Цитологические методы Исследуются материалы аутопсии биопсии мазки которые

Цитологические методы Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. • цитомегаловирусная инфекция - в срезах ткани или в моче обнаруживаются характерные гигантские клетки- «совиные глаза» • бешенство - включения в цитоплазме клеток (тельца Бабеша-Негри). «совиные глаза»

I. ЭКСПРЕСС МЕТОД 2)Обнаружение вирусного АГ или НК в исследуемом (клиническом материале) с помощью: • РИФ • ИФА • РИА 3)НК вируса - ПЦР 4)Вируса – методов электронной микроскопии и иммунной электронной микроскопии

РИФ - Реакция иммунофлюоресценции Метод основан на использовании антител, связанных с красителем. • применяется для быстрой расшифровки этиологии острых респираторных вирусных инфекций. • требует содержания в клиническом материале достаточно большого числа инфицированных клеток. ИФА - Иммуноферментный анализ Метод основан на мечении антител ферментами • позволяет измерять растворимые антигены. • могут использоваться различные виды клинического материала.

РИА - Радиоиммунный анализ Метод основан на метке антител радиоизотопами, . • высокая чувствительность в определении вирусного антигена. • недостаток - работа с радиоактивными веществами и использование дорогостоящего оборудования (гаммасчетчиков). метод ПЦР - полимеразной цепной реакции Метод заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусспецифической последовательности ДНК. В основе – способность вирусной ДНК гибридизироваться с меченой комплементарной ДНК. • позволяет обнаружить несколько копий вирусной ДНК в исследуемом материале.

С помощью этого метода можно обнаружить собственно вирус. Для успешного определения вируса необходима его высокая концентрация в пробе (~ миллион частиц/мл)

Реакция гемагглютинации (РГА)

В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - эритроциты оседают в виде пуговки или колечка.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

РСК для идентификации вируса Комплемент – сложная система сывороточных протеинов. Нестоек, разрушается при 55 градусах в течение 30 минут. При комнатной температуре комплемент разрушается в течение 2 -х часов. Очень чувствителен к продолжительному встряхиванию, к действию кислот и ультрафиолетовых лучей. Но длительно (до шести месяцев) сохраняется в высушенном состоянии при низкой температуре. Комплемент адсорбируется только на комплексе «антитело – антиген» .

Если образуется комплекс «антитело – антиген» , адсорбирующий на себе комплемент, реакция связывания комплемента положительна и лизис эритроцитов в гемолитической (индикаторной) системе не произойдет. Если комплекс «антиген – антитело» не образуется, то реакция связывания комплемента отрицательная, комплемент остается свободным, и при добавлении гемолитической системы наступает лизис эритроцитов.

Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток А - цитопатогенное действие (ЦПД) в результате размножения вирусов; Б - ЦПД отсутствует в результате предварительной нейтрализации вирусов антителами.

• • ФИТЦ (изотиоцианат флуоресцеина) (зеленое свечение) сульфохлорид родамина (красное свечение)

III. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (СЕРОДИАГНОСТИКА) Реакции антигенов с антителами называются серологическими или гуморальными, т. к. участвующие в них специфические антитела всегда находятся в сыворотке крови. Эти реакции могут быть воспроизведены в лабораторных условиях с диагностической целью.

серотипирование (сероидентификация) антигена в целом с помощью известного антитела (иммунной диагностической сыворотки). серодиагностика - определение природы антитела в сыворотке крови больного при вирусных, реже других инфекционных заболеваниях с помощью известного антигена (диагностикума). Иммунные диагностические сыворотки препараты, содержащие известные антитела для определения родовой, видовой и типовой принадлежности антигена. Диагностикумы - препараты, содержащие известный антиген в виде взвеси живых или убитых бактерий, продуктов их расщепления, токсины, вирусы.

III. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (СЕРОДИАГНОСТИКА) ØРТГА ØРСК ØИФА ØРН с учетом: • по нейтрализации ЦПД • по нейтрализации инфекционной активности вируса • по цветной пробе Солка • по РТГАдс