Департамент здравоохранения города Москвы МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

Департамент здравоохранения города Москвы МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЗАВИСИМОСТИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К НЕЙРОПЕПТИДАМ И БИОГЕННЫМ АМИНАМ Мягкова Марина Александровна Д. б. н. , профессор Главный научный сотрудник Отдела экспериментальной биохимии и иммунологии

Болезни зависимости - нейроиммунопатологии, объединенные общими признаками и механизмом развития. Наркотическая, зависимость от ПАВ Алкоголизм Зависимость от азартных игр Пищевая зависимость … и другие виды

Клиническая динамика состояний зависимости Синдром зависимости Патологическое влечение Абстинентный синдром Вегетативные, психические, соматические нарушения

Концепция нейроэндокриноиммунных взаимодействий ре гу фа ляр то кт ор рн ы ые Нервная система ус ам ал от ип г Иммунная система тимус гипофиз , передняя либертины доля статины задняя аденоокситоцин, вазопрессин доля гипофиз , , ЛГ Г ФС Г, , ТТ лактин , СТ про Г , СТ оста, Г АКТ он р периферические орм г эндокринные железы гормоны Эндокринная регулярторные факторы система

Участие нейротрансмитерных систем в развитии патологии синдрома зависимости: γ-аминомасляная кислота (ГАМК) 5 -гидрокситриптамин (серотонин - СТ) дофамин (ДА) норадреналин (НА) β–эндорфин (β-Энд)

Подходы к диагностике состояний зависимости 1. Определение генетической предрасположенности: Ген алкоголдегидрогеназы ADH 4: Ген холинергического мускаринового рецептора CHRM 2 Ген молекулы клеточной адгезии Nr. CAM: Ген рецептора серотонина HTR 2 B 2. Оценка психоэмоционального состояния с помощью вкусового теста (по СТ и НА): Tom P. Heath, Jan K. Melichar, David J. Nutt, and Lucy F. Donaldson Human Taste Thresholds Are Modulated by Serotonin and Noradrenaline J. Neurosci. , Dec 2006; 26: 12664 – 12671. 3. Оценка состояния здоровья на основе определения показателей гуморального иммунитета.

Функции иммунной системы 1896 г. Мечников И. И. : Система фагоцитов предназначена не столько для борьбы с патогенными микроорганизмами, сколько для поддержания «состояния гармонии» или состояния здоровья в условиях постоянного давления Среды. Содержание антител в сыворотке крови: до 20 г Ig Содержание Ig. G: 10 - 14 г Ежедневный ресинтез Ig. G: 10 г Антитела к чужеродным агентам: 70 % Естественные ауто-Ат: 30 % Антиидиотипические Ат: Ат к рецепторам

Естественные антитела – нормальный физиологический компонент организма ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Существуют в кровотоке доноров в норме без антигенной стимуляции Связываются с эндогенными биорегуляторами и участвуют в регуляции гомеостаза Являются низкоаффинными и полиспецифичными иммуноглобулинами Существуют в связанной форме в виде иммунных комплексов В их биосинтезе участвуют немутированные эмбриональные гены Выполняют регуляторную и транспортную функцию ОСНОВНЫЕ ФУНКЦИИ Первичная защита от инфекций Очищение от стареющих клеток Антигенная презентация Тклеткам Противоопухолевый контроль Противовоспалительная активность Селекция иммунного репертуара и гомеостаз аутореактивности

Наши исследования показали: е-АТ существуют в норме в сыворотке крови человека е-АТ обладают низким аффинитетом (Ка 105 – 107 M-1) и полиспецифичны Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и течением заболевания Репертуары иммунореактивности и уровень е-АТ в сыворотке крови изменяются при патологии Свойства е-АТ могут быть использованы для ранней диагностики заболеваний созданы новые методы выявления е-АТ к эндогенным низкомолекулярным соединениям с различной структурой и физиологическими функциями; разработаны новые методы диагностики различных типов заболеваний

Определение Ка для антител, выделенных из сыворотки крови доноров и больных. Исследуемый антиген Диапазон Ка, М-1 Группа больных Группа доноров Ig. G Ig. M β-эндорфин 106 -107 107 -1010 103 -104 дерморфин 108 -1010 105 -108 104 -105 - серотонин 107 -1010 105 -108 103 -104 гистамин 107 -109 107 -1010 104 -105 103 -104 дофамин 107 -1010 105 -108 103 -104

Схема синтеза коньюгата антигена с полимерной матрицей O=C-O O=C-NHR NO 2 + H 2 N O=C-O NO 2 n Антиген (R) O=C-NHR 1 2 3 Степень модификации 100% 50% 10 -15% Выбор оптимальных условий для твердофазного ИФА

Схема твердофазного ИФА для определения антител к низкомолекулярным соединениям Сорбция Добавление образца Aг Aг Aг Добавление вторичных антител для детекции иммунного комплекса Aг + Aг Конъюгат антигена, иммобилизованный на твердой фазе Aг Антитела, специфичные к антигену E Вторичные антитела, меченные ферментом E E Aг E Регистрация ферментативной реакции

Иммуноферментные тест-системы для определения естественных антител к низкомолекулярным эндогенным биорегуляторам ФАКТОРЫ СИСТЕМЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ КАТЕХОЛАМИНЫ Дофамин Норадреналин Адреналин Тромбин Антитромбин III 2 -макроглобулин ОПИОИДНАЯ СИСТЕМА БИОГЕННЫЕ АМИНЫ Серотонин Гистамин -эндорфины Энкефалины Дерморфин ПЕПТИДЫ РЕНИНАНГИОТЕНЗИНОВОЙ СИСТЕМЫ Брадикинин Ангиотензин II Вазопрессин

Объект исследования Сыворотки крови пациентов: Образцы предоставлены институтом реабилитации ННЦ наркологии Росздрава

Изменение уровня антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в норме и при заболеваниях зависимости Результаты ИФА определения антител к серотонину, -эндорфину, дофамину в группе больных опийной наркоманией, алкоголизмом. Группа больных и доноров Значение ОD 450 в ИФА в среднем по группе* Серотонин -эндорфин Дофамин Больные наркоманией 1, 153 ± 0, 027 0, 941± 0, 016 1, 052± 0, 019 Больные алкоголизмом 0, 439 ± 0, 023 0, 259 ± 0, 005 0, 329 ± 0, 037 0, 670 ± 0, 026 0, 588 ± 0, 021 0, 721± 0, 029 σ = 0, 037 σ = 0, 029 σ = 0, 053 Доноры * p < 0, 01 (в сравнении с донорами)

Нейробиологическая основа развития игровой зависимости: G. Meyera, J. Schwertfegerb, M. S. Extonb, O. E. Janssenc, W. Knappd, M. A. Stadlera, M. Schedlowskie, T. H. C. KruЁgerf. Neuroendocrine response to casino gambling in problem gamblers. Psychoneuroendocrinology (2004) 29, 1272– 1280 Результаты ИФА антител к эндогенным биорегуляторам у больных игроманией Исследуемый антиген Средние по группе значения ОD 450 в ИФА* Доноры Больные игроманией Выше нормы Ниже нормы ОD 450 Кол-во OD 450 Кол-во чел. Ангиотензин ll 0, 92± 0, 12 0, 55± 0, 09 12 -эндорфин Дофамин Серотонин Гистамин 0, 80± 0, 06 0, 82± 0, 09 1, 06± 0, 12 4 4 12 0, 23± 0, 02 - * p < 0, 01 (в сравнении с донорами) 10 - 0, 45± 0, 06 0, 52± 0, 04 0, 55± 0, 07 0, 74± 0, 08

Сравнительные результаты ИФА антител к β-эндорфину, дофамину, серотонину и определения уровня реабилитационного потенциала в группе больных игроманией Больные игроманией (14 человек) Группа 1 (4 человека) Группа ll (10 человек) Диапазон Уровень е-Ат Уровень ек к -эндорфину Ат к УРП серотонину дофамину 146 - 135 Повышен Норма Повышен 67 - 78 Норма Понижен Норма поставление результатов ИФА с уровнем реабилитационного потенциала (УРП) высокий УРП средний УРП

Уровень е-Ат к эндогенным биорегуляторам в динамике лечения наркомании, алкоголизма, игромании Обследованы больные: наркоманией – 16 чел. алкоголизмом – 10 чел. Уровень е-Ат к β-эндорфину норма 1 3 день 7 21

Уровень е-Ат к дофамину норма 1 3 день 7 21 Уровень е-Ат к серотонину норма 1 3 день 7 21

Тенденция изменения уровня антител к специфическому антигену у пациентов, употребляющих опиаты Определение антител к биогенным аминам в сыворотке крови пациентов, употребляющих опийные препараты, может быть использовано для диагностики различных этапов наркотизации

Уровень антител к эндогенным биорегуляторам у здоровых доноров

Иммунохимическая диагностика заболеваний зависимости Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и могут быть использованы для ранней диагностики заболеваний • созданы новые иммуноферментные методы выявления е-АТ к эндогенн низкомолекулярным соединениям с различной структурой и физиологическими функциями «Адимустат» : новый метод диагностики различных типов заболеваний зависимости Е-Ат к: β-эндорфину серотонину дофамину орфанину ангиотензину гистамину

Диагностические наборы АДИМУСТАТ Выявление антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови: Антиген β-эндорфин Серотонин дофамин гистамин орфанин ангиотензин

Диагностические наборы АДИМУСТАТ Оформлены все нормативные документы в МЗСР России Получены 2 российских патента Зарегистрирована торговая марка продукта

Выявление социобиологических факторов риска Оценка психоэмоционального состояния: консультация психолога Анкетирование Тестирование на приборе (полиграф) Генетическое тестирование Диагностика «Адимустат» Заключение врача-психолога

Сферы применения Метод «Адимустат» позволяет выявлять антитела к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови человека с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Метод может быть использован в следующих направлениях: • для оценки развития патологии зависимости(наркомании, алкоголизма, игромании) и определение тяжести заболевания • для диагностики и раннего выявления патологических изменений в организме и оценке его адаптационных возможностей. «Адимустат» позволяет определить тяжесть патологической зависимости, а в случае с наркозависимостью оценить наркотический «стаж» .

Обучение врачей-лаборантов методам Комплексной методики 7 – 10 ноября 2011 г. МНПЦ наркологии организует Научно-практический семинар по применению Метода диагностики «Дианарк» раннего выявления потребления наркотических веществ Теоретические лекции и практический курс обучения методам: • ИХА наркотических веществ в слюне • ИФА антител к наркотикам в крови • ИФА антител к эндогенным биорегуляторам для оценки иммунного статуса и установления факторов риска развития болезни зависимости

ВЫВОДЫ 1. При развитии болезни зависимости происходит нарушение функционирования иммунной системы, проявляющиеся в изменении синтеза естественных иммуноглобулинов, связывающих нейромедиаторы опиоидной и моноаминовой природы. 2. Обнаружены новые диагностические маркеры, отражающие начальные стадии заболевания зависимости, а также эффективность проводимой терапии. Они могут использоваться в клинической практике, для ранней диагностики, контроля, профилактики и своевременной диспансеризации. 3. Предложен новый метод ранней диагностики развития тяжелых форм заболеваний зависимости, положенный в основу современной медицинской технологии выбора комплексного подхода лечения и реабилитации больных.

Программа Дианарк Спасибо за внимание! www. dianark. ru www. diamedica. ru