Белки крови Диагностическое значение n Протеомика-изучение полного

Белки крови. Диагностическое значение

n Протеомика-изучение полного спектра кодируемых геномами белков, или протеомов, т. е. инвентаризация и исследование структуры белков различных организмов(состояние белков в норме, диспропорция и нарушения их структуры в патологически измененных тканях)

Методические подходы в протеомике n Двухмерный электрофорез для разделения белков и их первичной идентификации n Масс-спектрометрия для идентификации и секвенирования белков(основной метод) n Биоинформатика для обработки полученных данных

n Белки-органические соединения, основу которых составляют аминокислоты n Аминокислоты, соединенные пептидной связью, образуют пептиды и полипептиды n Белки делятся на простые и сложные: -простые состоят только из аминокислот (альбумины, глобулины, гистоны, протамины и др. )

сложные представлены полипептидом и небелковым компонентом: n Гликопротеины - содержат углеводы n Хромопротеины – гем (гемоглобин, миоглобин, пероксидазы, каталазы) n Нуклеопротеины – нуклеиновые кислоты n Металлопротеины – металлы (ферритин, гемосидерин - содержащие железо, церулоплазмин - содержит медь)

4 уровня организации (структуры) белков n Первичная определяется составом и последовательностью амионокислот в цепи n Вторичная – сворачиванием полипептидной цепи в спираль, за счет водородных связей n Третичная – сворачиванием в глобулу (водородные, дисульфидные, ионные, неполярные связи) n Четвертичная – формированием молекулы из нескольких субединиц

n Растворимость белков в водных растворах определяется значениями р. Н и ионной силой раствора, свойствами растворителя и температурой n При повышении ионной силы среды растворимость белков возрастает n Нейтральные соли в низких концентрациях повышают растворимость белков

n Высаливание - выпадение белка в осадок при снижении его растворимости и под действием нейтральных солей n Высаливание эффективно при использовании соли, содержащей двухвалентные ионы n Процесс зависит от температуры, поэтому солевое фракционирование проводят при постоянной температуре

n Нейтральные органические растворители(этанол, диоксан)приводят к осаждению белков из раствора n Органические соединения ТХУ, сульфасалициловая кислота, ацетон приводят к денатурации белков n Денатурирующее действие их снижается при температуре 4ºC

n плазма крови содержит до З 00 различных белков, которые можно разделить на две основные группы: альбумины и глобулины. Соотношение между этими группами белков, а также количественные и качественные изменения индивидуальных белков внутри указанных групп имеют место при многих как физиологических, так и патологических состояниях

n Физиологическая функция белков плазмы состоит в поддержании коллоидно-осмотического давления, кислотно-основного состояния, в процессах катализа; транспорте гормонов, липидов, жирных кислот, жирорастворимых витаминов, пигментов, минеральных веществ. Они - носители природного и приобретенного иммунитета. Белки плазмы крови - неотъемлемые компоненты свертывающей и противосвертывающей системы.

n Основная масса белков плазмы синтезируется в печени. n Гепатоциты участвуют в синтезе альбуминов / 95%/, фибриногена, αглобулинов, части β-глобулинов, компонентов свертывающей системы. Основная часть β-глобулинов и γглобулины синтезируются в клетках лимфоидной ткани.

Общий белок включает альбумины и глобулины Основные функции альбумина: • Поддержание онкотического давления • Транспорт биологически активных и токсических соединений Методы определения Общий белок: биуретовый метод (выявляет пептидные связи, одинаково чувствителен к альбуминам и глобулинам) Альбумин: бромкрезоловый зеленый бромкрезоловый фиолетовый Глобулины: (общий белок – альбумин) Альбумин-глобулиновый коэффициент = альбумин/глобулин Разделение белков сыворотки крови на фракции проводится методом электрофореза

электрофорез n Направленное движение заряженных частиц под действием внешнего электрического поля в среде с неизменным значением р. Н n Позволяет разделять макромолекулы, различающиеся размерами, электрическим зарядом, пространственной конфигурацией n Часто используются инертные носители (бумага, гели и др. )-фракции образуют в толще носителя несмешивающиеся зоны n Использование реакции антиген-антитело в сочетании с ЭФ основа иммуноэлектрофореза и иммуноблоттинга

n При протеомных исследованиях сложную смесь белков разделяют в двух направлениях(двумерный ЭФ) – по размерам(молекулярная масса) и электрическому заряду(изоэлектрическая точка) n Результатом являются двумерные белковые карты

хроматография n Позволяет разделять молекулы отличающиеся по заряду, форме, размерам, распределению на поверхности молекулы характерных функциональных групп и по специфической биологической активности n Основана на различии распределения веществ в двухфазной системе в которой одна из фаз неподвижна(сорбент), другая, подвижная(элюэнт), перемещается относительно первой с некоторой скоростью в одном направлении n Распределение между фазами происходит независимо для каждого компонента смеси веществ

Классификация методов хроматографии. Принципы разделения n Распределительная - экстракция n Адсорбционная - адсорбция n Ионообменная - электростатические взаимодействия n Аффинная - биоспецифические взаимодействия n Гель-фильтрация – ограниченная диффузия

Расположение неподвижной фазы n Колоночная хроматография – сорбент удерживается в стеклянной, пластиковой или металлической колонке n Тонкослойная хроматография – сорбент помещают на пластинку из инертного материала(стекло, фольга, пластик). Движение жидкой фазы - за счет капиллярных сил n Хроматография на бумаге n Хроматография в “объеме” – сорбент и раствор смешивают в сосуде до равновесного распределения веществ между ними

аффинная хроматография при аффинной хроматографии имеет место выделение и очистка нативного белка из больших объемов. n .

Гель-фильтрация n Обеспечивает разделение белков по их размерам n Неподвижная фаза представлена жидкостью внутри пористых гранул, подвижная фаза – та же жидкость n Крупные молекулы, не проникающие внутрь гранул, выходят из колонки с передним фронтом подвижной фазы n Мелкие молекулы, проникающие в гранулы, часть времени находятся в неподвижной фаза, и выходят из колонки позднее крупных молекул n Молекулы промежуточных размеров перемещаются вдоль колонки с промежуточной скоростью

Иммунологические методы n Иммуноферментный анализ(ИФА) – определение антигенов за счет специфического взаимодействия антиген-антитело(АГ-АТ), в качестве метки используется молекула фермента, радиоактивные и флуоресцентные соединения(РИА), ИФА может быть гомогенный или гетерогенный (твердофазный) n Иммуноблоттинг(вестерн-блоттинг) – основан на сочетании ЭФ и ИФА или РИА, ”блоттинг” – перенос разделенных соединений из геля на плоский носитель(ацетат целлюлозы, нитроцеллюлозу, бумагу и т. д. )с последующим выявлением белков при помощи специфических антител

n гиперпротеинемия - повышенное содержание белков по отношению к норме; n гипопротеинемия - уменьшение содержания белков по отношению к норме; n диспротеинемия - изменение соотношения между основными фракциями белков крови

гиперпротеинемия n при дегидратации - потери части внутрисосудистой жидкости, выход ее в межклеточное пространство, потеря воды через кишечник. n при увеличении одного или нескольких специфических белков n при циррозе печени без выраженной печеночноклеточной недостаточности; n при паразитарных заболеваниях - малярия, токсоплазмоз -содержание белков может достигать 100 -120 г/л.

гипопротеинемия n - нарушение синтеза белка вследствие дефицита n n n ферментов - недостаточное поступление белков, недостаточность переваривания и всасывания - острые и хронические кровопотери белка - повышенный распад белка - гипердегидратация - понижение содержания белков в плазме крови у женщин в период лактации и на поздних сроках беременности.

диспротеинемия n за счет большой группы белков – глобулинов n за счет индивидуального белка, изменение которого n n специфично для патологического процесса. при гипо- и гиперпротеинемии за счет одновременного изменения количества отдельных групп белков при нарушении равновесия синтез-распад белков и выраженном отклонении белкового обмена от нормы. при потерях белка с мочой при патологии почек или через желудочно-кишечный тракт, а также при голодании, кахексии, хронических поражениях печени, затрагивающих белок-синтезирующий аппарат. за счет наследственных дефектов обмена, связанных с нарушением процессов на генетическом уровне.

n Для анализа белков крови наиболее информативным является метод электрофореза. Белки; находящиеся в растворе имеют определенный электрический заряд n В электрическом поле под действием электрического тока молекулы движутся к полюсам n Распределенные таким образом по величине заряда и молекулярной массе белки могут быть зафиксированы и оценены количественно и качественно n электрофорез белков крови на ацетатцеллюлозной пленке, позволяет получить 5 основных фракций : одну фракцию альбумина и 4 фракции глобулинов.

Сбор и хранение образцов n Для анализа берут свежую не гемолизированную сыворотку, полученную из взятой натощак крови. Сыворотку можно хранить не более 72 часов при температуре 2 -8 С, предварительно определив общее содержание белка в образце биуретовым методом.

n Количественная характеристика фракций, процентное соотношение между ними достаточно стабильно при нормальном состоянии организма и определенное у здоровых доноров может быть взято за основу при анализе белкового состава крови при различных патологических состояниях. n В практике здравоохранения белковый состав крови определяется как в плазме, так и в сыворотке. В сыворотке крови из-за отсутствия фибриногена содержание общего белка меньше примерно на 2. 5 г/л. , по сравнению с плазмой.

Стандартный электрофорез выделяет в сыворотке крови 5 фракций

Расчет абсолютного количества белка в каждой фракции: Белок фракции (г/л) = общий белок (г/л) х %

Альбумин n до 65% всего белка сыворотки крови. основные функции n связывание воды, обеспечивающее значительную долю онкотического давления /80 %/. n транспорт ионов калия, магния, билирубина, свободных жирных кислот, лекарственных соединений, гормонов щитовидной железы. n источник пластического материала.

Гипоальбуминемия n наблюдается вследствие потери альбумина при нефротическом синдроме, гастроэнтерите, кровотечении; при повышении катаболизма /травма, инфекции, сепсис, опухоли, гипертиреоз/; при понижении синтеза /цирроз и жировая дистрофия печени, недоедание/, при ожогах, токсикозах, асците, в постоперационном периоде

Гиперальбуминемия n является результатом острого обезвоживания, приема анаболических стероидов. n Нормальное содержание 37 - 55 г/л в сыворотке крови. n Электрофоретическая подвижность альбумина меняется при его участии в комплексообразовании, особенно с лекарственными препаратами

Фракции α 1, α 2 - глобулинов n Количественные изменения этих фракций отражают нарушения равновесия синтезраспад n Увеличение α 1 – глобулинов характерно для хронического гепатита, длительного лечения эстрогенами, беременности n фракция α 2 глобулинов – часто бывает увеличена за счет гаптоглобина.

Фракции α 1, α 2 - глобулинов n снижение содержания белков при электрофорезе связано с заболеваниями печени, приводящими к уменьшению синтетических процессов в органе, тяжелыми дистрофическими процессами n возрастание содержания белков фракции – результат развития острых воспалительных процессов, обострения инфекционных процессов, наличия опухолевого роста.

Фракция β - глобулинов n Содержит липопротеиды, белки, участвующих в обмене липидов и их транспорте n уровень β- глобулинов возрастает при железодефицитой анемии, за счет увеличения трансферрина n Содержит специфический белок – гемопексин – носитель гема, предотвращающий его выведение с мочой

Фракция γ - глобулинов n Ig. G -основной класс антител сыворотки, его функция - защита от микроорганизмов и токсинов, участие в формировании активного иммунитета и иммунологической памяти n Ig. А /секреторные/- обеспечивают местную защитную реакцию против антигенов контактирующих со слизистыми оболочками. n Ig. М - антимикробные антитела, антитела системы групп крови АВ 0, холодовые аутоиммунные противоэритроцитарные антитела.

Гипогаммаглобулинемия n физиологическая встречается у новорожденных n врожденная - избирательный дефицит Ig. А. у детей в конце первого года жизни (пневмонии, синуситы, отиты, сепсис, понос, вирусный гепатит). n приобретенные - с уменьшением Ig. G после потерь белка /обширные ожоги, заболевания почек/; тяжелых травм, серьезных оперативных вмешательств, злокачественных поражений лимфоплазмоцитарной системы /миелома, лимфолейкозы, миелолейкоз/, также при СПИДе.

Гипергаммаглобулинемия n при повышенном синтезе антител нарастает содержание всех классов Ig с преобладанием Ig. G(при всех бактериальных инфекциях, хронических инфекциях, паразитарных заболеваниях ) n при аутоиммунных заболеваниях/ревматоидный артрит, системная красная волчанка/, и хронических заболеваний печени, имеющих аутоиммунную природу /хронические гепатиты, циррозы/.

Протеинограммы, характерные для заболеваний, связанных с острыми воспалительными процессами. n уменьшение содержания фракции альбумина, n n выраженность которой соответствует распространенности и остроте процесса. возрастание уровней фракций α 1 и α 2 глобулинов(белки острой фазы на поздних сроках может быть увеличено содержания γ-глобулинов. может быть увеличено содержание β-глобулинов. Такой тип протеинограммы характерен для начальных стадий пневмонии, острых полиартритов, экссудативного туберкулеза, острых инфекционных заболеваний, сепсиса, обширного инфаркта миокарда и др.

Протеинограммы, характерные для хронических воспалительных процессов. n умеренное уменьшение фракции альбумина n увеличение пиков α 2 и γ - глобулинов. n могут быть увеличены β-глобулины. n тип распределения белков соответствует поздней стадии пневмонии, хроническому туберкулезу легких, хроническому эндокардиту, холециститу, циститу и др.

Протеинограммы, характерные для гепатитов n умеренное уменьшение содержания альбумина, n увеличение уровня γ - глобулинов n менее выраженное увеличение β - глобулинов. n тип электрофореграмм встречается при состояниях токсического повреждения печени, гепатитах, гемолитических процессах, может быть при злокачественных новообразованиях, дерматозах.

Протеинограммы, соответствующие циррозу печени. n значительное снижение содержания альбуминов n сильное увеличение содержания γглобулиновой фракции n тип протеинограмм выявляется при циррозах печени, сепсисах, при некоторых формах полиартрита и коллагенозов.

Протеинограммы, характерные для механической желтухи. n уменьшение уровня альбуминов n умеренное увеличении содержания α 2 , γ и β - глобулинов. n тип электрофореграмм присущ обтурационной желтухе, а также желтухам, вызванным развитием рака желчевыводящих путей и головки поджелудочной железы.

Протеинограмы характерные для нарушения функции почечного фильтра. n Значительное уменьшение содержания альбуминов регистрируется n повышение концентрации α 2 и β глобулинов n умеренное снижение уровня γ - глобулинов. n тип протеинограмм свойственен генуинному или липоидному нефрозам, нефритам, кахексии, токсикозам беременности

Протеинограммы, соответствующие злокачественным новообразованиям. n резкое снижение содержания альбуминов n значительное увеличение всех глобулиновых фракций. n наивысшего подъема достигает уровень γ глобулинов. n тип протеинограмм сопровождает и иллюстрирует метастатические новообразования с различной локализацией первичной опухоли.

Протеинограммы, характерные для γ глобулиновых плазмоцитом. n значительное уменьшение содержания альбуминов α 2 и β - глобулинов n увеличение концентрации γ - глобулинов. n типичны для макроглобулинемии и некоторых ретикулезов.

Белки острой фазы n Группа белков (до 3 О) n участвующих в формировании ответа организма на повреждающее воздействие, n развитие воспалительного процесса, n действие медиаторов воспаления n белки, связанные с процессами восстановления гомеостаза всего организма в целом.

Белки острой фазы это группа белков, выявляемых в сыворотке крови и других биологических жидкостях в острую фазу воспаления любой этиологии и обладающих различными физиологическими свойствами Группа Представители Начало роста Степень роста Снижен ие Первая (повышение С-реактивный в начале белок (СРБ) воспаления 6 -8 ч, мах 2 сутки 20 -100 раз 3 сутки Вторая (рост через 24 ч) Антитрипсин, гаптоглобин 24 ч 2 -5 раз Позднее СРБ Третья (рост через 48 ч) Церулоплазмин, 48 ч С 3, С 4 компоненты комплемента До 5 раз и меньше Четвертая (меняется Альбумин, мало) иммуноглобулин ы Начало роста относится к моменту начала воспаления, а снижение количества по отношению к окончанию воспалительной реакции

С-реактивныи белок /СРБ/ n основной белок острой фазы, n синтезируется в печени, n при воспалениях синтез возрастает в тысячу раз /в первые 6 -12 ч. /, n снижается до нормы при эффективном лечении или переходе процесса в хроническую форму. n может быть использован для дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных инфекций.

С-реактивный белок (СРБ, CRP) и риск сердечно-сосудистых заболеваний Острофазный СРБ - острое воспаление Высокочувствительный СРБ (hs. СRP - high sensitive) Референтные пределы (базовые уровни) hs. СRP Взрослые – менее 1, 0 мг/л Дети - менее 0, 5 мг/л Вялотекущий воспалительный процесс 0, 05 – 10, 0 мг/л Уровень СРБ выше 10 мг/л связан с острым воспалением, хроническим заболеванием, травмой и др.

Измерение hs. СРБ для оценки рисков ССЗ hs. СРБ - независимый и сильный предиктор острого инфаркта миокарда у практически здоровых лиц среднего возраста обоего пола, у пожилых, у больных ИБС Использование hs. СРБ для оценки риска атерогенеза при hs. СРБ < 1 мг/л – риск низкий при hs. СРБ 1 -3 мг/л – риск средний при hs. СРБ > 3 мг/л – риск высокий Уровни hs. СРБ от 3 до 10 мг/л – признак вялотекущего воспалительного процесса, что связано с высоким риском ССЗ

Высокое содержание СРБ наблюдается при n системных васкулитах, n тяжелых бактериальных инфекциях (сепсис, пневмония, пиелонефрит, послеоперационные инфекции), n активном ревматоидном артрите, n активной болезни Крона, n тромбозе глубоких вен, n остром панкреатите, n метастазирующих некрозирующих опухолях.

α 1 - антитрипсин n белок острой фазы n основной ингибитор сериновых протеаз. Повышенный уровень регистрируется при активно прогрессирующих опухолях, особенно с метастазами в печень. n Генетически обусловленное снижение содержания α 1 - антитрипсина - причина предрасположенности к бронхопульмональным заболеваниям n дефицит α 1 - антитрипсина в детском возрасте служит причиной холестаза и цирроза печени, желтух. n имеет несколько изоформ, которые можно получить при помощи электрофореза

Амилоидный А белок n Маркер АА-амилоидоза (появление в стенках сосудов амилоида и аномального белка в межуточной ткани) n Увеличен при воспалительных процессах, особенно при наличии вторичного амилоидоза – осложнения при хронических инфекциях, ревматоидных и злокачественных заболеваниях

α 1 - кислый гликопротеин /орозомукоид/. n связывает и транспортирует прогестерон и n n n тестостерон влияет на адгезию тромбоцитов резкое повышение в послеоперационном периоде при локальной инфекции, абсцессе или сепсисе. увеличен при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, метастазах опухолей, инфаркте миокарда при оперативном лечении опухолей может указывать на возникновение рецидива снижен - при голодании, тяжелых поражениях печени, белок-теряющих энтеропатиях, нефротическом синдроме

α 2 - макроглобулин n участвует в физиологической регуляции свертывающей системы крови n ингибирует протеолитические ферменты, n увеличен при невротическом синдроме, гепатитах, циррозе, микседеме, сахарном диабете, бронхопневмонии, беременности n снижен при ревматическом полиартрите, остром панкреатите, язве желудка и 12 -типерстной кишки, инфаркте миокарда, активном фибринолизе, почечно- и желчекаменной болезнях , множественной миеломе

Церулоплазмин медьсодержащий белок, обладающий свойствами фермента. транспортирует и депонирует ионы меди, окисляет двухвалентное железо в трехвалентное. повышен при реакциях острой фазы, во время беременности, у лиц, принимающих эстрогенсодержащие контрацептивы, при холестазе из-за нарушения выведения меди. n увеличение содержания специфично при меланоме и шизофрении. n Увеличен при злокачественных новообразованиях различной локализации n снижен при болезни Вильсона-Коновалова, при невротическом синдроме, энтеропатии с потерей белка, тяжелых поражениях печени. n n

Гаптоглобин n связывает и транспортирует свободный гемоглобин в клетки ретикулоэндотелия, n белок острой фазы. n содержание снижается при поражениях паренхимы печени, гемолитической анемии n увеличен при острых воспалительных процессах, сахарном диабете, холестазе, лечении кортикостероидами

Трансферрин n основная функция - перенос железа к клеткам. n оценка содержания трансферрина в плазме используется для дифференциальной диагностики анемий. n повышение содержания отмечается при скрытом железодефиците. n уменьшение концентрации при: реакции острой фазы, неэффективном эритропоэзе /талассемия, мегалобластные анемии/, гемохроматозе, потерях белка и нарушениях его синтеза

Фибриноген повышение содержания сопровождает острые и хронические воспалительные процессы: n болезни почек /острый хронический пиелонефрит, гломерулонефрит/ n невротический синдром n некроз тканей, n инфекционные заболевания n травмы, n ожоги, n обширные хирургические вмешательства, n коллагенозы; n острый инфаркт миокарда, n лучевая болезнь, n некоторые злокачественные опухоли, особенно рак легкого.

гиперфибриногенемия n Острая фаза воспаления n Атеросклероз n Риск развития инфаркта миокарда и повторного инфаркта миокарда n Определение уровня фибриногена – тест определения бессимптомных стадий заболевания периферических артериальных сосудов

Гипофибриногенемия наблюдается при n тяжелой почечной недостаточности, n циррозе печени, n отравлении гепатогенными ядами, n состоянии после обильных кровотечений, ожогов, n при лейкозах, n метастазах опухоли в костный мозг, n употреблении ряда лекарств.

прокальцитонин n Полипептид, синтезируется С-клетками щитовидной железы n Стимуляторами продукции и выхода в кровь являются бактерии и эндотоксины n Динамика в крови определяется состоянием иммунной системы, уровнем системной воспалительной реакции, локализацией и размерами воспалительного процесса n Увеличен в крови при генерализованных бактериальных, паразитарных и грибковых инфекциях с системным проявлением

прокальцитонин n Высокочувствительный и специфичный маркер системной воспалительной реакции, ее тяжести и оценки проводимой терапии n Уровень выше 2 нг/мл – свидетель инфекционного процесса с системным воспалением, а более 10 нг/мл – результат тяжелого сепсиса или септического шока n Медленный рост концентрации – показатель развития инфекционного процесса и неблагоприятного исхода

Парапротеины /моноклональные иммуноглобулины/ регистрируются при множественной миеломе, макроглобулинемии Вальденстрема, остром плазмобластном лейкозе, болезни тяжелых цепей, лимфомах с парапротеинемией. присутствие в сыворотке приводит к агглютинации эритроцитов /монетные столбики/, повышению СОЭ, нарушениям со стороны почек, снижению концентрации полноценных иммуноглобулинов, n положительной реакции на осадочные пробы. n n n n n

М-градиент Наличие моноклональных антител: миеломная болезнь, макроглобулинемия Вальденстрема и др.

Электрофореграмма пациентки 79 лет при миеломе общий белок 120 г/л; альбумин 16 г/л гемоглобин 73 г/л; гематокрит 20 %; эритроциты 2, 53 1012/л

ГРАДИЕНТ М

миоглобин n Транспортирует кислород в мышцах и миокарде n При повреждении миокарда и скелетных мышц быстро попадает в кровь n Имеет диагностическое значение при синдроме длительного сдавления, травмах мышц n Увеличивается в крови при тяжелом электрошоке, повреждении скелетных мышц, артериальной окклюзии с ишемией мышечной массы

Криоглобулины n обладают повышенной способностью к коагуляции, преципитируют при низкой температуре, переходят в желеобразное состояние при температуре ниже 37°С. появляются при миеломе, макроглобулинемии Вальденстрема, хроническом лимфолейкозе, инфекционных заболеваниях /сифилисе, мононуклеозах, туберкулезе/, n вирусных аутоиммунных заболеваниях, n циррозе печени, n коллагенозах. n n

Молекулы средней массы (СМ) n Молекулярная масса 500 -5000 дальтон n В составе СМ вазопрессин, окситоцин, глюкагон, кальцитонин, эндорфины и др. n Обладают высокой молекулярной активностью n Определяют многообразие клинических проявлений эндотоксикоза n Величина СМ отражает эффективность специфической и детоксикационной терапии

α - фетопротеин n фетальный белок. n маркер злокачественных опухолей – первичного рака печени и тератобластомы яичников n при беременности является маркером нормального развития эмбриона и используется для пренатальной диагностики. n увеличение содержания α-фетопротеина в крови проявляется на электрофореграмме в виде отдельного пика между альбумином и α 1 – глобулином. n при циррозе печени алкогольного происхождения кривая изменений этого белка в динамике имеет пилообразный характер.

тропонин n Входит в состав сократительной системы клетки n Тропонин Т связан с актомиозином n Тропонин I связан с АТФ-азной активностью n Тропонин С – кальций-связывающий белок n Участвует в кальций-зависимой регуляции акта сокращения-расслабления

тропонины n Кардиальная изоформа Тн. I отличается от изоформ Тн. I из скелетной мускулатуры и является абсолютно специфичным миокардиальным протеином n Кардиальная форма Тн. Т также отличается по своей структуре от Тн. Т скелетной мускулатуры, и также является абсолютно специфичным миокардиальным протеином n Кардиальный Тн. С идентичен по структуре мышечному Тн. С, не являясь специфичным миокардиальным протеином

тропонины n Содержание Тн. I в миокарде человека 4. 0 - 6. 0 мг/г влажного веса. 2. 8 -4. 1% этого белка содержится в цитозоле миокардиоцитов n Содержание Тн. Т в сердце человека 10. 8 мг/г влажного веса. В цитозоле миокардиоцитов определяется 6 -8% от всего клеточного Тн. Т

тропонины n Освобождаются из поврежденных миокардиальных клеток n Не обнаруживаются в крови здоровых n При гибели миокардиоциотов определяются в крови через 4. 5 -7 часов и достигают пика в первые 12 -24 часа от начала ИМ n Процесс освобождения Тн. I – однофазный, Тн. T - двухфазный

тропонины n Диагностическое окно Тн. I ограничивается 3 -7 сутками n Диагностическое окно Тн. Т до 12 -14 дней n Тн. I и Тн. Т – поздние диагностические маркеры, позволяющие выявить ”пропущенный” ИМ n Диагностическая чувствительность Тн достигает практически 100% при их измерении в диапазоне более 12 -14 часов от начала приступа.

n Особенностью тропонинов является наличие необычайно длительного “диагностического окна” n При крупноочаговых ИМ концентрации Тн. I сохраняются 5 -7 дней, Тн. Т - до 14 дней n При неосложненном течении ИМ концентрация Тн. Т к 5 -6 дню возвращаются на уровень нормы

Показания к определению Тн. Т n Острый инфаркт миокарда(ИМ) n Подострый ИМ (поздний маркер) n Микроинфаркт и исключение некроза миокарда при нестабильной стенокардии n Мониторинг тромболитической терапии (отношение концентрации Тн. Т в сыворотке через 14 и 32 часа после появления болей) n “немой” ИМ перед хирургическим вмешательством

n Чувствительность и специфичность Тн позволяет выявлять микроинфаркты n Повышение концентрации Тн. I и Тн. Т в крови больных с острым коронарным синдромом при минимальных изменениях ЭКГ или нетипичной клинической картине – основание для диагноза ИМ n Возрастание Тн в крови больных коронарной болезнью сердца во время или после транслюминальной ангиопластики или стентирования трактуется как ИМ n Тесты на Тн эффективны при установлении периоперационного ИМ при некардиальной хирургии

Методы исследования n с использованием иммунохимических анализаторов (многопрофильных и специализированных) n качественное бесприборное определение на тест-полосках с помощью иммунохроматографических методов, оценка результатов – визуальная, качественая

Маркеры ИМ n Ранний маркер ИМ – миоглобин. Повышение наблюдается через 2. 5 -4. 3 часа от начала ИМ. Через 15 -35 часов уровень возвращается к норме n Чувствительность КК ниже чем у тропонинов и к 12 часам от начала ИМ не превышает 80% n Одновременно с КК – диагноз мелкоочагового инфаркта миокарда

Маркеры ИМ - Тропонины n Высокая специфичность и чувствительность n Возможность использования для n стратификации риска больного n диагностики ИМ в течение 2 недель от начала болевого приступа n оценки эффективности терапевтического вмешательства

Маркеры ИМ - Тропонины n Низкая чувствительность в первые 6 часов от начала приступа n Отрицательный результат тестов в первые сутки требует повторного исследования n Нельзя использовать для диагностики рецидива ИМ

Маркеры ИМ - Миоглобин n Высокочувствительный тест ИМ n Можно использовать для оценки эффективности реперфузионной терапии n Можно использовать для исключения вероятности повреждения миокарда n Низкая специфичность n Быстрое возвращение к норме не позволяет использовать для диагностики ИМ спустя 24 часа от начала приступа

Маркеры ИМ – КФК-МВ n Быстрота получения результата, низкая стоимость, высокая точность определения n Можно использовать для диагностики рецидива ИМ n Чувствительность ниже чем у тропонинов. n Нельзя использовать в периоды до 6 часов и спустя 36 часов от начала болевого приступа

МАРКЕРЫ ИМ

гомоцистеин n Серусодержащая аминокислота n Промежуточный продукт обмена метионина и цистеина n В норме в плазме крови 5 -15 мкмоль/л

гомоцистеин n Ускоряет развитие атеросклероза за счет токсического действия на эндотелий сосудов, увеличения адгезии тромбоцитов, отрицательного влияния на факторы свертывания крови n Способствует накоплению липидов в интиме артерий n Является митогеном для гладкомышечных клеток сосудов

Гипергомоцистеинемия связана n С риском сердечнососудистых заболеваний и осложнений n Инфарктом миокарда, инсультом n Риском атеросклероза сосудов n Дефицитом витаминов В 6 и В 12

Умеренное повышение уровня ГЦ в плазме крови наблюдается при: n нервнопсихических заболеваниях n осложнениях беременности n нарушениях эмбрионального развития n развитии окклюзивных заболеваний сосудов n Дефиците фолатов

СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА В ЦСЖ