Бактериологическая диагностика туберкулеза Диагностика лекарственной устойчивости Немцова Евгения

Бактериологическая диагностика туберкулеза. Диагностика лекарственной устойчивости. Немцова Евгения Сергеевна заведующая бактериологической лабораторией БУЗ Орловской области ОПТД 2012

Микобактерии туберкулеза относятся к роду Mycobacterium. Характерной особенностью микроорганизмов, относящихся к этому роду, является наличие чрезвычайно устойчивой к внешним воздействиям гидрофобной клеточной стенки. Ее высокая гидрофобность в значительной степени обусловлена наличием остатков миколовых кислот в ее пептидогликолипидном слое.

Характерными особенностями микобактерий туберкулеза являются: w Способность к кислотоустойчивому окрашиванию (используется при специфической окраске диагностического материала при микроскопии) w Устойчивость к кислотам и щелочам (используется при селективной обработке диагностического материала с целью элиминации нетуберкулезной микрофлоры перед посевом) w Длительный цикл развития

К патогенным видам относятся возбудители туберкулеза у человека и животных, а также возбудитель проказы. Остальные представители рода Mycobacterium относятся либо к так называемым атипичным микобактериям, либо являются сапрофитами, которые широко распространены в природе. Атипичные микобактерии, классифицируемые как нетуберкулезные, вызывают в организме людей и животных те или иные патологические изменения, и по биологическим качествам и клинической значимости занимают среднее место между типичными микобактериями туберкулеза и сапрофитными микобактериями.

На сегодняшний день микробиологические методы исследования являются основными в диагностике туберкулеза. Основными методами выявления возбудителя туберкулеза являются традиционные микробиологические методы - микроскопия мазка и культуральные исследования (посев и тест на лекарственную чувствительность).

Ускоренные методы лабораторной диагностики туберкулеза и лекарственной устойчивости ü Автоматическая система BACTEC MGIT 960 ü Анализатор Gene. Xpert ü ПЦР диагностика

Автоматизированная система BACTEC MGIT 960.

Анализатор Gene. Xpert

Характеристика микроскопического метода исследования

Микобактерии туберкулеза характеризуются выраженным многообразием форм существования, большим полиморфизмом и широким диапазоном изменчивости биологических свойств. Полиморфизм микобактерий не позволяет делать заключение о принадлежности обнаруженных при микроскопии кислотоустойчивых микобактерий к тому или иному виду, патогенному или сапрофитному.

Микроскопические методы исследования играют очень важную роль в выявлении и диагностике туберкулеза: w Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом проста, достаточно эффективна, экономически выгодна, так как не требует особого оборудования и химических реактивов. w Преимуществом бактериоскопического метода исследования является также быстрота получения результата. w Данный метод позволяет в короткие сроки выявить наиболее эпидемически опасных больных туберкулезом.

Микроскопия КУМ Чувствительность 25 -65% случаев с посевом+ Специфичность > 98% Порог обнаружения 5 -10 x 103 КУМ/мл Кумулятивная отдача микроскопии мазка КУМ > 95 % 1 й мазок КУМ 80 -82 % 2 й мазок КУМ 10 -14 % 3 й мазок КУМ 5 -8 % Важно исследовать 3 образца!

ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЛАБОРАТОРНОГО КОМПОНЕТА ПРОГРАММЫ. ВНЕДРЕНИЕ ПРОГРАММЫ ОБЕСПЕЧЕНИЯ КАЧЕСТВА ИССЛЕДОВАНИЙ: Внутрилабораторный контроль качества в лабораториях микроскопии: Ø мониторинг правильности проведения исследований; Ø подстановка контрольных мазков (одного положительного и одного отрицательного) n n по крайней мере для каждой партии карболового фуксина ежедневно

Факторы, влияющие на эффективность микроскопии: w Кратность обследования w Качество диагностического материала w Подбор пациентов для обследования

Кратность обследования пациентов Кратность микроскопического исследования при обследовании пациента с целью диагностики туберкулеза составляет 3 образца мокроты. При обследовании больного туберкулезом в ходе лечения (контроль химиотерапии) исследуют 2 образца.

Диагностическая ценность повторной микроскопии мазка среди больных с подозрением на туберкулез легких. w w w 1 -я мокрота (5439) 2 -я (5105) 3 -я (4757) 4 -я (4590) 5 -я (4326) 84. 5 проц. пол. 12. 2 3. 2 0. 1 0

Качество диагностического материала w Результативность бактериоскопического исследования непосредственно зависит от качества диагностического материала, поэтому необходимо строго следить за тем, чтобы в лабораторию на исследование была доставлена мокрота, а не слюна w Материал в виде слюны следует выбраковывать на этапе сбора мокроты, слюна не должна поступать в лабораторию и подвергаться микроскопическому исследованию

ЗАВИСИМОСТЬ ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО РЕЗУЛЬТАТА МИКРОСКОПИИ МАЗКА ОТ КАЧЕСТВА ИССЛЕДУЕМОГО ОБРАЗЦА Вид образца Слюна Всего % Положительные % 1125 32. 9 21 1. 8 Слизь 1707 49. 9 68 3. 5 583 17. 2 220 37. 7 Слизистогнойная L. POLLAK & R. URBANCZIK, Bol Inform Inst Nac Tuberc (Caracas) 2: 1969, 5 - 8

Сбор диагностического материала. Сбор мокроты для исследования на кислотоустойчивые микобактерии - весьма ответственный этап диагностической процедуры, от четкости проведения которого во многом зависит результат исследования.

Режимы обследования w Существует несколько схем организации обследования пациента методом микроскопии при выявлении туберкулезной инфекции w Желательно собирать утреннюю порцию мокроты в течение трех дней последовательно

При микроскопическом исследовании мазка из диагностического материала нельзя определить видовую принадлежность выявленных кислотоустойчивых микобактерий и специфически идентифицировать возбудитель туберкулеза. В связи с этим, как правило, микроскопический метод сопровождается более чувствительным и результативным методом исследования - методом посева.

Из микробиологических методов диагностики основным остается диагностика туберкулеза с использованием стандартных питательных сред: 1. Ливеншнейна-Йенсена 2. Финн - 2

Учет результатов посева. Интенсивность роста обозначают по 3 -х балльной системе (1+) — 1 – 20 КОЕ (“скудное” бактериовыделение); (2+) — 21 – 100 КОЕ (“умеренное” бактериовыделение); (3+) — > 100 КОЕ (“обильное” бактериовыделение).

Эффективность бактериологической диагностики туберкулеза (Орловская обл. )

Динамика первичной ЛУ МБТ среди впервые выявленных б-х ТБ легких (Орловская обл. )

Контроль качества работы бактериологической лаборатории подтверждается ежегодным участием в Федеральной системе внешней оценки качества (ФСВОК)

Результаты исследования ЛЧ к критическим концентрациям являются удовлетворительными, если эта доля для всех результатов составляет не менее 90% для изониазида и рифампицина и не менее 85% для этамбутола и стрептомицина.

Непременным условием для бактериологической лаборатории является определения ЛЧ к стандартизированным препаратам первого ряда: H, R, E, S и второго ряда: K, Cap, OFL

Меры по обеспечению биологической безопасности: w административные (предотвращающие распространение инфекционных аэрозолей из загрязненных зон в неинфицированные помещения лаборатории и лечебного учреждения в целом) w инженерные (проектные и технические) (направленные на снижение концентрации инфекционных аэрозолей в воздухе принудительная вентиляция, использование эффективных устройств обеззараживания воздуха путем фильтрации, облучения и др. ) w персональные (меры защиты органов дыхания персонала)

Инженерные и персональные меры обеспечения биобезопасности

Индивидуальные средства защиты органов дыхания Респираторы Маски

Никакое самое дорогое и современное оборудование не заменит соблюдения мер безопасности! Неукоснительное соблюдение мер безопасности и производственной гигиены — обязанность каждого работника лаборатории.

Благодарю за внимание!