Скачать презентацию Бесприборные тесты для подтверждения ВИЧ-Инфекции Дробченко А Е Скачать презентацию Бесприборные тесты для подтверждения ВИЧ-Инфекции Дробченко А Е

6b29cbb3bd1afa8714afc50956e90734.ppt

  • Количество слайдов: 26

Бесприборные тесты для подтверждения ВИЧ-Инфекции Дробченко А. Е. ЗАО «Биоград» , Санкт-Петербург, http: //www. Бесприборные тесты для подтверждения ВИЧ-Инфекции Дробченко А. Е. ЗАО «Биоград» , Санкт-Петербург, http: //www. biograd. ru © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 1

Алгоритм тестирования В соответствии с диагностическим алгоритмом, утвержденным методическим письмом Минздравсоцразвития N 4174 -РХ Алгоритм тестирования В соответствии с диагностическим алгоритмом, утвержденным методическим письмом Минздравсоцразвития N 4174 -РХ от 4. 08. 2006 г. «Обнаружение антител к ВИЧ включает два этапа» • «На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов» • «На втором этапе методом иммунного блоттинга проводится определение антител к отдельным антигенам вируса. » © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 3. Стандартным методом лабораторной диагностики Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 3. Стандартным методом лабораторной диагностики ВИЧинфекции служит определение антител/антигенов к ВИЧ с помощью ИФА. Для подтверждения результатов в отношении ВИЧ применяются подтверждающие тесты (иммунный, линейный блот). © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 1. На первом этапе Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 1. На первом этапе (скрининговая лаборатория). Если получен положительный результат в ИФА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок в ИФА сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию (Лаборатория диагностики ВИЧинфекции центра по профилактике и борьбе со СПИД) для дальнейшего исследования. © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе (референс-лаборатория). Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов, выбранной для подтверждения. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе другого производителя, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. … © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе (референс-лаборатория). … При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные. … © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 2. На втором этапе (референс-лаборатория). … Референс-диагностика может проводиться также во ФГУН, на базе которых функционируют федеральный и окружные центры по профилактике и борьбе со СПИД, и в ФГУ Республиканская клиническая инфекционная больница (г. Санкт-Петербург). © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 3. Положительными (позитивными) считаются Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env, gag, pol). 4. 4. 4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антитела ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование с белком р 18. 4. 4. 5. Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределенного результата с белковым профилем включающим, белки сердцевины (gag) р 25, проводится исследование для диагностики ВИЧ-2. © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 6. При получении отрицательного Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 6. При получении отрицательного и сомнительного результата в иммунном или линейном блоте рекомендуется исследовать сыворотку в тест-системе для определения р24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ. Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование в иммунном или линейном блоте проводится через 2, 4, 6 недель после получения первого неопределенного результата. © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 7. При получении неопределенного Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) 4. 4. 7. При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ иммунном или линейном блоте через 2 недели, 3 и 6 месяцев. Если получены отрицательные результаты в ИФА, то дальнейшее исследование не требуется. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. (При наличии эпидемиологических и клинических показаний серологические исследования проводятся повторно по назначению лечащего врача или эпидемиолога). © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Подтверждающие тесты В рамках централизованных мероприятий для подтверждения результатов положительных по ВИЧ в ИФА Подтверждающие тесты В рамках централизованных мероприятий для подтверждения результатов положительных по ВИЧ в ИФА закупались 2 вида подтверждающих тестов: «Лизатный иммуноблот» - Western Blot, спектр антигенов ВИЧ разделенных при помощи электрофореза. Антигены производятся из вирусного лизата. Полный спектр. «Рекомбинантный иммуноблот» - рекомбинантные или синтетические антигены ВИЧ. Антигены производятся отдельно и наносятся дискретно. © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Western Blot Антигены из вирусного лизата распределяются по молекулярным весам при помощи электрофореза Нитроцеллюлозная Western Blot Антигены из вирусного лизата распределяются по молекулярным весам при помощи электрофореза Нитроцеллюлозная мембрана ВИЧ Сильные стороны: • Полный спектр антигенов Слабые стороны: • Высокая стоимость • Высокий процент неопределенных результатов • Высокие требования к квалификации персонала © ЗАО «Биоград» , 2010 г. Гель

Неопределенные результаты Производитель Наименование Тип Orgenics Ltd Immuno. Comb II HIV 1&2 Comb. Firm Неопределенные результаты Производитель Наименование Тип Orgenics Ltd Immuno. Comb II HIV 1&2 Comb. Firm рекомбинантный Bio-Rad Кол-во Процент неопределенных /отрицательных результатов 4 / 154 1 2, 6% Genetic Systems лизатный HIV-1 Western Blot 28 / 176 2 32 / 298 3 Bio-Rad New Lav Blot I лизатный 53 / 419 4 Bio-Rad Pepti-Lav 1 -2 рекомбинантный 4 / 214 5 15, 9% 10, 7% 12, 6% 1, 9% Inno. Genetics Inno-LIA HIV I/II рекомбинантный 10 / 300 6 3, 3% Organon Lia. Tek HIV III рекомбинантный 10 / 146 7 6, 8% Chiron (Novartis Diagnostcs) RIBA HIV-1/HIV-2 Strip Immunoblot Assay рекомбинантный 22 / 548 8 4, 0% Ora Sure HIV-1 Western Blot лизатный 100 / 495 9 45 / 264 10 20, 2% 17, 0%

1. Инструкция по применению Immuno. Comb II HIV 1&2 Comb. Firm, стр. 4 2. 1. Инструкция по применению Immuno. Comb II HIV 1&2 Comb. Firm, стр. 4 2. Инструкция по применению GS HIV-1 Western Blot, стр. 24 - данные для группы высокого риска, образцы отрицательные по EIA (ИФА) 3. Инструкция по применению GS HIV-1 Western Blot, стр. 22 - данные для доноров крови, образцы отрицательные по EIA (ИФА) 4. Инструкция по применению New Lav Blot I, стр. 10 5. Инструкция по применению Pepti-Lav 1 -2, стр. 9 6. Описание продукции на сайте производителя 7. Validation of a new immunoblot assay (Lia. Tek HIV III) for confirmation of human immunodeficiency virus infection, Transfusion, 1998 Aug; 38(8): 776 -81. 8. Evaluation of Chiron HIV-1/HIV-2 Recombinant Immunoblot Assay, Journal of Clinical Microbiology, Nov. 1996, p. 2650– 2653 9. Инструкция по применению Ora Sure HIV-1 Western Blot, стр. 14 — данные для группы низкого риска 10. Инструкция по применению Ora Sure HIV-1 Western Blot, стр. 14 — данные для группы высокого риска © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Наименование Определяемые антитела: Оборудование / подготовка к Env к Gag к Pol к Env Наименование Определяемые антитела: Оборудование / подготовка к Env к Gag к Pol к Env растворов ВИЧ 1 ВИЧ 2 Immuno. Comb® II gp 120, HIV 1&2 Comb. Firm gp 41 рекомбинантный Биосервис, "Блот- gp 160, gp 41 ВИЧ 1/2 +0" рекомбинантный Эколаб "ИФА Лайн- gp 160, gp 41 Блот ВИЧ-1, 2" рекомбинантный p 24 p 31 p 24/ p 17 p 51 p 24 p 51 Конъюгат gp 36 не требует / Конъюгат с не требует (все щелочной растворы готовы фосфатазой к применению) gp 110/ вакуумный насос Конъюгат с gp 38 и шейкер / пероксидазой приготовление хрена растворов gp 36 вакуумный насос Конъюгат с и шейкер / пероксидазой приготовление хрена растворов Bio-Rad “NEW LAV спектр gp 160, p 24, p 31, BLOT I” gp 120 p 40, p 51, лизатный gp 41 p 55, p 66 - вакуумный насос Конъюгат с и шейкер / щелочной восстановление фосфатазой из концентрата p 17 © ЗАО «Биоград» , 2010 г. Время анализа 1 час 18 -20 часов 3 часа

Критерии положительного результата (Western Blot): ВОЗ (рекомедованы в письме два env (gp 41, gp Критерии положительного результата (Western Blot): ВОЗ (рекомедованы в письме два env (gp 41, gp 160, gp 120) Минздравсоцразвития N 4174 -РХ от 4. 08. 2006 г. ) CDC любые два из: p 24, gp 41, gp 160/120 Американский Красный Крест по одной полосе из env, gag и pol CRSS Консорциум по стандартизации ретровирусной серологии gag или pol И env (p 24 или p 31) И (gp 41 или gp 120/160) © ЗАО «Биоград» , 2010 г.

Иммуно. Комб II ВИЧ 1+2 Комб. Фирм Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm Иммуно. Комб II ВИЧ 1+2 Комб. Фирм Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm Наименование Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm рекомбинантный Определяемые антитела: к Env к Gag к Pol к Env ВИЧ 1 ВИЧ 2 gp 120, p 24 p 31 gp 36 gp 41 • Время анализа – 1 час • Не требует разведения реагентов (все реагенты готовы к применению) © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 17

Тест Иммуно. Комб. Фирм разрешен для подтверждения наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ Тест Иммуно. Комб. Фирм разрешен для подтверждения наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ № 292 от 30. 07. 2001). Результаты мультицентровых испытаний (Израиль, Франция, Бельгия, Бразилия, Сенегал) * - включая 15 положительных по ВИЧ-1 группы О Без учета неопределенных: чувствительность 100%, © ЗАО «Биоград» , 2010 г. специфичность 100% 18

Исследование MSF (Врачи без границ) Проводилось в 2006 году в Демократической республике Конго организацией Исследование MSF (Врачи без границ) Проводилось в 2006 году в Демократической республике Конго организацией MSF (Врачи без границ) 2864 клинических образца исследовались на 2 экспресс тестах, из 365 образцов, положительных по обоим тестам, 229 подтверждались одновременно на лизатном иммуноблоте (WB) и на Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm (IC). Из 229 образцов 205 были положительными в WB, а 24 – отрицательными или неопределенными. При разбиении на положительные и отрицательные/неопределенные результаты WB и IC © ЗАО «Биоград» , 2010 г. совпадали в 227 из 229 случаев.

Типовой состав набора Иммуно. Комб © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 20 Типовой состав набора Иммуно. Комб © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 20

Диагностика ВИЧ Иммуно. Комб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый Иммуно. Комб II HIV Диагностика ВИЧ Иммуно. Комб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый Иммуно. Комб II HIV 1&2 Tri. Spot Ag-Ab – АГ-АТ Иммуно. Комб II HIV 1&2 Comb. Firm – подтверждающий © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 21

Диагностика вирусных гепатитов Иммуно. Комб II HBs. Ag 90’ Иммуно. Комб II Anti-HBs Иммуно. Диагностика вирусных гепатитов Иммуно. Комб II HBs. Ag 90’ Иммуно. Комб II Anti-HBs Иммуно. Комб II HBc Ig. M Иммуно. Комб II HBc Ig. G Иммуно. Комб II HCV Иммуно. Комб II HAV Ig. M Иммуно. Комб II HAV Ab © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 22

Технология Иммуно. Комб позволяет диагностировать широкий спектр инфекций: ВИЧ, HTLV, Гепатиты А, В, С, Технология Иммуно. Комб позволяет диагностировать широкий спектр инфекций: ВИЧ, HTLV, Гепатиты А, В, С, Цитомегалию, Токсоплазмоз, Хламидиоз, Краснуху, Хеликобактериоз, тропические инфекции. © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 23

Схема постановки анализа 1. Для индивидуального тестирования гребешок можно согнуть и отломить необходимое количество Схема постановки анализа 1. Для индивидуального тестирования гребешок можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 4. Гребешок перемещается из ряда в ряд ванночки в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с конъюгатом). 2. В ряд А ванночки вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 5. Цветная реакция в ряду F. 3. Гребешок вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 6. Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия - инфекции. © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 24

Тесты Иммуно. Комб сертифицированы СЕ и широко используются более чем в ста странах мира. Тесты Иммуно. Комб сертифицированы СЕ и широко используются более чем в ста странах мира. Как достоверные, высокочувствительные и специфичные тесты Иммуно. Комб отобраны для программ ВОЗ, UNAIDS, Красного Креста, допущены FDA (США) для поставок по специальным программам фонда Клинтона. © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 25

Спасибо за внимание ЗАО «Биоград» 18 лет в России Адрес: 197101, г. Санкт-Петербург, Петровский Спасибо за внимание ЗАО «Биоград» 18 лет в России Адрес: 197101, г. Санкт-Петербург, Петровский пр. , д. 14, 19 -Н тел. /факс: (812) 325 21 71, 325 21 70 (многоканальные) http: //www. biograd. ru bio[email protected] ru © ЗАО «Биоград» , 2010 г. 26