АО «Медицинский Университет Астана» КАФЕДРА микробиологии, вирусологии им. Ш. И. Сарбасовой СРС Культуры клеток и тканей, методы культивирования вирусов. Вирусологические методы исследования. Выполнил: Жумаев А. А. 254 ОМ Астана 2011
Введение Для количественного накопления вирусов наиболее удобную систему представляют культуры клеток. В конце прошлого столетие нашли возможность сохранения жизнеспособности тканей и клеток в искусственных условиях и положили начало глубоким научным исследованиям тканевых культур. Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем, связанных с изучением особенностей взаимодействия "вирус-клетка". Кроме того решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно без накопления вируссодержащего сырья.
Культура клеток и тканей - метод сохранения в жизнеспособном состоянии клеток, участков тканей, органов или их частей вне организма.
Виды культур тканей и клеток (В зависимости от методики первичной эксплантации ткани и техники ее культивирования) I. Культуры переживающих эксплантатов тканей. II. Культуры растущих тканей: 1) культуры фиксированных кусочков ткани; 2) однослойные культуры клеток: а) первично-трипсинизированные (однократно культивируемые); б) перевиваемые клеточные культуры; в) полуперевиваемые культуры клеток (штаммы диплоидных клеток человека и животных) III. Суспензионные культуры растущих клеток.
Однослойные культуры растущих клеток составляют основную культуру клеток современной лабораторной и производственной вирусологической практики. однослойные первичные Отдельные клетки сохранившие способность к жизни и размножению. линии клеточная культура, полученная непосредственно из тканей человека или животных в эмбриональном или постнатальном периоде Характеризуются потенциальным бессмертием и гетероплоидным кариотипом перевиваемые штампы полуперевиваемые клетки с диплоидным набором хромосом и ограниченной продолжительностью жизни in vitro
Способность перевиваемых клеток к бесконечному размножению in vitro знаменует собой качественный скачок, в результате которого клетки приобретают способность к автономному существованию, подобно микроорганизмам, выращиваемым на искусственных питательных средах. Совокупность изменений, приводящих к появлению у клеток таких особенностей, называют трансформацией, а клетки перевиваемых тканевых культур — трансформированными.
Культивирования вирусов Для выделения и культивирования вирусов используются чувствительные биологические модели: Лабораторные животные. Основные экспериментальные модели: белые мыши (при выделении вирусов бешенства, энцефалитов, гриппа и вирусов Коксаки), хорьки (вируса гриппа), кролики (вирусов оспы, бешенства), обезьяны (вируса полиомиелита). Развивающиеся куриные эмбрионы (7— 13 -дневные). Преимуществом этого метода является отсутствие спонтанных вирусных инфекций, а замкнутая полость эмбриона служит надежной защитой от попадания микроорганизмов из окружающей среды. Культивирование в курином эмбрионе применяется при первичном выделении вирусов из патологического материала, а также при необходимости пассировать и сохранять вирусы, получать необходимое количество вирусов— при изготовлении некоторых живых вакцин и диагностических препаратов. Культуры клеток (первично-трипсипизированные, перевиваемые и полуперевиваемые линии) – однин из основных методов.
Культивирование в культурах клеток и тканей. В зависимости от свойств вируса и типа зараженных им клеток исходом взаимодействия вируса с клеткой могут быть следующие изменения культур клеток: Цитопатический эффект (ЦПЭ) — развитие дегенеративных процессов в клетках. Образование симпластов — гигантских многоядерных клеток в результате слияния цитоплазмы нескольких клеток и митотического деления. Образование включений — одно из проявлений ЦПЭ. Увеличение массы вирусов — образование бляшек или колоний вирусов (например, у вирусов оспы, кори, полиомиелита и др. )
Вирусологические методы исследования Очень трудоемкие и длительные, что не позволяет широко применять их для диагностики. Для идентификации вирусов, а также ряда бактерий используют серологические методы, в основе которых лежит прямое взаимодействие специфических антител с антигеном. С помощью антител, содержащихся в диагностических иммунных сыворотках, могут быть идентифицированы самые разнообразные антигены, в том числе и патогенных микроорганизмов. Серологические реакции дают возможность судить не только о динамике накопления антител в процессе заболевания, но и о напряженности иммунитета, возникающего после профилактических прививок. На практике наиболее широко применяются реакции нейтрализации, связывания комплемента, агглютинации, преципитации, нейтрализации и др. Однако наиболее точными являются серологические реакции с участием меченых антигенов или антител - метод флюоресцирующих антител (МФА) и иммуноферментного анализа (ИФА).
Принцип МФА Принцип ИФА состоит во взаимодействии антигена и антитела, меченного флюорохромом. Последний обладает свойством люминесцировать в потоке ультрафиолетовых лучей и не влияет на специфичность антител. Результаты учитываются фотометрически. МФА является экспресс-методом, который позволяет уже через 2 -3 часа установить с достаточной степенью точности этиологический диагноз. Так, при клещевом энцефалите максимальное число положительных результатов МФА определяется в первые 3 дня болезни. Принцип метода состоит в обнаружении антигена, фиксированного на определенном носителе специфическими глобулинами, мечеными ферментами. Фермент выявляется различными субстратами, дающими с ним характерное окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству исследуемого антигена. Результаты могут учитываться как визуально, так и инструментально (фотометрически).
Заключение С введением в 1948— 1952 гг. метода клеточных культур были выделены ранее неизвестные вирусу усовершенствована и упрощена диагностика вирусных заболеваний, улучшено производство вакцин и диагностических препаратов, открыты новые возможности для изучения взаимодействия вируса и клетки. Преимущество метода культивирования вирусов в культуре клеток состоит в том, что почти к каждому вирусу можно подобрать чувствительные клетки или ткани, создать стандартные условия (наличие клеток одного типа).
Использованная литература: Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. - М. : 2001. Коротяев А. И, Бабичев С. Л. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СПб. : Спец. лит, 2000. Медицинская микробиология /Гл. ред В. И. Покровский, O. K. Поздеев. - М. : ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998 Букринская А. Г. Вирусология, М. , 1986; Вирусология, Методы, под ред. Б. Мейхи, пер. с англ. , М. , 1988; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, М. , 1982. http: //www. study. online. ks. ua/
Скачать презентацию АО Медицинский Университет Астана КАФЕДРА микробиологии вирусологии им
Жумаев А.254ОМ - Культуры клеток и тканей.ppt