БАКТЕРИОФАГИ ВИРУСЫ БАКТЕРИЙ БАКТЕРИОФАГИ ИЛИ ФАГИ Фаги

БАКТЕРИОФАГИ

ВИРУСЫ БАКТЕРИЙ (БАКТЕРИОФАГИ ИЛИ ФАГИ) Фаги (от греческого (латинского) слова phagos — пожиратель)- вирусы определенных видов бактерии ● Номенклатура основана на видовом наименовании хозяина. Например, фаги, лизирующие дизентерийные бактерии, получили название дизентерийных бактериофагов. ● Фаги способствуют успешному изучению молекулярной генетики и общей вирусологии (простота культивирования, короткий период генерации, высокий выход фагового потомства, возможность точного его количественного учета).

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ТИПЫ ФАГОВ

Палочковидные, или нитевидные, фаги. Увел. X 400 000. Фаги 2 морфологического типа, частица состоит из одной головки. Увел. X 600 000 Фаги 3 морфологического типа от головки отходят небольшие выступы

Фаг 4 морфологического типа, частица состоит из головки и короткого отростка Увел. х500 000 Разные фаги 5 морфологического типа, частица состоит из головки и длинного отростка, чехол которого не способен сокращаться. 1, 2 - увел. X 225 000, 3 - увел. X 250 000 Фаг 6 морфологического типа, частица состоит из головки и длинного отростка, чехол которого способен к сокращению (Т 2, Т 4, Т 6). Увел, около 400 000

Резистентность бактериофагов • Большинство фагов инактивируется при температуре свыше 65 С (при 65 С – 1 час, 100 С – несколько минут). • Плохо переносят УФО. • Чувствительны к кислотам, формалину. • Длительно сохраняются при низких температурах и высушивание, в воде и пищевых продуктах.

Виды бактериофагов • Вирулентные фаги вызывают инфекцию, заканчивающуюся лизисом бактериальных клеток и синтезом новых фаговых частиц. • Умеренные фаги не лизируют зараженные ими клетки. ДНК этих фагов включается в хромосому бактерий и передается при их делении неограниченному числу потомков. Такой тип взаимодействия фага с клеткой называется лизогенией, а бактерии, несущие в своей хромосоме фаговую ДНК (профаг) являются лизогенными.

Адсорбция - процесс специфичен: лигандрецепторное взаимодействие рецепторов фагов и рецепторов бактерий Проникновение - стержень сокращается и прокалывает клеточную стенку с помощью лизоцима и АТФ, НК впрыскивается в бактериальную клетку. Выход-происходит либо путем «взрыва» (лизис бактерий при участии фагового лизоцима), либо гораздо реже путем «просачивания» (ДНК -нитчатые фаги; бактерия сохраняет жизнеспособность) Морфогенез (заполнении фаговой НК пустотелых капсидов головки) Репликация НК и белка Некоторые фаги вводят свою ДНК без предварительного повреждения клеточной стенки бактерий, другие - сквозь отверстия, которые они пробуравливают в клеточной стенке с помощью лизоцима.

Практическое использование бактериофагов • Фагодиагностика • Фагопрофилактика • Фаготерапия

Фагодиагностика • Фагоиндикация – определение патогенных микроорганизмов в исследуемом материале с помощью специфических баткериофагов (реакция нарастания титра фагов - РНТФ).

Постановка реакции Исследуемый материал + Бактериофаг 0, 1 (100 частиц ) Учет реакции 1 мл физ. раствора 0, 1 0, 1 инкубация 24 часа МПБ 10 -1 Если б/фаг СПЕЦИФИЧЕН– увеличивается количество частиц Если б/фаг НЕСПЕЦИФИЧЕН – не изменяется количество частиц 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 10 -6 10 -7 Засеваем эталонную культуру (музейный штамм – чистую культуру того возбудителя, который ищем) газоном Термостат 24 часа 4 х104 Учет реакции: 1) во всех чашках сплошной рост – реакция отрицательная: в исследуемом материале нет возбудителя 2) в противном случае – реакция положительная: в исследуемом материале присутствует возбудитель, изолированные стерильные пятна на сплошном росте: 1 пятно соответствует 1 частице б/фага.

Фагодиагностика • Фагоидентификация – идентификация выделенной истой культуры по фаголизабельным свойствам Опыт Контроль Чистая культура Специфический бактериофаг МПБ Бактериофаг специфичен - прозрачная среда Бактериофаг неспецифичен – рост бактерий на питательной среде Физ. раствор МПБ Рост бактерий

Фагодиагностика • Фаготиипирование – определение принадлежности выделенного бактериального штамма к тому или иному фаготипу, применяется при эпидемиологическом исследование для установления источника заболевания

• Чистую культуру засевают на МПА «газоном» , затем условно делят чашку на квадраты. • В каждый квадрат наносят по одной капле типоспецифических фагов. • После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается задержка роста (лизис бактерий). • Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.

Фагопрофилактика и фаготерапия

Определение чувствительности к антибиотикам – метод дисков • Чистую культуру засевают «газоном» на питательный агар, после чего на его поверхность помещают бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. • Посевы инкубируют при 37 0 С в течение суток. • По диаметру зон задержки роста культуры судят о ее чувствительности к соответствующим антибиотикам: § до 10 мм -малочувствительная, § 10 – 20 мм – умеренная чувствительность, § 20 мм и более – высокочувствительная.

Микробиологический автоматический счетчик – модуль для измерения зон Микробиологический анализатор (спектрофотометрическим и флуоресцентым методами)