Действие экзогенного пероксида водорода на субпротопласты из пыльцевых трубок Nicotiana tabacum L. Максимов Н. М. МГУ им. М. В. Ломоносова Биологический факультет Кафедра физиологии растений Москва, 2014 г.
Перекись водорода – важный регулятор в растительной клетке ü АБК зависимое закрывание устьиц ü Рост корневого волоска ü Программируемая клеточная гибель и др. Роль H 2 O 2 в репродуктивных процессах?
Цель: выявление мишеней для пероксида водорода в пыльцевой трубке Во многих случаях мишенями для H 2 O 2 являются ион-транспортные системы плазмалеммы. Изучение трансмембранного транспорта затруднено из-за наличия клеточной стенки. Объект исследования: Субпротопласты субпротопласты из пыльцевых отшнуровываются трубок. от апекса растущей трубки
Цитологическая характеристика субпротопластов Окрашивание Tinopal подтверждает Окрашивание FМ 4 -64 подтверждает целостность отсутствие клеточной стенки плазмалеммы
Цитологическая характеристика субпротопластов Пыльцевые трубки после 1 часа инкубации Ядро генеративной клетки Пыльцевое зерно с ядром и безъядерный субпротопласт (окрашивание DAPI)
![H 2 O 2 -индуцированный вход Ca 2+ через Увеличение [Ca 2+]cyt при действии](https://present5.com/presentation/-83308044_438302864/image-6.jpg "H 2 O 2 -индуцированный вход Ca 2+ через Увеличение [Ca 2+]cyt при действии")
H 2 O 2 -индуцированный вход Ca 2+ через Увеличение [Ca 2+]cyt при действии перекиси нифедипин-чувствительные каналы (10 O -индуцированная динамика [Ca ] μМ) H 2 1. 0 Интенсивность флуоресценции, отн. ед. 1. 0 2+ 2 c эффективно ингибируется нифедипином Динамика [Ca 2+]c при действии H 2 O 2 (10 μМ) 0. 8 0. 6 Окрашивание Ca 2+ зондом Fluo-3 0. 6 Перекись Нифедипин Перекись 0. 4 0. 2 Нифедипин ингибитор Ca 2+ каналов L-типа 0. 0 0 0 -0. 2 100 200 300 400 500 Время после добавления H 2 O 2, с 600 700
Гиперполяризация плазмалеммы при действии перекиси (10 μМ) Динамика Em после воздействия H 2 O 2 1. 9 1. 8 Fb/Fg Ратиометрический краситель Di-4 -ANEPPS: 1. 7 üСъемка в двух каналах при возбуждении синим (Fb) и зелёным (Fg) светом; üОтношение Fb/Fg обратно пропорционально величине мембранного потенциала (Em) 1. 6 Контроль 1. 5 Перекись 1. 4 0 100 200 300 Время после добавления H 2 O 2, с 400
Гиперполяризация плазмалеммы при действии перекиси (10 μМ) Распределение субпротопластов по величине Em 0. 3 -85 м. В Частота класса -65 м. В 0. 2 Контроль Di. BAC 4(3) позволяет определить абсолютные значения Em. Перекись 0. 1 Расчет ведется относительно полностью деполяризованных клеток 0 -130 -80 Em, м. В -30
Тест с красителем FDA демонстрирует жизнеспособность субпротопластов при 100 μМ H 2 O 2 Контроль
p. H цитозоля не изменяется при действии 100 μМ H 2 O 2 Распределение субпротопластов по величине p. H 0. 6 Ратиометрический p. Hчувствительный краситель BCECF Частота класса 6. 91± 0. 03 6. 88± 0. 04 0. 3 Контроль Перекись 0 6 6. 5 7 p. H 7. 5 8
Заключение Полученные результаты свидетельствуют о возможном участии пероксида водорода в передаче экзогенного сигнала в растущей пыльцевой трубке. При этом, мишенями для H 2 O 2 на плазмалемме являются: 1. Нифедипин-чувствительные Ca 2+ каналы; 2. Ион-транспортные системы, контролирующие величину мембранного потенциала.
Спасибо за внимание!
![Выводы 1. Пероксид водорода в низкой концентрации (10 μМ) вызывает увеличение [Ca 2+]cyt в](https://present5.com/presentation/-83308044_438302864/image-13.jpg "Выводы 1. Пероксид водорода в низкой концентрации (10 μМ) вызывает увеличение [Ca 2+]cyt в")
Выводы 1. Пероксид водорода в низкой концентрации (10 μМ) вызывает увеличение [Ca 2+]cyt в субпротопластах из пыльцевых трубок; 2. Ингибиторный анализ показал, что Ca 2+ входит в цитозоль через нифедипин-чувствительные каналы; 3. Также, пероксид водорода вызывает гиперполяризацию плазматической мембраны субпротопластов. Полученные результаты свидетельствуют о возможном участии пероксида водорода в передачи сигнала в растущей пыльцевой трубке.
Скачать презентацию Действие экзогенного пероксида водорода на субпротопласты из пыльцевых
MaksimovNM_Lomonosov_14.ppt