Биохимические методы диагностики врожденной и наследственной патологии

Общая характеристика наследственных болезней обмена веществ

Моногенные болезни это – разнородная по клиническим проявлениям группа заболеваний, обусловленных мутациями на генном уровне

Виды генных мутаций • • Миссенс-мутации Нонсенс-мутации Сдвиг рамки считывания Делеции Вставки (инсерции) Нарушения сплайсинга Увеличение числа (экспансия) тринуклеотидных повторов

• Среди наследственных заболеваний, нарушения обмена занимают значительное место. • Суммарно врожденные ошибки метаболизма, или НБО, встречаются примерно у каждого 500 -го новорожденного. • Генные мутации часто формируются как результат ошибки в ходе репликации ДНК. При МБ в процесс вовлекаются многие органы и системы при одной нозологической форме, что объясняется плейотропным действием мутантного гена.

Патогенез метаболическихих болезней может быть выражен схематично: Мутантный аллель Патологический первичный продукт (чрезмерный, недостаточный, аномальный, отсутствующий) Нарушение цепи биохимических процессов Патология внутри клетки Патология органов Патология организма

Метаболические расстройства своим происхождением обязаны врожденной недостаточности определенного фермента, наступающей вследствие мутации кодирующего гена. Молекулярные дефекты могут заключаться в: • поломках структуры ДНК, • нарушении трансляции генетического кода - от ДНК к РНК, • изменениях в структуре РНК, • расстройстве передачи информации от РНК на рибосомы.

Генные мутации могут проявляться: • заменой или делецией одного из оснований оперона, • делением или перестановкой отдельных фрагментов ДНК. • Делеция фрагментов участков ДНК, контролирующих активность гена, может привести к полному прекращению синтеза соответствующих белков или образованию белков с аномальной структурой. • Примерно 75% гeнных мутаций ведущих к развитию ферментопатий, составляют замены основания в молекуле ДНК, в результате чего изменяется генетический код и, соответственно, происходит замена одной аминокислоты на другую в полипепдной цепи фермента. Последовательность аминокислот может быть изменена: • в структуре активного центра фермента, • в регионе связывания апофермента с коферментом (чаще всего витамином или металлом).

БИОХИМИЧЕСКИЕ «БЛОКИ» ПРИ НАСЛЕДСТВЕННЫХ НАРУШЕНИЯХ ОБМЕНА АМИНОКИСЛОТ Тироксин 1 Диета 4 Фенилаланин Фенилпировиноградная кислота 2 Тирозин ДОФА Меланин Гомогентизиновая кислота (экскретируется при алкаптонурии) (экскретируется при ФКУ) 3 Ацетоуксусная кислота СО 2+Н 2 О Фенилкетонурия (1) алкаптонурия (3) Альбинизм (2) врожденная недостаточность тироксина (дисгормоногенез) (4)

КЛАССИФИКАЦИЯ 3 разных принципа могут быть положены в основу классификации генных болезней: • генетический, • клинический, • патогенетический.

Генетический принцип классификации генные болезни подразделяют на группы согласно типам наследования: – аутосомно-доминантные, – аутосомно-рецессивные, – Х-сцепленные доминантные, – Х-сцепленные рецессивные, – Y-сцепленные (голандрические) – митохондриальные.

Клинический принцип классификации основывается на преимущественном вовлеченных системы или органа в патологический процесс. Так, различают НБО: • нервные, • нервно-мышечные, • кожные, • глазные, • опорно-двигательного аппарата, • эндокринные, • крови, • сердечно-сосудистой системы, • психические, • мочеполовой системы, • желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), • лёгких.

• • Патогенетическая классификация подразделяет НБО на 3 группы в зависимости от того, на что направлено основное патогенетическое звено. Патогенез болезни может привести к: нарушенному обмену веществ, аномалиям морфогенеза комбинации того и другого.

Наследственные болезни обмена подразделяют по типам обмена: • НБО аминокислот — алкаптонурия, альбинизм, ФКУ, гипервалинемия, гистидинемия, ГЦУ, лейциноз и др. • НБО углеводов — галактоземия, гликогенозы, дисахаридазная недостаточность, лактат-ацидоз, непереносимость фруктозы и др. • НБО липидов — липидозы плазматические (наследственная гиперлипидемия, гиперхолестеринемия, недостаточность лецитин-холестерин ацилтрансферазы); липидозы клеточные: ганглиозидозы (болезнь Тей Сакса) муколипидозы (псевдо-Гурлер синдромы), сфинголипидозы (Нимана-Пика болезнь), цереброзидозы (болезнь Гоше) и др. • НБО пуринов и пиримидина — подагра (отдельные формы), синдром Леш-Нихана, оротовая ацидурия и др.

Наследственные болезни обмена подразделяют по типам обмена: • НБО биосинтеза кортикостероидов: адрено-генитальный синдром, гипоальдостеронизм и др. • НБО порфиринового (порфирии) и билирубииового обмена (синдром Криглер-Найяра, синдром Жильбера и др. ) • НБО соединительной ткани — мукополисахаридозы, болезнь Марфана, синдром Элерса-Данлоса и др. • НБО металлов — болезнь Вильсона и болезнь Менкеса ( Cu), гемохроматоз ( Fe), семейный периодический паралич (K ) и др. • НБО эритрона — гемолитические анемии, недостаточность Гл-6 -Р -дегидрогеназы, глютатион редуктазы в эритроцитах и др. • НБО лимфоцитов и лейкоцитов — иммунодефицитные состояния при недостаточности аденозин-деаминазы, и др. • НБО транспорта систем почек (тубулопатии): почечный канальцевый ацидоз, болезнь Фанкони, вит. Д-резистентный рахит • НБО ЖКТ — синдром мальабсорбции при недостаточности дисахаридаз, хлоридоррея, патология кишечного транспорта глюкозы, галактозы. .

Что должен сделать врач, если у него возникл возник подозрение на наличие одного из перечислен заболеваний: • • • Провести осмотр больного по системе «Соматогенетическое исследование» ; отметить все изменения, которые он обнаружит. Ознакомиться с родословной семьи и направить к врачу-генетику. После того, как в медико-генетическом центре будет установлен диагноз, лечащий врач будет вместе с врачом-генетиком осуществлять диспансерное наблюдение за больным и его лечение.

Клинические особенности больных с подозрением на врожденное нарушение метаболизма Анамнез Кровное родство родителей Роды (сколько недель) Клиника острое метаболическое нарушение рецидивирующая рвота клиническая картина, сходная с сепсисом/менингитом без лаб-ных данных тахикардия/аритмия офтальмологические нарушения задержка в развитии макроцефалия атаксия пороки развития случаи внезапной смерти в родословной Эпилепсия Нефропатия/тубуллопатия Рейе подобный синдром гепатопатия кардиомиопатия катаракта потеря приобретенных навыков лейкодистрофия экстрапирамидные нарушения аутизм или аутистичные черты почечно-каменная болезнь Нарушения со стороны сердечно-сосудистой системы Прочее летаргия, кома резкий запах мало пьет мышечная гипотония сыпь общая задержка роста, веса микроцефалия судороги синдактилия 2 -3 пальцев нарушения слуха прочее

Лабораторные особенности больных с подозрением на врожденное нарушение метаболизма Лабораторные данные метаболический ацидоз NH 3___мкмоль/л ) Миоглобинурия Мочевая кислота ↑ /↓ Пониженный уровень холестерина кетоацидоз Повышенный анионный промежуток повышение уровня трансаминаз лактат___ммоль/л кретинин ↑ /↓ Постпрандиальные кетоновые тела ↑ Прочие: Гипогликемия___ ммоль/л Повышение уровня креатинкиназы ) Анемия/тромбоцито/ лейкопения ٱ Алкалоз ٱ Перманентная кетонурия Предположительный диагноз/диагноз (при наличии контроля за течением болезни), необходимо указать на проведение специальных анализов

Гомоцистинурия.

Мукополиcaхаридоз, I тип. (синдром Гурлер)

Мукополисахаридоз, IV тип.

COFS-синдром. Аминоадипиновая ацидурия

Методы диагностики наследственных болезней обмена веществ

Лабораторные исследования при подозрении на НБО

В качестве первого этапа диагностики НБО проводят: – экспресс тесты мочи, которые позволяют быстро выявить повышенное количество патологических веществ. • Некоторые качественные реакции являются неспецифическими, но положительный тест может направить дальнейщий поиск.

Сбор и хранение образцов. · Материал исследования – утренняя моча (максимальная концентрация веществ, которые эксткретируются) · Важной составляющей является получение клинической информации, которая содержит: возраст, рабочий диагноз, наличие специальной диеты, прием медикаментов. · Специальная диета и медикаменты могут быть причиной ошибок и давать интерференцию при интерпретации результатов. · Материал необходимо доставить в лабораторию

Простые метаболические тесты мочи • Оценка запаха и внешнего вида (цвета) мочи. Необычный цвет мочи может быть обусловлен: · Лекарственными средствами (например, феназопиридином); · продуктами питания (например, свеклой); • Обращают внимание на любой цвет, отличающийся от нормального (соломенного)

Диагностическое значение цвета мочи (за Johannes Zschocke, Georg F. Hoffmann, 1999 Georg F. Hoffmann, William L. Nyhan et al, 2002) Цвет Голубой Субстанция (метаболит) Индиго Нарушения Болезнь Хартнупа Сине-коричневый Гомогентизат Алкаптонурия Коричневый Мет-гемоглобин Миоглобинурия Краснокоричневый Гемоглобин / метгемоглобин Гемоглобинурия Красный Эритроциты Гематурия Порфирины Порфирии (за исключением острой перемежающейся порфирии) Пиразолон Лекарства Фенолфталеин Гиперурикозурия; физиологическое Свекла столовая Пища

Запах мочи и тела при некоторых метаболических нарушениях (за Johannes Zschocke, Georg F. Hoffmann, 1999 Georg F. Hoffmann, William L. Nyhan et al, 2002) Запах Субстанция (метаболит) Нарушения Мышиный Фенилацетат Фенилкетонурия Кленового сиропа 2 кетоизовалериановая, 2 кетоизокапроновая и др. кислоты Болезнь «кленового сиропа» Кошачьей мочи 2 -ОН-изовалериановая к-та 3 -метилкротонилглицинурия Капусты 2 -ОН-масляная к-та Тирозинемия, тип 1 Прогорклого масла 2 -кето-4 -метиолмаслянная кислота Тирозинемия, тип 1 Кислый Метилмалоновая кислота Метилмалоновая ацидемия Серный Сероводород Цистинурия Разложившейся рыбы Триметиламин, диметилглицин Триметиламинурия, диметилглицинурия

• Тест на кетоновые тела - положительный при митохондриальных заболеваниях и органических ацидуриях • Отсутствие или низкий уровень кетоновых тел в ответ на гипогликемию свидетельствует о нарушении -окисления жирных кислот или о гликогенозе 1 типа. • Гомоцистинурию и цистинурию выявляют с помощью цианид-нитропруссидного теста. • Динитрофенилгидразиновый тест на кетокислоты будет положительным при болезни кленового сиропа. • Нитрозонафтоловый тест нарушение метаболизма тирозина (тирозинемия).

• Проба с магниевым реактивом позволяет обнаруживать кетокислоты, которые в большом количестве появляются в моче при наслетственных заболеваниях (фенилкетонурия, тирозиноз, гистидинемия) • Проба с Na. OH позволяет выявить гомогентизиновую кислоту, которая экскретируется при алкаптонурии • Повышение уровня индикана в моче встречается при заболеваниях, связанных с усиленным распадом белка или усиленным гниением белковых веществ в кишечнике • Реакция на кальций положительна при гипервитаминозе D, гиперпаратиреозе • Проба на сахар • Проба на фруктозу положительна при фруктозурии, пищевой нагрузке фруктами и медом • Проба с изатиновым реактивом позволяет выявить пролин

Тесты суточной мочи • Определение кальция и фосфора • Определение эксреции оксипролина. Показания: первичные и вторичные нарушения обмена соединительной ткани

Синдром Элерса. Данлоса

Синдром Марфана

Синдром Марфана. Тотальная липодистрофия

Изменения рутинных биохимических показателей сыворотки крови Вещество Глюкоза↓ Заболевание Tyrosinemia type 1 (4) MSUD (6) 3 -Methylcrotonylglycinuria (6) 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) 3 -Hydroxy-3 -methylglutaryl-Co. A lyase def. (6) Methylmalonic acidemia (7) 2 -Ketoglutarate dehydrogenase complex def. (8) Carnitine uptake defect (15) Carnitine palmitoyltransferase 1 (CPT 1) (15) Acylcarnitine translocase (15) Carnitine palmitoyltransferase 2 (CPT 2) (15) Very long-chain acyl-Co. A dehydrogenase (VLCAD) (15) Medium-chain acyl-Co. A dehydrogenase (MCAD) (15) Long-chain 3 -hydroxyacyl-Co. A dehydrogenase (LCHAD) (15) Trifunctional protein (15) Multiple acyl-Co. A dehydrogenation (MAD) (15) Glycogen storage disease (GSD) types 1, 3, 6, 8, 9, 0 (16) Galactosemia (16) Hereditary fructose intolerance (16)

Compound Глюкоза↓ Аммиак ↑ Disorder/source (Chapter) Fructose-l, 6 -diphosphatase def. (16) Pyruvate carboxylase def. (16) Glycerol kinase def. (17) Isovaleric acidemia (6) MSUD (6) 3 -Methylcrotonylglycinuria (6) 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) Biotinidase def. (7) 3 -Oxothiolase def. (7) Methylmalonic acidemia (7) Propionic acidemia (7) L-2 -Hydroxyglutaric aciduria (8) Urea cycle disorders (12) Hyperornithinemia-hyperammonemia-homocitrullinuria (HHH) syndrome (12, 13) Dibasic aminoaciduria (12, 14) Carnitine uptake defect (15) CPT 1 (15) Acylcarnitine translocase def. (15) MCAD (15) Mitochondrial energy metabolism (MITEM) (24) Severe liver disease, general (4, 16, 28, 29)

Вещество Заболевание Газы крови MSUD (6) (ацидоз) Isovaleric acidemia (6) 3 -Methylcrotonylglycinuria (6) 3 -Methylglutaconic aciduria type I (6) 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) 3 -Hydroxy-3 -methylglutaryl-Co. A lyase def. (6) Biotinidase def. (7) Holocarboxylase synthetase def. (7) Propionic acidemia (7) 3 -Oxothiolase def. (7) 3 -Hydroxyisobutyric aciduria (7) Methylmalonic acidemia (7) Multiple carboxylase def. (7) Methylmalonic acidemia, cobalamin C and D (7, 10) 2 -Ketoglutarate dehydrogenase complex def. (8) Malonyl-Co. A decarboxylase def. (8) Glutathione synthetase deficiency (9) Pyroglutamic aciduria (5 -oxoprolinuria) (9) Citrullinemia (12)

Вещество Заболевание Газы крови Argininosuccinic acidemia (12) (ацидоз) Carnitine uptake defect (15) CPT 1 (15) Acylcarnitine translocase def. (15) CPT 2 (15) Газы крови VLCAD (15) (ацидоз) MCAD (15) SCAD (15) MAD (15) Glycogen storage disease types 1 and 3 (16) Galactosemia (16) Hereditary fructose intolerance (16) Fructose-l, 6 -diphosphatase def. (16) D-Glyceric acidemia (16) Glycerol kinase def. (17) MITEM (24) Pyruvate carboxylase def. (24) Газы крови Hyperammonemia (12) (алкалоз) Lipoid adrenal hyperplasia (26)

Вещество Лактат ↑ и/или пируват ↑ Креатинин↑ Мочевина ↓ Заболевание Biotinidase def. (7) Holocarboxylase synthetase def. (7) 3 -Hydroxyisobutyric aciduria (7) 2 -Ketoglutarate dehydrogenase complex def. (8) Fumarase def. (8) Fructose-l, 6 -diphosphatase def. (16) L-2 -Hydroxyglutaric aciduria (8) Hyperammonemia (12) LCHAD, trifunctional protein (15) GSD 1, 3, 6, 9, 0 (16) Pyruvate carboxylase def. (16) MITEM (24) Lysosomal cystine transport def. , infantile (20) Lysosomal cystine transport def. , adolescent (20) Hyperoxaluria type I (23) Malonyl-Co. A decarboxylase def. (8) Lysosomal cystine transport def. , infantile (20) Lysosomal cystine transport def. , adolescent (20) Hyperoxaluria type I (23) Hyperammonemia (12) Dibasic aminoaciduria (12, 14) Lysinuric protein intolerance (12, 14)

Вещество Заболевание Мочевая кислота ↑ MCAD (15) Hereditary fructose intolerance (16) GSD 1 (16) GSD 7 (16) Hypoxanthine phosphoribosyl transferase (HPRT) (21) Phosphoribosylpyrophosphate synthetase (PRPS) (21) Мочевая кислота ↓ Molybdenum cofactor def. (10, 21) Purine nucleoside phosphorylase def. (PNP) (21) Xanthine oxidase/dehydrogenase def. (XDH) (21)

Вещество Аспартатаминотр ансфераза/ аланинаминотран сфераза (АСТ/АЛТ) ↑ Заболевание Tyrosinemia type 1 (4) 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) Mevalonic aciduria (6) 2 -Ketoglutarate dehydrogenase complex def. (8) Fumarase def. (8) Malonyl-Co. A decarboxylase def. (8) Ornithine transcarbamylase def. (12) Argininosuccinic aciduria (12) Arginase def. (12) Lysinuric protein intolerance (12, 14) Carnitine uptake defect (15) CPT 1 (15) CPT 2 (15) VLCAD (15) MCAD (15) SCAD (15) LCHAD, trifunc. prot. (15) Galactosemia (16) Hereditary fructose intolerance (16) Fructose-l, 6 -diphosphatase def. (16) GSD 3 -7 (16) GSD 4 (16) GSD 7 (16) 3β-Hydroxy-Δ 5 -C 27 -steroid dehydrogenase (3β-HSDH) def. (28) 3 -Oxo-Δ 4 -steroid 5β-reductase def. (5 β-reductase def. ) (28) Wilson disease (29) Acid lipase def. (Wolman disease) (*) α 1 -Antitrypsin def. (*)

Вещество Креатинкиназ а (КК) ↑ Алкалинфосф атаза (АЛФ) ↑ Лактатдегидр огеназа (LDH) ↑ Триглицериды ↓ Триглицериды ↑ Заболевание 3 -Methylglutaconic aciduria type I (6) 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) Mevalonic aciduria (6) CPT 2 (15) VLCAD (15) LCHAD, trifunc. prot. (15) GSD 2 (16) GSD 3 (16) GSD 5 (16) Myoadenylate deaminase def. (21) 3β-Hydroxy-Δ 5 -C 27 -steroid dehydrogenase (3β-HSDH) def. (28) 3 -Oxo-Δ 4 -steroid-5β-reductase def. (5β-reductase def. ) (28) Lysinuric protein intolerance (12, 14) Dibasic aminoaciduria (14) GSD 5 (16) Abetalipoproteinemia (25) Hypobetalipoproteinemia (25) GSD 1 (16) Glycerol kinase def. (17) Lipoprotein lipase def. (25) Apolipoprotein CTI def. (25) Dysbetalipoproteinemia (25) Hepatic lipase def. (25) Lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT) def. (25)

Вещество Холестерол ↓ Заболевание 3 -Methylglutaconic aciduria, other types (6) Mevalonic aciduria (6) Abetalipoproteinemia (25) Hypobetalipoproteinemia (25) 3β-Hydroxy-Δ 5 -C 27 -steroid dehydrogenase (3β-HSDH) def. (28) 3 -Oxo-Δ 4 -steroid 5β-reductase def. (5β-reductase def. ) (28) Smith-Lemli-Opitz syndrome (*) холестерол ↑ Lipoprotein lipase def. (25) Apolipoprotein CTI def. (25) Dysbetalipoproteinemia (25) Hepatic lipase def. (25) Hypercholesterolemia (25) Defective apo. B-100 (25) LCAT def. (25) Sterol 27 -hydroxylase def. (cerebrotendinous xanthomatosis, CTX) (28) Миоглобин ↑ CPT 2 (15) GSD 2 (16) Ферритин ↑ Dibasic aminoaciduria (12, 14) Lysinuric protein intolerance (12, 14)

Вещество Заболевание Гематологическая нейтропения Isovaleric acidemia (6) 3 -Methylcrotonylglycinuria (6) Нейтропения Methylmalonic acidemia (7) Propionic acidemia (7) Carbamyl phosphate synthetase def. (12) Lysinuric protein intolerance (12, 14) Hereditary orotic aciduria (21) Wilson disease (29) Тромбоцитопения Isovaleric acidemia (6) Mevalonic aciduria (6) 3 -Methylcrotonyl-Co. A carboxylase def. (6) Methylmalonic acidemia (7) Propionic acidemia (7) Lysinuric protein intolerance (12, 14)

Вещество Заболевание Анемия (Hb↓) Tyrosinemia type 1 (4) Methylmalonic acidemia (7) Pyroglutamic aciduria (5 -oxoprolinuria) (9) γ-Glutamylcysteine synthetase def. (9) Cobalamin C and D (10) Lysinuric protein intolerance (12, 14) Hereditary orotic aciduria (21) Pyrimidine-5 -nucleotidase def. (21) Familial LCAT def. (25) Wilson disease (29) Acid lipase def. (Wolman disease) (*) Вакуолизиро ванные лимфоциты Nearly all lysosomal storage diseases (16, 18, 19, 20) Ретикулоцит ы γ-Glutamylcysteine synthetase def. (9) γ -Glutamyl transpeptidase def. (9) GSD 2 (16)

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ • Полуколичественный метод • Применяется для диагностики нарушений обмена аминокислот и углеводов (определение аминокислот и углеводов в крови и в моче)

ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ

На нарушение обмена аминокислот указывают: • Изменения в результатах селективного метаболического скрининга; • Аминоацидемия при проведении 2 -го этапа скрининга (кровь); • Предполагаемое наследственное нарушение энергетического обмена; • Патология почек – нефролитиаз, синдром Фанкони (моча); • Положительный нитропруссидный тест (моча); • Гипераммониемия; • Эпилептическая энцефалопатия;

• Современные лаборатории для диагностики НБО АК и органических ацидурий используют газо-жидкостную хроматографию, масс-спектрометрию, тандемную массспектрометрию.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) • Количественный метод определения аминокислот • Позволяет определить не только протеиногенные аминокислоты, но и их производные

Хроматографический профиль крови здорового человека

Хроматографический профиль крови ребенка с ФКУ

Хроматографический профиль мочи. Цистинурия.

Хроматографическийпрофиль мочи. Лизинурия.

Хроматографический профиль крови. Пролинемия.

Нарушение метаболизма аминокислот с разветвленной цепью.

Массовые скринирующие программы

Программы просеивания (скрининга) Выявление у населения отдельных видов метаболических наследственных заболеваний

ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ ОБСЛЕДОВАНИЯ: h Выраженная диагностическая значимость; h надёжность; h доступность; h экономичность

ЭТАПЫ СКРИНИНГПРОГРАММЫ: Первый этап - Второй этап - hподтверждающая диагностика и предположиокончательная тельных больных постановка диагноза hвыявление

ЦЕЛИ СКРИНИРУЮЩИХ ПРОГРАММ: Основная постановка диагноза в наиболее ранний срок, введение диетического лечения для предупреждения развития умственной отсталости Первичная идентификация новорожденного с метаболическим дефектом

КРИТЕРИИ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ МАССОВОГО СКРИНИНГА h. Высокая частота заболеваемости в популяции; hтяжесть клинических проявлений, приводящих к инвалидизации; hналичие эффективных методов лечения; hналичие экономически выгодных и технически доступных программ

ЭФФЕКТИВНАЯ СКРИНИРУЮЩАЯ ПРОГРАММА h. Просвещение и обучение населения, врачей, медицинского персонала; hсуществование централизованной лаборатории с эффективной подтверждающей диагностикой; hорганизация и постоянное проведение постскринингового этапа

АДЕКВАТНАЯ СКРИНИРУЮЩАЯ ПРОГРАММА h обследование новорожденных всей популяции; h уведомление родителей о скрининге новорожденных; h правильный забор крови; h надёжное и быстрое выполнение скрининг-тестов; h быстрое проведение постскринингового этапа (подтверждения) первичного позитивного теста; h правильная подтверждающая диагностика пациентов с первичным позитивным тестом; h лечение и забота о ребёнке с фенилкетонурией, его семье врачом-генетиком, как центральной фигуре скрининга; h диспансерное наблюдение у районного педиатра; h участие в реабилитации и лечении ребёнка детского невролога и детского психиатра; h регламентация питания ребёнка с участием специалиста

Важным для постоянного действия скрининг программы является наличие полной системы, которая гарантирует правильный забор образцов, проведение лабораторного анализа, постскрининговый этап и лечение.

Неонатальный скрининг • Фенилкетонурия • Врожденный – Phe (phenylalanine) • Галактоземия гипотероз – GAO and GALT – neo. TSH and neo. T 4 • Болезнь мочи кленового сиропа • Муковисцидоз – IRT • Дефицит биотинидазы • Адрено-генитальная гиперплазия • Дефицит глюкозо-6 фосфо 17 -OHprogesterone дегидрогеназы (17 OHP) • Гемоглобинопатии sickle cell disease (SCD)

Доскрининговый этап: • В родовспомогательных учреждениях производится забор крови на хроматографическую бумагу фирмы S&S 903. • Образцы направляются в лабораторию

Бланк для взятия крови Circles 13 mm 4 1/4” Cut out 3 1/2” x 1” 2 1/8” This model produced by S&S

ПРАВИЛА ЗАБОРА КРОВИ

• Проведение методики определения веществ в первичных образцах • Контакт с лечебными учреждениями для обеспечения повторного обследования детей с повышенным содержанием вещества в первичном образце

Постскрининговый этап: • Проведение подтверждающей диагностики • Лечение выявленной патологии

Классическая фенилкетонурия (ФКУ) - наследственное нарушение обмена аминокислоты фенилаланина • В результате недостаточности фермента фенилаланингидроксилазы; • накопления токсических продуктов обмена. ФКУ наследуется по аутосомнорецессивному типу.

Клинические симптомы фенилкетонурии возникают в результате накопления токсических промежуточных метаболитов. У больного ребенка наблюдаются: h Задержка психомоторного развития, потеря приобретенных навыков; h Умственная отсталость; h кожные нарушения (опрелости, диатезы, экземы); h более светлая кожа, волосы, глаза; h рвота, срыгивания; h необычный запах (затхлый, мышиный); h судороги

Фенилкетонурия отвечаеттребованиям врожденного для заболевания , подлежащего массовому скринингу : • При поздно выявленной ФКУ ребенок теряет 50 бал IQ к концу первого года жизни. • Выявить ФКУ можно на 1 -ой неделе жизни ребенка определении фенилаланинасухих пятнах крови. в • Вовремя назначенное лечение предотвращает клини проявления заболевания.

• Для диагностики ФКУ проводят определение уровня фенилаланина в сухих пятнах крови • Детям, у которых уровень фенилаланина превышает 3 мг%, проводят 2 -ой этап скрининга: подтверждающую диагностику

Врожденный гипотиреоз (ВГ) • заболевание щитовидной железы, при котором наблюдается нарушение функции железы вплоть до полного ее выпадения, что приводит к задержке развития и дифференцировки всех органов и систем, и в первую очередь ЦНС.

Врожденный гипотиреоз отвечаетвсемрекомендуемым параметрам для врожденного заболевания , подлежащего массовому скринингу : • имеет точный биохимический маркер • раннее распознавание предотвращает развитие умственной отсталости; • раннее распознавание по одним клиническим признакам в первый месяц жизни невозможно; • Частота в различных популяциях от 1: 2500 до 1: 5000 новорожденных; • существует метод лечения на доклинической стадии; • скринирующие методы обладают достаточной чувствительностью и специфичностью.

• Для диагностики врожденного гипотиреоза определяют уровень тиреотропного гормона (ТТГ) в сухих пятнах крови • Положительный результат: ТТГ > 20 мк. Ед/мл • Подтверждающая диагностика: определение уровня ТТГ, Т 4 в сыворотке. • Лечение: тироксин под контролем уровня сывороточных ТТГ, Т 4. • По данным ВОЗ, ЮНИСЕФ уровень ТТГ более 5 мк. Ед/л является показателем йододефицита в популяции

ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ ПРОВЕДЕНИИ СКРИНИНГА h использование бланков, которые не соответствуют требованиям; h ошибочное маркирование бланков или её отсутствие; h неправильный срок забора образцов; h нарушение правил забора крови; h поздняя транспортировка образцов в лабораторию; h отсутствие постскринингового этапа

ПУТИ ПРЕОДОЛЕНИЯ ОШИБОК h Соблюдение правил забора материала и маркировки бланков; h регулярная доставка образцов в лабораторию; h обеспечение повторного забора крови до 3 -х недельного возраста ребёнка и назначения лечения в возрасте до 1 -го месяца

В Центре по диагностике и контролю за наследственными нарушениями необходимо проводить: первичную и подтверждающую диагностику, реабилитацию и диспансерное наблюдение семей, имеющих детей с НБО. Такая модель организации скринирующей программы наиболее эффективна для работы медикогенетических консультаций и региональных центров.