Биохимические методы исследования Используют те

Биохимические методы исследования

• Используют те соединения, измерение содержания которых позволяет достоверно охарактеризовать состояние определенного органа, т. е. несет диагностическую информацию

• из 5 млн белков человеческого организма на практике исследуют около 200. • В рамках исследований протеома изучают тысячи белковых молекул, список со временем может расширяться.

Сфера биохимических исследований охватывает: • • Аналиты с разной структурой и свойствами: Ионы Небольшие органические молекулы Сложные высокомолекулярные соединения - ферменты. Гормоны и биологически активные соединения

Классификация клинико-химических аналитов: • белки, • липиды, • углеводы; По особенностям структуры: По связи с функцией определенных органов: • Печени, Почек, Сердце, Легкие Функциональной ролью: • гормоны и медиаторы, • параметры кислотно-основного равновесия; По связи с поражением отдельных органов и систем: • Сахарный диабет, • Нервно-мышечные заболевания.

Объекты биохимических исследований в клинике: • • Кровь, Моча; Экссудаты, транссудаты, Слюна, Слезная жидкость Пот Биоптаты тканей. Клетки крови и тд.

• Наиболее часто определяемый показатель: активность ферментов Активность определяют: в сыворотке, секретах, тканевой жидкости и др.

• Большая часть ферментов в сыворотке крови — тканевые. • Попадают в кровь в результате цитолиза клеток. • В норме в плазме активность ферментов низкая. • К активности ферментов в крови приводит: • поражение клеточных мембран вирусами, химическими соединениями; • гипоксия, аноксия и ишемия тканей;

Судьба попадающих в кровь ферментов Повреждение клеток (гепатоциты, кардиомиоциты и др. ) Высвобождение ферментов Кровяное русло (повышение активности – гиперферментемия) Дальнейшая «cудьба» Выведение (моча, кал, поглощение клетками РЭС)

Фермент -Амилаза Липаза трансамидиназа Орган Поджелудочная железа, слюнные железы Диагностическое значение Острый панкреатит, паротит Аланинаминотрансфер Печень аза (Ал. АТ) Заболевания паренхимы печени Аспартатаминотрансф Миокард, печень ераза (Ас. АТ) Инфаркт миокарда, заболевания печени, поражение скелетных мышц Гаммаглутамилтрансф Печень ераза (ГГТ) Заболевания желчевыводящих путей, алкоголизм Креатинкиназа (КК) Скелетные мышцы, сердце, гладкие мышцы Инфаркт миокарда, поражение мышечной ткани Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) Печень, сердце, скелетные Заболевания паренхимы печени, инфаркт

Напоминание • мккат/л = мкмоль/с л; • нкат/л = нмоль/с л • Соотношение международной единицы и катала: • 1 Е = 16, 67 нкат

• Преаналитические требования при исследовании ферментов однотипные: • Если нет специального указания, для плановых биохимических исследований кровь забирают из вены утром натощак (через 8 -10 ч последнего приема пищи). • Следует избегать гемолиза; • До исследования сыворотку можно хранить в течение дня при комнатной температуре, неделю — при +4 °С.

Наиболее часто определяемые ферменты

Аланинаминотрансфераза (Ал. АТ) • Ал. АТ сопровождает: • Острые и хронические заболевания печени любой этиологии (гепатиты, цирроз, холестаз, инфекционный мононуклеоз); • Травма или повреждение скелетных мышц, печени, миокарда; • Миозит, дерматомиозит;

ВЛИЯЮЩИЕ ФАКТОРЫ: активности: • пероральные контрацептивы, изониазид, • кодеин, • кортизон, • гепатотоксичные препараты.

Альфа-амилаза • Источники: • Слюнные железы (S-тип) • Поджелудочная железа (Р-тип). • Выводятся с мочой. Невысокая активность: • Слизистая оболочка кишечника, • Фаллопиевые трубы

активности: • Киста или псевдокиста поджелудочной железы; • Кишечная непроходимость; • Внематочная беременность (выход в кровоток амилазы из фаллопиевых труб); • Заболевания слюнных желез — эпидемический паротит, камни в слюнной железе или ее протоке;

Аспартатаминотрансфераза (Ас. АТ) активности фермента сопровождает: • Острый инфаркт миокарда, острый миокардит; • Острые и хронические заболевания печени любой этиологии; • Инфекционный мононуклеоз с поражением печени; • Шок, сердечная недостаточность с застойными явлениями в печени;

Креатинкиназа (КК) • Активность КК по мере убывания: скелетные мышцы, сердечная мышца, головной мозг. • Изоферменты КК: • ММ (в скелетной мышце) • МВ (в кардиомиоцитах) • ВВ (в мозговой ткани).

• активности в сыворотке крови МВ-КК признак некроза кардиомиоцитов. • - через 4 -6 ч после ИМ, максимум - через 12 -24 ч, • Нормализация - через 2 -4 сут; Примечание: • В настоящее время для диагностики ИМ используют ТРОПОНИНЫ

Гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ) • Участвует в переносе аминокислот из крови в клетки. • Обнаруживают в почках, желчных канальцах и эпителиальных клетках, желчных протоков. • Основной источник ГГТ в сыворотке гепатоциты. • Активность фермента в моче в 2 -6 раз выше, чем в крови. • .

• В моче ↑ активности фермента свидетельствует о поражении проксимальных канальцев нефрона • ↑↑ активности фермента сопровождаются: • обтурация желчных путей; • острые и хронические гепатиты; • токсические поражения печени; • панкреатит острый и хронический; • нефротический синдром;

Тропонины I и Т • Тропонины I и Т (Tpl, Тр. Т) — фрагменты сократительного белкового комплекса поперечнополосатых мышц и мышцы сердца, • Участвуют в процессе регуляции мышечного сокращения.

КЛИНИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ • Ранние и высокоспецифичные маркеры поражения миокарда: • Уровень в крови через 4 -8 ч после начала болей в груди; • концентрация может сохраняться до 4 -10 сут после инфаркта миокарда. • Уровень ТРО в крови коррелирует с летальностью.

Используют для: • 1. Диагностики ИМ, • 2. Выбора тактики лечения больных с ОКС синдромом, в том числе пациентов с нестабильной стенокардией, • 3. Обследования пациентов с ИМ и нестабильной стенокардией в прогностических целях,

Референтные пределы: • В сыворотке (плазме) крови: Tnl — менее 0. 1 мкг/л; Тn. Т - менее 0, 01 мкг/л Полуколичественный: Положительный/отрицательный

Липаза • Липаза — фермент, катализирующий гидролиз ТГ (нейтрального жира) в тонкой кишке, куда фермент секретируется поджелудочной железой • Увеличение активности в сыворотке крови, является следствием цитолиза и некроза ацинарных клеток поджелудочной железы.

КЛИНИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ • Диагностика и мониторинг острого и хронического панкреатита. • В отличие от альфа-амилазы, активность липазы не повышается при паротите, внематочной беременности, аппендиците.

Увеличение активности липазы • острый панкреатит любой этиологии • начало увеличения — через 4 -8 ч, максимальная активность — через 24 ч, • снижение до референтного уровня — через 8 -14 сут

Увеличение активности липазы • Рак поджелудочной железы; • Киста или псевдокиста поджелудочной железы; • Обострение хронического панкреатита (не всегда); • Перитонит; • Заболевания желчного пузыря.

Клинико-лабораторная диагностика дислипопротеидемий • Липидный профиль (ХС, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПНП, расчет индекса атерогенности) • Электрофорез ЛП в полиакриламидном геле • Апопротеины: апо С, апо В, апо А

Триглицериды • Триглицериды (ТГ) — эфиры глицерина и высших жирных кислот. • Основная функция — энергетическая. • Синтез эндогенных ТГ осуществляется в печени и жировой ткани;

• В эпителии тонкой кишки ресинтез ТГ из продуктов гидролиза липидов пищи • Повышенная концентрация ТГ в крови ассоциируется с повышенным риском развития атеросклероза и ишемической болезни сердца.

• Референтные пределы: триглицериды — 0, 5 -1, 7 ммоль/л.

КЛИНИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ • Для диагностики первичных и вторичных нарушений липидного обмена, • Оценка риска атеросклероза и его осложнений. • Мониторинг коррекции атерогенных нарушений липидного обмена.

Холестерин общий (Хсоб) • ХС — циклический спирт, структурный компонент мембран клеток, • исходный субстрат при синтезе половых гормонов, глюкокортикоидов, желчных кислот, витаминов D, А.

• Синтезируется в печени (до 80%) и поступает в организм с продуктами животного происхождения (мясо, сливочное масло, яйца и др. ).

В крови находится в составе • липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), • высокой плотности (ЛПВП), • очень низкой плотности (ЛПОНП).

• Повышенное содержание общего холестерина в крови ассоциируется с высоким риском атеросклероза и ишемической болезни сердца.

Референтные пределы: 3, 1 -5, 2 ммоль/л • Риск развития ишемической болезни сердца и ее осложнений: • низкий— менее 5, 0 ммоль/л; • умеренный — 5, 0 -6, 3 ммоль/л; • высокий — более 6, 3 ммоль/л

• При концентрации 5, 0 ммоль/л и выше для оценки атеросклеротических изменений определяют ХС в комплексе с ТГ, ХС-ЛПВП и ХС ЛПНП и расчетом индекса атерогенности.

Холестерин липопротеидов высокой плотности (ХС-ЛПВП) • ЛПВП— мицеллы, состоят из фосфолипидов, специфических белков - аполипопротеинов (апо-белков) и холестерина, • ЛПВП в крови транспортируют ХС, ФЛ, от клеток периферических тканей, от сосудов сердца в печень • ХС выводиться из организма в виде желчных кислот. • Сниженный уровень ХС-ЛПВП рассматривают как фактор риска развития атеросклероза

Референтные пределы: 0, 9 1, 9 ммоль/л • Снижение концентрации ХС-ЛПВП менее 0, 9 ммоль/л для мужчин и менее 1, 2 ммоль/л для женщин связывают с повышенным риском развития ИБС и ее осложнений, • Уровень выше 1, 56 ммоль/л играет защитную роль. • Для оценки атерогенных нарушений липидного обмена исследуют комплекс: ТГ, ХСоб, ХСЛПНП, ХС-ЛПВП с расчетом индекса атерогенности.

ИНДЕКС АТЕРОГЕННОСТИ • Индекс атерогенности — показатель нарушений липидного обмена и адекватности гиполипидемической терапии. • Оценивают в комплексе с результатами других тестов липидного профиля. • Метод исследования: расчет с использованием результатов исследования ОХС, ХС-ЛПВП по формуле (Климов А. Н. , 1995):

K индекс атерогенности Рекомендуемые пределы: не более 4

Липопротеиды низкой плотности: • Мицеллы, состоящие ХС, апо. Вбелков, ФЛ и ТГ; • Образуются из ЛПОНП, • Переносят ХС из печени к клеткам периферических тканей. • Уровень ХС-ЛПНП в крови положительно коррелирует с риском развития ИБС.

Референтные пределы: 2, 13, 5 ммоль/л. • Увеличение концентрации ХС-ЛПНП более: • 3, 5 ммоль/л — с повышенный риск развития ИБС и ее осложнений • 3, 5 -4, 1 ммоль/л — пограничный риск, • более 4, 1 ммоль/л — высокий.

Липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП) • мицеллы, состоящие из ТГ, специфических апо С и апо В -белков, ХС и ФЛ, преимущественно экзогенных. • Основное место синтеза ЛПОНП — печень, • Основная роль — транспорт эндогенных ТГ из печени в периферические ткани. • В крови ЛПОНП превращаются в ЛПНП в результате гидролиза ТГ. • ЛПОНП относят к высокоатерогенным липопротеидам. Р в большинстве лабораторий не определяется.

Благодарю за внимание.