АЛЬБУМИН Соснин Д Ю Курс клинической лабораторной диагностики

Зарегистрируйтесь, чтобы просмотреть полный документ!

АЛЬБУМИН Соснин Д. Ю. Курс клинической лабораторной диагностики ФПК и ППС ПГМА

Белки плазмы крови — это очень сложная смесь, включающая не только простые белки, но и сложные белки (гликопротеины) и надмолекулярные образования (липопротеины). n ПЛАЗМА n n n Альбумины Глобулины Фибриноген и факторы свертывания n СЫВОРОТКА n n Альбумины Глобулины

АЛЬБУМИН n n n Термин «альбумин» был предложен итальянским врачом Domenico Cotugno (1736– 1822) для обозначения белого (лат. albus — белый) осадка, образующегося при кипячении подкисленной мочи [1]. Альбумин — небольшой по размерам белок (относительная молекулярная масса 66, 3 к. Да) глобулярной формы, является существенным компонентом большинства внеклеточных жидкостей организма, включая спинномозговую, интерстициальную и амниотическую жидкость. Около 60% всего альбумина в организме находится во внесососудистом пространстве n n Молекула альбумина состоит из одной полипептидной цепи (580 аминокислот) с 17 дисульфидными связями, стабилизирующими ее структуру. Одна свободная SH группа в положении 34 способна вступать в реакции при физиологическом значении p. H. Альбумин — один из немногих белков в плазме, не содержащих боковых углеводных цепей, со значительным отрицательным зарядом при физиологическом p. H , чем частично объясняется его высокая растворимость в воде

Факторы, определяющие скорость движения молекулы при ЭФ n n Заряд Размеры

Альбумины (М. в. 65 - 69 к. Да) n n n Место синтеза: печень Структура: единственная полипептидная цепь состоит из 610 аминокислот Концентрация в сыворотке крови: 35 – 53 г/л

Функции альбумина n n n Поддержание коллодино – осмотического давления (формирует онкотическое давление и регулирует распределение жидкости между водными секторами организма) Связывание и транспорт соединений: свободных жирных кислот, билирубина, лекарственных препаратов, неорганических соединений (кальция, магния и других) Лабильный белковый резерв Антиоксидант Субстрат для активированных протеолитических ферментов

Гиперальбуминемия n n УВЕЛИЧЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ АЛЬБУМИНА БОЛЕЕ 53 Г/Л Относительня гиперальбуминемия n n На фоне потери жидкости и сгущения крови Абсолютная гиперальбуминемия: n n Ошибки преаналитического этапа (забор крови после введения препаратов альбумина, например, 10%-альбумина) Ошибка выполнения исследования

Гипоальбуминемия n n СНИЖЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ АЛЬБУМИНА МЕНЕЕ 35 Г/Л Относительня гипоальбуминемия n n На фоне избыточного парентерального введения жидкости и разведения крови Абсолютная гипоальбуминемия: n n n n n ПОНИЖЕННЫЙ СИНТЕЗ : голодание Заболевания ЖКТ, сопровождающиеся нарушением переваривания и всасывания пищи Заболевания печени (тяжелые гепатиты и циррозы), с нарушением синтеза альбумина ПОВЫШЕННЫЕ ПОТЕРИ: Заболевания почек, сопровождающиеся протеинурией и потерей белков с мочой Потери белка с транссудатами и экссудатами из серозных полостей, с ожоговой поверхности ПОВЫШЕННЫЙ РАСПАД Интенсивный распад белков при любом тяжелом заболевании, сопровождающегося формированием отрицательного азотистого баланса

Редкие варианты альбумина: n n n Анальбуминемия Бисальбуминемия Псевдобисальбуминемия

АНАЛЬБУМИНЕМИЯ n Анальбуминемия. Известно около 20 семейств с наследуемой анальбуминемией. Хотя уровень альбумина в плазме у них ниже 0, 5 г/л (около 1% от нормы), они чувствуют себя здоровыми, несмотря на умеренные отеки, выявляемые в возрасте от 20 до 40 лет. Несмотря на нарушения липидного обмена, увеличения риска развития атеросклероза не было выявлено. Период полужизни введенного экзогенного альбумина в плазме у этих пациентов удлинен до 50 – 60 дней

БИСАЛЬБУМИНЕМИЯ n Обнаружено более 80 дополнительных аллелей, связанных с измененной структурой, но нормальной концентрацией альбумина. Многие из изотипов обладают различной электрофоретической подвижностью, приводящей к появлению так называемой бисальбуминемии. В то же время, при ее обнаружении на электрофореграмме, интерпретация должна проводиться с осторожностью, поскольку связывание альбумином многих лекарственных препаратов и метаболитов может также менять подвижность альбумина при электрофорезе.

БИСАЛЬБУМИНЕМИЯ n n n Обычный, или дикий, тип — Alb A встречается у белокожих европейцев, второй вариант — Alb B (от 1 на 1000 до 1 на 10 000 населения в зависимости от этнического происхождения). Alb B обладает низкой электрофоретической подвижностью из-за замены глутаминовой кислоты на лизин. По крайней мере, два варианта альбумина связаны с образованием димеров, что приводит к большему смещению фракции к катоду. Обычно они выявляются в виде катодного пятна вместо хорошо выраженной отдельной полосы, как имеет место при Alb B. Степень образования димеров и связывания с другими белками, типа Ig. A, с различными вариантами альбумина меняется в зависимости от условий хранения, p. H и концентрации низкомолекулярных соединений, содержащих SH-группу, в частности глутатинона. Один и тот же образец сыворотки крови может вести себя по-разному при электрофорезе в разное время. Возможно, самое важное лабораторное следствие этих вариантов — формирование комплексов с α 1 -антитрипсином, что приводит к дефициту этого белка на электрофореграммах. Определение количества α 1 -антитрипсина иммунохимическими методами приводит к иным результатам. Функции большинства изоформ альбумина не нарушены, хотя у некоторых выявлено необычное сродство к тироксину (T 4). Связывание может быть увеличено или снижено при семейной дисальбуминемической гипертироксинемии [17].

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬБУМИНА n n Методы определения альбумина в сыворотке крови можно разделить на две группы: непрямые и прямые. К непрямым методам относят методы, в которых альбумин определяют с помощью различных физико-химических реакций

Метод фракционного осаждения n Метод фракционного осаждения [18]. Методы основаны на различной способности альбумина и глобулинов осаждаться в растворах с различной ионной силой. Определение проводят в два этапа. На первом — глобулины осаждают сульфатом аммония, осадок отделяют центрифугированием. На втором — в надосадочной жидкости концентрацию альбумина определяют методом Кьельдаля или с помощью биуретовой реакции. В настоящее время данная группа методов представляет исторический интерес, поскольку они сложны в выполнении, мало специфичны из-за белок-белковых взаимодействий и не поддаются автоматизации

Определение по содержанию отдельных аминокислот в молекуле белка n Определение по содержанию отдельных аминокислот в молекуле белка основано на способности глиоксиловой кислоты в присутствии ионов Ca 2+ в кислой среде реагировать с остатками триптофана в молекуле белка с образование окрашенного комплекса [20]. Поскольку содержание триптофана в альбумине сыворотки человека 0, 2%, по сравнению с 2– 3% в различных γ-глобулинах [21], различия в содержании триптофана использовали для определения альбумина. Несмотря на то, что в свое время метод был автоматизирован [22], данный подход к определению альбумина в сыворотке не получил распространения, несмотря на простоту и специфичность метода

Электрофорез n Электрофорез. После разделения белков сыворотки крови на носителе — ацетате целлюлозы или агарозе, фиксации и окраски процентное соотношение между различными фракциями рассчитывают с помощью денситометрии. Концентрацию альбумина определяют исходя из концентрации общего белка в исследуемом образце сыворотки и процентного содержания альбумина. Метод является трудоемким и приводит к завышению концентрации альбумина, поскольку он обладает более высоким сродством, по сравнению с другими белками сыворотки крови, практически ко всем известным красителям [23].

Определение альбумина при ЭФ n Альбумин мигрирует в виде наиболее быстрого и яркого пятна

Органические анионы и красители. n Органические анионы и красители. Данная группа методов основана на образовании комплекса альбумин-краситель и смещении максимума поглощения реакционной среды. Это позволяет проводить фотометрию в присутствии избытка красителя, необходимого для насыщения всех связывающих сайтов альбумина, что позволяет всем молекулам альбумина принимать участие в реакции. Бромкрезоловый зеленый для определения альбумина был предложен F. Rodkey в 1965. Реакцию обычно проводят при p. H 4, 2– 4, 5, фотометрию осуществляют при 620– 630 нм (рис. 1) [24].

n Спектр поглощения бромкрезолового зеленого: 1 — поглощение рабочего реактива (против воды); 2 — поглощение комплекса альбумин —БКЗ (против воды); 3 — поглощение комплекса альбумин —БКЗ (против рабочего реактива)

В список красителей (рис. 2), используемых для определения альбумина, включены индикаторы, используемые для кислотноосновного титрования: n n бромкрезоловый зеленый (3, 3', 5, 5'-тетрабром-mкрезолсульфофталеин, или БКЗ); бромкрезоловый фиолетовый (5, 5'-дибром-oкрезолсульфофталеин, или БКФ) [25]; бромфеноловый синий (3, 3', 5, 5'-тетрабромфенолсульфофталеин, или БФС) [26]

n n Методы, основанные на связывании БКЗ и БКФ, в настоящее время практически повсеместно используют для определения альбумина в сыворотке и плазме крови, другие красители вышли из употребления из-за нежелательных вмешательств в реакцию и невысокой специфичности методов. БКЗ в качестве реактива используют для определения альбумина сыворотки с помощью технологии «сухой» химии. Неионнный детергент Brij-35 включают в состав буферного раствора и раствора БКЗ для снижения величины поглощения контрольной пробы, предотвращения появления мутности и обеспечения линейности. БКФ реагирует с альбумином при p. H 5, 2 и вызывает сдвиг максимума поглощения к 603 нм Присутствие гепарина может приводить к получению ложноположительных результатов в методах с использованием БКФ и БКЗ. Его влияние может быть устранено включением в рабочий реактив с БКФ гексадиметрина в концентрации 50 мг/л [41].

Методика с БКЗ n n n К 1, 0 мл (1000 мкл) добавляют 10 мкл сыворотки крови (стандартного рас-ра) Перемешивают и через 3 -5 минут измеряют оптическую плотность против реактива оптическую плотность опытной и стандартной пробы. Расчет традиционный по величине оптической плотности стандартной пробы

иммунохимических методах n n В иммунохимических методах для определения альбумина в сыворотке раньше чаще использовали радиальную иммунодиффузию (РИД). При этом альбумин диффундирует в стационарной фазе — агарозе, содержащей антитела к альбумину. Линии преципитации, образующиеся в реакции между альбумином и антителом, фиксируют и окрашивают. Концентрацию альбумина в образце рассчитывают с помощью калибровочного графика путем сравнения диметра образованного кольца с диаметром колец, образованных при анализе образцов альбумина с известной концентрацией.

ИФА – методы определения альбумина

Норма альбумина сыворотки крови Уровень альбумина, г/л дети до 14 лет 38 — 54 14— 60 лет 35 — 50 старше 60 лет 34 — 48

Зависимость концентрации альбумина от пола и возраста

Благодарю за внимание

Скачать презентацию АЛЬБУМИН Соснин Д Ю Курс клинической лабораторной диагностики

3 Альбумины.pptx

Количество слайдов: 29