядерных эритроцитов АЛТ, АСТ и ЩФ зависят от времени отбора и серьезности некроза, рост до 14 дней Билирубин – умеренно ↑, гипер – редко Непропорциональное ↑ АЛТ (относит. билирубина) – дифф. от других причин Глюкоза ↓ в терминальных стадиях Протеинурия (более 500 гл!). За счет альбуминурии СЕРОЛОГИЯ § § § непрямая агглютинация РСК Иммунодиффузия IFA ПЦР (дифференциация от тип 2) 24

Отложение комплексов антиген-антитело в роговице 25

Аденовироз - «питомниковый кашель» , CAV-2 26

дирофиляриоз § § Цикл 7 -9 месяцев Микрофиляремия – через 6 месяцев ПИ Антигенемия – 9 месяцев ПИ ELIZA тест-системы § Не менее 3 -х самок § ♂ и незрелые ♀ - ложноотрицательный § Кошки § Развиваются до L 5 и гибнут § Микрофиляремия 8 месяцев ПИ (редко!), через 2 мес. погибают § Клиника § § § Кашель, одышка 64% Рвота, не связанная с едой 38% Без признаков 28% § ПЦР – кровь 27

дирофиляриоз 28

Вирус иммунодефицита кошек (FIV) § § Антитела – до 30% (бродячие, свободно гуляющие) Болезнь забияк и бомжей In utero, с молоком, искусственное осеменение - редко Грязный инструмент и шовный материал 29

Вирус иммунодефицита кошек (FIV) КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ Тесты Антител (ELIZA) § § § § § Острая, бессимптомная, терминальная Генерализованная лимфаденомегалия Лихорадка Общее недомогание (? ) Вторичные инфекции Стоматит (имунного генеза? ) Неоплазия (лимфомы, лейкозы) Антитела – 60 дней ПИ «+» требует подтверждения Ложноположительные (кровь) Ловушки § § § Котята, младше 6 месяцев (MDA) Ранняя стадия-ложно «-» (повтор 60 дней) MDA-вакцинные антитела – до 8 недель ЛАБОРАТОРИЯ § § § § Лейкопения (не часто) Лимфопения -=Анемии (нейтропения у 25%) белок↑(глобулины) ↑ глюкоза, триглиц. , мочевина, креатинин ↓ холестерин ХПН у кошек, младше 11 лет 30

Вирус иммунодефицита кошек (FIV) Детекция вируса § § § Малое к-во вируса – ELIZA(антиген) невозможно изготовить! Статус инфекции – только культивирование и ПЦР Вакцины не вызывают пр-во провируса ДНК, который «ищет» ПЦР Широкая вариабельность генома… Чувствительность 41 -93% Специфичность 81 -100% ПРОФИЛАКТИКА § Сегрегация и эутаназия – самые эффективные методы. . . § Вакцины изучены “лучше всех”! Но. . . § Субтипы: § § Европа A, B, C, D и Е. А – север (Германия, Голландия), В - юг (Италия, Испания) Новая Зеландия – А, С Южная Америка - В, Е Техас – новый F… 31

Материал для исследования ПЦР § § § § Вирусный иммунодефицит кошек Вирусная лейкемия кошек Коронавирусный энтерит собак Инфекционный перитонит кошек Парвовирусный энтерит собак Панлейкопения кошек Чума плотоядных Аденовироз(гепатит "питомниковый кашель") § Ринотрахеит кошек (герпес) § Дирофиляриоз(D. repens) § Хламидиоз § § § § Кровь с ЭДТА кал Кал, соскоб, асцит Кровь с ЭДТА Кал диар. Кал не диар. Кровь, коньюн. Сыворотка (+акт) Смывы Н, К, кал Сыворотка (+акт) § Мазок. смыв К, НГ, Язвы § Кровь с ЭДТА § Мазоксмыв коньюнктива 32