Скачать презентацию А царь тем ядом напитал Свои послушливые Скачать презентацию А царь тем ядом напитал Свои послушливые

2013_Lektsia_5_RKhTU (1).ppt

  • Количество слайдов: 81

«А царь тем ядом напитал Свои послушливые стрелы И с ними гибель разослал «А царь тем ядом напитал Свои послушливые стрелы И с ними гибель разослал К соседям в чуждые пределы» А. С. ПУШКИН «АНЧАР» ЛЕКЦИЯ № 5, РХТУ, 2013 НК

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СКРИНИНГОВЫХ МЕТОДОВ в ХТА CD См. Учебник, гл. 4; 5. 2 и 5. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СКРИНИНГОВЫХ МЕТОДОВ в ХТА CD См. Учебник, гл. 4; 5. 2 и 5. 3 НК

Решение задач ХТА может осуществляться с помощью скрининг-тестов, позволяющих в минимальное время из большого Решение задач ХТА может осуществляться с помощью скрининг-тестов, позволяющих в минимальное время из большого круга ТВ выявить одно или несколько веществ, на которые далее проводится целенаправленное исследование. НК

Скрининговые тесты применяются только для определения возможности присутствия представителей какого-либо конкретного класса ТВ Скрининговые Скрининговые тесты применяются только для определения возможности присутствия представителей какого-либо конкретного класса ТВ Скрининговые тесты имеют невысокую специфичность или совсем её не имеют Наибольшую трудность представляет НЕНАПРАВЛЕННЫЙ анализ на «неизвестный яд» . НК

Цель первого этапа скрининга: получение наименьшего количества ложноотрицательных результатов Получение ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНЫХ результатов связано с: Цель первого этапа скрининга: получение наименьшего количества ложноотрицательных результатов Получение ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНЫХ результатов связано с: а) недостаточной ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬЮ используемого метода; б) преднамеренной фальсификацией пробы; в) недостаточной квалификацией эксперта; г) систематическими ошибками исследований. НК

Второй этап скрининга состоит в удалении ложноположительных результатов ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ результаты (10 — 15%) обусловлены Второй этап скрининга состоит в удалении ложноположительных результатов ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ результаты (10 — 15%) обусловлены : • недостаточной специфичностью метода за счет перекрестных реакций, • слабой профессиональной подготовкой эксперта, • систематическими ошибками, • грязными реагентами, • плохой организацией труда, • некачественной документацией. НК

Ложноположительные результаты Тест указывает на возможное присутствие: - какого-либо ТВ, хотя на самом деле Ложноположительные результаты Тест указывает на возможное присутствие: - какого-либо ТВ, хотя на самом деле его нет - одного ТВ, тогда как присутствует другое ТВ Ложноположительные результаты теста поведут к дополнительным тестам, а не к ложному заключению! Например: примеси и разбавители могут вызвать изменения цвета и привести к ложноположительным результатам. Появляющиеся изменения цвета на самом деле не являются ложными, они лишь отражают присутствие веществ, которые не являются целью аналитического исследования. НК

Надежность результатов анализа, полученных с помощью скрининга, определяется: 1) правильностью организационных мероприятий (отбор пробы, Надежность результатов анализа, полученных с помощью скрининга, определяется: 1) правильностью организационных мероприятий (отбор пробы, хранение проб, постоянный контроль за работой оборудования, чистотой реагентов и др. ); 2) чувствительностью и специфичностью используемых методов; 3) знанием: • природы вещества, • способов введения в организм, • распределения вещества в организме, • степени биотрансформации, • путей выведения, • индивидуальных особенностей организма НК

Предел обнаружения - min концентрация или количество вещества, которые можно определять данным методом с Предел обнаружения - min концентрация или количество вещества, которые можно определять данным методом с какой-то допустимой погрешностью. Чувствительность аналитического метода отношение сигнала анализируемого вещества к сигналу базовой линии. Чувствительность выражается в нанограммах на миллилитр (нг/мл) или в граммах на килограмм (г/кг) биообъекта. НК

Выбор метода с НИЗКОЙ чувствительностью грозит необнаружением искомого вещества /ложноотрицательный результат/ При отрицательном результате Выбор метода с НИЗКОЙ чувствительностью грозит необнаружением искомого вещества /ложноотрицательный результат/ При отрицательном результате дальнейшего обнаружения не проводится, т. е. результат имеет отрицательное судебно-химическое значение НК

Под специфичностью понимают способность метода отличать химическую структуру данного соединения от ему подобных Под специфичностью понимают способность метода отличать химическую структуру данного соединения от ему подобных аналогов. Выбор аналитических методов для скрининга определяется задачей анализа : ДОБИТЬСЯ МИНИМУМА ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ И МАКСИМУМА ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ и связан с их аналитическими характеристиками - чувствительностью и специфичностью. НК

В качестве ОСНОВНЫХ ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫХ СКРИНИНГОВЫХ методов для обнаружения ТВ используют: • иммунохимические (ИФА, РИА, В качестве ОСНОВНЫХ ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫХ СКРИНИНГОВЫХ методов для обнаружения ТВ используют: • иммунохимические (ИФА, РИА, ПФИА и др. ) • хроматографические (ТСХ) • цветные тесты (хромогенные реакции) НК

В качестве ПОДТВЕРЖДАЮЩИХ методов исследования используют : • Хроматографические ГЖХ, ВЭЖХ • Спектральные УФ-, В качестве ПОДТВЕРЖДАЮЩИХ методов исследования используют : • Хроматографические ГЖХ, ВЭЖХ • Спектральные УФ-, ИК-, масс-спектрометрия, ЯМР и др. • Гибридные ГХ-МС, ВЭЖХ-МС и др. • Капиллярный электрофорез • Микрокристаллоскопические • и другие НК

РЕЗЮМЕ При использовании даже самого чувствительного предварительного метода РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ДОЛЖНЫ БЫТЬ ПОДТВЕРЖДЕНЫ аналитическими РЕЗЮМЕ При использовании даже самого чувствительного предварительного метода РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ДОЛЖНЫ БЫТЬ ПОДТВЕРЖДЕНЫ аналитическими методами, основанными на других физико-химических принципах. ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ методы должны быть выше или равными по чувствительности предварительным методам /для уменьшения количества ложноотрицательных результатов/ и выше по специфичности, /для снижения количества ложноположительных результатов/. НК

ХТА – системный анализ Контроль каждой стадии аналитического процесса отбор пробы подготовка и перевод ХТА – системный анализ Контроль каждой стадии аналитического процесса отбор пробы подготовка и перевод ее в форму, удобную для анализа разделение и концентрирование обнаружение и количественное определение обработка результатов и их интерпретация должен осуществляться следующими способами: 1) применение эталонных образцов; 2) калибровка проведенных операций (проверка правильности метода анализа); 3) статистическая обработка результатов (проверка воспроизводимости метода анализа); 4) контроль за условиями процесса (температура, р. Н и т. д. ). НК

Выбор метода определяется: § типом контролируемого вещества § концентрацией контролируемого вещества в образце § Выбор метода определяется: § типом контролируемого вещества § концентрацией контролируемого вещества в образце § характером разбавителей и примесей § наличием приборов для анализа § опытом исследователя НК

Заключение химика-эксперта основано на результатах системного ХТА при определении ТВ в биообъектах НК Заключение химика-эксперта основано на результатах системного ХТА при определении ТВ в биообъектах НК

Схема проведения ХТ - исследования на неизвестное ТВ 1 этап Объект Контроль Аликвота для Схема проведения ХТ - исследования на неизвестное ТВ 1 этап Объект Контроль Аликвота для исследования скрининг Иммунохимические методы (ИФА, ПФИА) Хроматографические методы (ТСХ) НК

2 этап Отрицательный результат Заключение Не найдено на уровне установленного предела обнаружения Положительный результат 2 этап Отрицательный результат Заключение Не найдено на уровне установленного предела обнаружения Положительный результат Подтверждающее исследование: ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ-МС, ВЭЖХМС, спектральные методы (УФС; ИКС и др. ), массспектрометрия, фармакологические пробы и др. Интерпретация результата НК

ОБЩАЯ СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ ТСХ - СКРИНИНГА См. Учебник, гл. 5. 3 CD • ПРОВЕДЕНИЕ ОБЩАЯ СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ ТСХ - СКРИНИНГА См. Учебник, гл. 5. 3 CD • ПРОВЕДЕНИЕ ТСХ В ОБЩИХ СИСТЕМАХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ • ПРИ ПОЛОЖИТЕЛЬНОМ РЕЗУЛЬТАТЕ ПРОВЕДЕНИЕ ТСХ В ЧАСТНЫХ СИСТЕМАХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ • ВЫБОР ЭЛЮЕТА ДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ НК

SCREENING /англ. / «скрининг» - отбор, просеивание В процессе хроматографического разделения вещества распределяются по SCREENING /англ. / «скрининг» - отбор, просеивание В процессе хроматографического разделения вещества распределяются по хроматографическим зонам. Использование комплекса ДЕТЕКТИРУЮЩИХ ГРУППОВЫХ реагентов позволяет ВЫХ ИСКЛЮЧАТЬ / классы/группы соединений. В результате: область поиска СУЖИВАЕТСЯ до наиболее ВЕРОЯТНЫХ ТОКСИКАНТОВ НК

q ТСХ - скрининг начинается с исследования в ОБЩЕЙ СИСТЕМЕ РАСТВОРИТЕЛЕЙ q Анализируемая проба q ТСХ - скрининг начинается с исследования в ОБЩЕЙ СИСТЕМЕ РАСТВОРИТЕЛЕЙ q Анализируемая проба распределяется восновную зону и контрольную зону q ОСНОВНАЯ ЗОНА последовательно проявляется серией ГРУППОВЫХ реагентов В результате: Ø некоторые группы ТВ исключаются Ø остаются наиболее вероятные группы ТВ Ø делается предварительное заключение НК

Далее используют элюат, полученный из Далее КОНТРОЛЬНОЙ зоны пластинки. Элюат расходуется на проведение ТСХ Далее используют элюат, полученный из Далее КОНТРОЛЬНОЙ зоны пластинки. Элюат расходуется на проведение ТСХ исследования в ЧАСТНОЙ СИСТЕМЕ растворителей, чтобы подтвердить наличие предполагаемого ТВ (2 этап скрининга) ВЫБОР СИСТЕМ РАСТВОРИТЕЛЕЙ проводят с учетом: v РАСПОЛОЖЕНИЯ РАСТВОРИТЕЛЯ В ЭЛЮОТРОПНОМ РЯДУ v СВОЙСТВ РАЗДЕЛЯЕМЫХ ВЕЩЕСТВ v ПРИМЕНЯЕМЫХ СОРБЕНТОВ НК

КРИТЕРИИ ВЫБОРА ОБЩИХ И ЧАСТНЫХ СИСТЕМ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ОБЩИЕ СИСТЕМЫ ХАРАКТЕРИЗУЮТСЯ: – высокой разделяющей способностью КРИТЕРИИ ВЫБОРА ОБЩИХ И ЧАСТНЫХ СИСТЕМ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ОБЩИЕ СИСТЕМЫ ХАРАКТЕРИЗУЮТСЯ: – высокой разделяющей способностью – разделением анализируемых веществ на группы, локализованные в хроматографические зоны – локализованным расположением большей части соэкстрактивых веществ вне зоны исследуемых веществ ЧАСТНЫЕ СИСТЕМЫ имеют высокую эффективность разделения исследуемых веществ, входящих в ту или иную хроматографическую зону НК

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СИСТЕМЫ • СКОРОСТЬ • ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ • ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ • РАСПРЕДЕЛЕНИЕ Rf НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СИСТЕМЫ • СКОРОСТЬ • ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ • ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ • РАСПРЕДЕЛЕНИЕ Rf НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ПЛАСТИНЕ • РАЗДЕЛЯЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ (дискриминирующая сила DP) • КОРРЕЛЯЦИЯ МЕЖДУ СИСТЕМАМИ (если используется не одна система растворителей) НК

ОБЩИЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ АНАЛИЗ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО И СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА • АЦЕТОН: ХЛОРОФОРМ (1: ОБЩИЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ АНАЛИЗ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО И СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА • АЦЕТОН: ХЛОРОФОРМ (1: 9) АНАЛИЗ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО И СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА • • • АЦЕТОН : ХЛОРОФОРМ : 25% АММИАК : ДИОКСАН (5: 45: 2, 5: 47, 5) МЕТАНОЛ : КОНЦ. АММИАК (100: 1, 5) ЭТИЛАЦЕТАТ : КОНЦ. АММИАК : МЕТАНОЛ (85: 5: 10) КОНЦ. АММИАК : БЕНЗОЛ : ДИОКСАН (5: 60: 35) МЕТАНОЛ : АЦЕТОН : ТРИЭТИЛАМИН (1: 1: 0, 03) БЕНЗОЛ : ХЛОРОФОРМ : ДИЭТИЛАМИН (6: 3: 1) НК

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ЗОНЫ СИСТЕМА АЦЕТОН : ХЛОРОФОРМ (1: 9) 1 ЗОНА – 0, 0 -0, ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ЗОНЫ СИСТЕМА АЦЕТОН : ХЛОРОФОРМ (1: 9) 1 ЗОНА – 0, 0 -0, 25 2 ЗОНА – 0, 31 -0, 41 3 ЗОНА – 0, 41 -0, 64 СИСТЕМА АЦЕТОН : ХЛОРОФОРМ : 25% АММИАК : ДИОКСАН (5: 45: 2, 5: 47, 5) 1 ЗОНА – 0, 12 -0, 36 2 ЗОНА – 0, 5 -0, 58 3 ЗОНА – 0, 63 -0, 83 4 ЗОНА – 0, 87 -0, 98 НК

ЧАСТНЫЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА – АЦЕТОН : ЦИКЛОГЕКСАН (5 ЧАСТНЫЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА – АЦЕТОН : ЦИКЛОГЕКСАН (5 : 1) система используется для 1 хроматографической зоны – ХЛОРОФОРМ : БУТАНОЛ : 25 % Р-Р АММИАКА (70 : 40 : 5) система используется для 2 хроматографической зоны – ЭТИЛАЦЕТАТ : БЕНЗОЛ : ЭТАНОЛ : 25 % Р-Р АММИАКА (95 : 15 : 1) система используется для 3 хроматографической зоны НК

ЧАСТНЫЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА – ХЛОРОФОРМ : ДИЭТИЛАМИН (9 ЧАСТНЫЕ СИСТЕМЫ РАСТВОРИТЕЛЕЙ ДЛЯ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА – ХЛОРОФОРМ : ДИЭТИЛАМИН (9 : 1) система используется для 1 хроматографической зоны – ХЛОРОФОРМ : АЦЕТОН (5 : 1) система используется для 2 хроматографической зоны – ХЛОРОФОРМ : ЭТАНОЛ (20 : 1) система используется для 3 хроматографической зоны – ЦИКЛОГЕКСАН : АЦЕТОН (5 : 1) система используется для 4 хроматографической зоны НК

КРИТЕРИИ ВЫБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ СОЕДИНЕНИЙ • ОТСУТСТВИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ РЕАГЕНТОВ МЕЖДУ СОБОЙ КРИТЕРИИ ВЫБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ СОЕДИНЕНИЙ • ОТСУТСТВИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ РЕАГЕНТОВ МЕЖДУ СОБОЙ • ОТСУТСТВИЕ ИНТЕНСИВНОЙ ОКРАСКИ ФОНА ПЛАСТИНКИ, МАСКИРУЮЩЕГО ОКРАШЕННЫЕ ЗОНЫ АНАЛИЗИРУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ • ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ РЕАКЦИЙ ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕАГЕНТОВ НЕ ДОЛЖНА СНИЖАТЬСЯ НК

ОБНАРУЖЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА § - ПРОСМОТР В УФ-СВЕТЕ § - ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОБНАРУЖЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА § - ПРОСМОТР В УФ-СВЕТЕ § - ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕАГЕНТОВ: § 5 % раствор Hg. SO 4 в конц. H 2 SO 4 И 0, 1% раствор ДИФЕНИЛКАРБАЗОНА В ХЛОРОФОРМЕ (обнаружение барбитуратов) § 10 % раствор Fe. Cl 3 (обнаружение фенотиазинов) § Модифицированный реактив Драгендорфа (обнаружение соединений, содержащих в структуре молекулы третичный атом азота) и 10 % раствор H 2 SO 4 для повышения чувствительности реактива Драгендорфа НК

ОБНАРУЖЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА § 10 % раствор Fe. Cl 3 (обнаружение ОБНАРУЖЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА § 10 % раствор Fe. Cl 3 (обнаружение производных фенотиазинов, пиразолона) § HCl. O 4 конц. , содержащая 3 % или 5 % раствор Na. NO 2 (производные фенотиазина) § 10 % раствор H 2 SO 4 и просмотр В УФ-СВЕТЕ (хинин) § Модифицированный реактив Драгендорфа (соединения, содержащие в структуре молекулы третичный атом азота) § 10 % раствор H 2 SO 4 для повышения чувствительности реактива Драгендорфа НК

ЭЛЮЕНТ ДОЛЖЕН БЫТЬ: q ЧИСТЫЙ /ч. д. а. / q ЛЕТУЧИЙ q ИНЕРТНЫЙ К ЭЛЮЕНТ ДОЛЖЕН БЫТЬ: q ЧИСТЫЙ /ч. д. а. / q ЛЕТУЧИЙ q ИНЕРТНЫЙ К ЭЛЮИРУЮЩИМ ВЕЩЕСТВАМ q ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЭЛЮИРУЮЩЕЙ СИЛЫ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ: ЭЛЮЕНТ МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ НЕ БОЛЕЕ ДВУХ КОМПОНЕНТОВ ЭЛЮЕНТ МОЖНО ПРИМЕНЯТЬ, ЕСЛИ Rf ВЕЩЕСТВА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ДАННОГО ЭЛЮЕНТА В КАЧЕСТВЕ ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ НЕ МЕНЕЕ 0, 8 НК

ЭЛЮИРОВАНИЕ • СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА: – МЕТАНОЛ используется в 1 хроматографической зоне ЭЛЮИРОВАНИЕ • СОЕДИНЕНИЙ КИСЛОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА: – МЕТАНОЛ используется в 1 хроматографической зоне – АЦЕТОН используется во 2 и 3 хроматографических зонах • СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО, НЕЙТРАЛЬНОГО, СЛАБООСНОВНОГО ХАРАКТЕРА: – МЕТАНОЛ : ДИЭТИЛАМИН (9: 1) используется в 1 хроматографической зоне – МЕТАНОЛ : 25 % АММИАК (9: 1) используется во 2, 3 и 4 -ой хроматографических зонах НК

СИСТЕМА ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ТОКСИ-ЛАБ НК СИСТЕМА ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ТОКСИ-ЛАБ НК

ПАРАМЕТРЫ СИСТЕМЫ УНИФИЦИРОВАНЫ СТАДИИ: – ПРОБОПОДГОТОВКИ БИООБЪЕКТА – КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ – ПРОЯВЛЕНИЯ – ОБНАРУЖЕНИЯ НК ПАРАМЕТРЫ СИСТЕМЫ УНИФИЦИРОВАНЫ СТАДИИ: – ПРОБОПОДГОТОВКИ БИООБЪЕКТА – КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ – ПРОЯВЛЕНИЯ – ОБНАРУЖЕНИЯ НК

TOXI-LAB «А» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОСНОВНОГО ХАРАКТЕРА НК TOXI-LAB «А» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОСНОВНОГО ХАРАКТЕРА НК

ТОКСИ-ЛАБ ОСНОВНЫЕ ОПЕРАЦИИ НК ТОКСИ-ЛАБ ОСНОВНЫЕ ОПЕРАЦИИ НК

Система проявления Состав концентрата: 87 мл этилацетата 3 мл метанола 1. 5 мл дистиллированной Система проявления Состав концентрата: 87 мл этилацетата 3 мл метанола 1. 5 мл дистиллированной воды НК

Предварительная стадия Обработка парами формальдегида от 5 минут до 30 минут НК Предварительная стадия Обработка парами формальдегида от 5 минут до 30 минут НК

Стадия I обработка серной кислотой НК Стадия I обработка серной кислотой НК

Стадия II промывка водой НК Стадия II промывка водой НК

Стадия III ПРОСМОТР В УФ-ОБЛАСТИ. НК Стадия III ПРОСМОТР В УФ-ОБЛАСТИ. НК

Стадия IV обработка модифицированным реактивом Драгендорфа НК Стадия IV обработка модифицированным реактивом Драгендорфа НК

Стадии обнаружения 1 стадия Обработка конц. серной кислотой l 2 стадия Обработка водой l Стадии обнаружения 1 стадия Обработка конц. серной кислотой l 2 стадия Обработка водой l 3 стадия Исследование в УФ l 4 стадия Обработка реактивом Драгендорфа l 1 1 а 2 а 2 1 а стандарт амфетамина l 2 а стандарт кодеина l 1 амфетамин в исследуемом образце l 2 кодеин в исследуемом образце l НК

TOXI-LAB «B» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ КИСЛОГО ХАРАКТЕРА НК TOXI-LAB «B» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ КИСЛОГО ХАРАКТЕРА НК

Система проявления Состав концентрата: 60 МЛ ДИХЛОРМЕТАНА 40 МЛ ЭТИЛАЦЕТАТА НК Система проявления Состав концентрата: 60 МЛ ДИХЛОРМЕТАНА 40 МЛ ЭТИЛАЦЕТАТА НК

Стадия I ОБРАБОТКА ДИФЕНИЛКАРБАЗОНОМ, НИТРАТОМ СЕРЕБРА, СУЛЬФАТОМ РТУТИ НК Стадия I ОБРАБОТКА ДИФЕНИЛКАРБАЗОНОМ, НИТРАТОМ СЕРЕБРА, СУЛЬФАТОМ РТУТИ НК

СТАДИЯ II ПРОСМОТР В УФ-ОБЛАСТИ НК СТАДИЯ II ПРОСМОТР В УФ-ОБЛАСТИ НК

TOXI - LAB «TCH II» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ГРУППЫ КАННАБИНОИДОВ НК TOXI - LAB «TCH II» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ГРУППЫ КАННАБИНОИДОВ НК

НК НК

TOXI-LAB «LTD ОПИАТЫ» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОПИЙНОЙ ГРУППЫ НК TOXI-LAB «LTD ОПИАТЫ» - СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРКОТИЧЕСКИХ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ОПИЙНОЙ ГРУППЫ НК

ТОКСИ-ЛАБ ЛТД Опиаты ОСНОВНЫЕ ОПЕРАЦИИ НК ТОКСИ-ЛАБ ЛТД Опиаты ОСНОВНЫЕ ОПЕРАЦИИ НК

НК НК

ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ СХЭ И АНАЛИТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЙ И НАРКОМАНИЙ См. Учебник, ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ СХЭ И АНАЛИТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЙ И НАРКОМАНИЙ См. Учебник, гл. 5. 2 + CD НК

o ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ НА ЭТАПЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ (СКРИНИНГА) o ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ТРЕБУЕТ ОБЯЗАТЕЛЬНОГО o ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ НА ЭТАПЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ (СКРИНИНГА) o ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ТРЕБУЕТ ОБЯЗАТЕЛЬНОГО ПОДТВЕРЖДЕНИЯ o ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ ПРИНИМАЕТСЯ ОКОНЧАТЕЛЬНЫМ И ПОДТВЕРЖДЕНИЯ НЕ ТРЕБУЕТ НК

ПРИНЦИП ИММУНОАНАЛИЗА + = ПРИМЕНЕНИЕ РЕАКЦИИ АНТИГЕНА С АНТИТЕЛОМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОДНОГО ИЗ ПРИНЦИП ИММУНОАНАЛИЗА + = ПРИМЕНЕНИЕ РЕАКЦИИ АНТИГЕНА С АНТИТЕЛОМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОДНОГО ИЗ ЭТИХ РЕАГЕНТОВ НК

АНТИГЕН – вещество, способное вызывать биосинтез специфических антител (высокомолекулярные вещества-белки, полисахариды и т. д. АНТИГЕН – вещество, способное вызывать биосинтез специфических антител (высокомолекулярные вещества-белки, полисахариды и т. д. ). ИММУНОГЕННОСТЬ – способность вызывать иммунный ответ АНТИГЕННОСТЬ – способность образовывать комплексы с антителами АНТИГЕННАЯ ДЕТЕРМИНАНТА (ЦЕНТР) - функциональные группы на поверхности антигена НК

АНТИТЕЛА – специфические антитела крови (иммуноглобулины) ПОЛИКЛОНАЛЬНЫЕ – гетерогенные по структуре активного центра физико-химическим АНТИТЕЛА – специфические антитела крови (иммуноглобулины) ПОЛИКЛОНАЛЬНЫЕ – гетерогенные по структуре активного центра физико-химическим свойствам МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ – гомогенные по специфичности физико-химическим свойствам НК

ГАПТЕНЫ - низкомолекулярные вещества, не способные вызывать образование антител, но приобретающие иммуногенные свойства после ГАПТЕНЫ - низкомолекулярные вещества, не способные вызывать образование антител, но приобретающие иммуногенные свойства после коньюгирования с высокомолекулярными носителями. НК

Параметры, на которых построена классификация ИХМ анализа 1. 2. 3. 4. Сущность метода Стандартные Параметры, на которых построена классификация ИХМ анализа 1. 2. 3. 4. Сущность метода Стандартные препараты Характеристики используемых антител Тип применяемой метки и система детектирования 5. Другие НК

Сущность метода 1. Конкурентное связывание: - одна антигенная детерминанта на определяемом веществе, - анализ Сущность метода 1. Конкурентное связывание: - одна антигенная детерминанта на определяемом веществе, - анализ выполняется в условиях ограниченных количеств реагента 2. Неконкурентное связывание: - на определяемом веществе должно быть две неперекрывающиеся антигенные детерминанты, - анализ выполняется в условиях избытка реагента 3. Неравновесный режим: - используется одна антигенная детерминанта - строго контролируемый избыток реагента НК

Стандартные препараты применяются: 1. В качестве антигенов на твердой фазе 2. для получения антител Стандартные препараты применяются: 1. В качестве антигенов на твердой фазе 2. для получения антител 3. для определения выделенных гаптенов НК

Характеристики используемых антител 1. Полиили моноклональные антитела 2. Антитела различного типа (Jg G или Характеристики используемых антител 1. Полиили моноклональные антитела 2. Антитела различного типа (Jg G или Jg М) и подтипа (Jg G 1 или Jg G 2 a) 3. Моноили поливалентные антитела НК

4. Моно- или биспецифические антитела. 5. Антитела нативные или полученные химическим /генно-инженерным/ путем. 6. 4. Моно- или биспецифические антитела. 5. Антитела нативные или полученные химическим /генно-инженерным/ путем. 6. Антиаллотипические или антиидиотипические антитела. 7. Антитела меченые или связанные с твердым носителем. НК

ТИП ПРИМЕНЯЕМОЙ МЕТКИ o ЧАСТИЦЫ (ЭРИТРОЦИТЫ, ЛАТЕКС) o ЗОЛИ МЕТАЛЛОВ (КОЛЛОИДНОЕ ЗОЛОТО) o РАДИОНУКЛИДЫ ТИП ПРИМЕНЯЕМОЙ МЕТКИ o ЧАСТИЦЫ (ЭРИТРОЦИТЫ, ЛАТЕКС) o ЗОЛИ МЕТАЛЛОВ (КОЛЛОИДНОЕ ЗОЛОТО) o РАДИОНУКЛИДЫ (ИОД-125) o ФЕРМЕНТЫ, КОФАКТОРЫ (ПЕРОКСИДАЗА ХРЕНА, ОКСИДАЗЫ) o ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ЛЮМИНОФОРЫ (ЭФИРЫ АКРИДИНА, ФЛУОРЕСЦЕИН) o ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА (ДИМЕТИЛАМИНОМЕТИЛФЕРРОЦЕН) НК

Классификация иммунохимических методов анализа по способу детектирования Название метода Радиоиммунный анализ (РИА) Иммуноферментный анализ Классификация иммунохимических методов анализа по способу детектирования Название метода Радиоиммунный анализ (РИА) Иммуноферментный анализ (ИФА) Способ детектирования Радиоактивность Ферментная активность Поляризационный флуороиммуноанализ (ПФИА) Интенсивность флуоресценции Люминесцентный иммуноанализ (ЛИА) Интенсивность люминесценции Иммуноанализ с использованием «частиц» Иммуносенсорные методы Турбодиаметрия и иммунодиффузия (ИД) Электрический сигнал НК

ИХМ классифицируют ПО ТЕХНИКЕ ВЫПОЛНЕНИЯ o ЖИДКОФАЗНЫЕ И ТВЕРДОФАЗНЫЕ o РУЧНЫЕ, ПОЛУАВТОМАТИЧЕСКИЕ ИЛИ АВТОМАТИЧЕСКИ ИХМ классифицируют ПО ТЕХНИКЕ ВЫПОЛНЕНИЯ o ЖИДКОФАЗНЫЕ И ТВЕРДОФАЗНЫЕ o РУЧНЫЕ, ПОЛУАВТОМАТИЧЕСКИЕ ИЛИ АВТОМАТИЧЕСКИ o С ЭКСТРАКЦИЕЙ ИЛИ БЕЗ НЕЕ Иммунохимические методы, используемые во внелабораторных условиях (тест-полоски): иммунохроматографический анализ (ИХА) НК

ИХА ПРИНЦИП – – ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА Зона С Зона Т Зона старта ИХ А ИХА ПРИНЦИП – – ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА Зона С Зона Т Зона старта ИХ А НК

ДОСТОИНСТВА ИХА: n ОТСУТСТВИЕ ПРОБОПОДГОТОВКИ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ n ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ( 300 -500 НГ/МЛ) ДОСТОИНСТВА ИХА: n ОТСУТСТВИЕ ПРОБОПОДГОТОВКИ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ n ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ( 300 -500 НГ/МЛ) n ОПРЕДЕЛЯЮТСЯ ОСНОВНЫЕ ГРУППЫ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ (КРОМЕ ЛСД) И ПСИХОТРОПНЫХ ВЕЩЕСТВ. n ПРОСТ И БЫСТР В ИСПОЛЬЗОВАНИИ n НЕ ТРЕБУЕТ ТОЧНОГО ДОЗИРОВАНИЯ ПРОБ И РЕАГЕНТОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ИХ МАЛЫХ КОЛИЧЕСТВ n РЕАГЕНТЫ СТАБИЛЬНЫ В ТЕЧЕНИЕ 1, 5 ЛЕТ n ПРОСТОТА В ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТА НК

НЕДОСТАТКИ ИХМ: § НИЗКАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ ВЕДЕТ К УВЕЛИЧЕНИЮ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ § НИЗКОЕ КАЧЕСТВО ТЕСТОВ НЕДОСТАТКИ ИХМ: § НИЗКАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ ВЕДЕТ К УВЕЛИЧЕНИЮ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ § НИЗКОЕ КАЧЕСТВО ТЕСТОВ § ГРУППОВОЙ АНАЛИЗ § ВЫСОКАЯ ВЕРОЯТНОСТЬ ФАЛЬСИФИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ НК

Инструментальные иммунохимические методы n n n Иммуноферментный метод анализа - гомогенный вариант - гетерогенный Инструментальные иммунохимические методы n n n Иммуноферментный метод анализа - гомогенный вариант - гетерогенный вариант Поляризационный флуороиммуноанализ (ПФИА) Другие См. Учебник, гл. 5. 2+ CD НК

Принцип действия гомогенного иммуноферментного метода анализа S P антиген Взаимодействие ферментной метки с субстратом Принцип действия гомогенного иммуноферментного метода анализа S P антиген Взаимодействие ферментной метки с субстратом S антитело ферментная метка P НК

ПРИНЦИП ГЕТЕРОГЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА АНАЛИЗА 2 4 3 S P 1 1 - АНТИГЕН ПРИНЦИП ГЕТЕРОГЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА АНАЛИЗА 2 4 3 S P 1 1 - АНТИГЕН 2 - АНТИТЕЛО С ПРИШИТОЙ ФЕРМЕНТНОЙ МЕТКОЙ 3 4 - СУБСТРАТ НК

ПРИНЦИП ГЕТЕРОГЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИВИДОВЫХ АНТИТЕЛ МЕЧЕНЫХ ФЕРМЕНТОМ 1. ПОДЛОЖКА, НА КОТОРУЮНА НЕСЕН ПРИНЦИП ГЕТЕРОГЕННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИВИДОВЫХ АНТИТЕЛ МЕЧЕНЫХ ФЕРМЕНТОМ 1. ПОДЛОЖКА, НА КОТОРУЮНА НЕСЕН ГАПТЕН 2. АНТИТЕЛА 3. АНТИВИДОВЫЕ АНТИТЕЛА 4. ФЕРМЕНТ Пероксидаза Хрена S - субстрат Р - измененный субстрат НК

Результат исследования НК Результат исследования НК

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА ИФА ДОСТОИНСТВА: n СЕРИЙНОСТЬ И ЭКСПРЕССНОСТЬ (ГОМОГЕННЫЙ ВАРИАНТ) n СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА ИФА ДОСТОИНСТВА: n СЕРИЙНОСТЬ И ЭКСПРЕССНОСТЬ (ГОМОГЕННЫЙ ВАРИАНТ) n СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ В ТЕЧЕНИЕ ГОДА n ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ü ГЕТЕРОГЕННЫЙ ü ГОМОГЕННЫЙ ВАРИАНТ ДО 10 НГ/МЛ ВАРИАНТ ДО 300 -500 НГ/МЛ НК

НЕДОСТАТКИ: § ВОЗМОЖНОСТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ n ГРУППОВОЙ АНАЛИЗ n ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ, НЕДОСТАТКИ: § ВОЗМОЖНОСТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ n ГРУППОВОЙ АНАЛИЗ n ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА ХРАНЕНИЕ РЕАГЕНТОВ, ПРОТЕКАНИЕ ПРОЦЕССОВ ПРИ АНАЛИЗЕ, n ВЛИЯНИЕ р. Н СРЕДЫ n НЕПРЕРЫВНОСТЬ СТАДИЙ n ТРУДНОСТЬ АВТОМАТИЗАЦИИ В ГЕТЕРОГЕННОМ ВАРИАНТЕ n ДЛИТЕЛЬНОСТЬ АНАЛИЗА В ГЕТЕРОГЕННОМ ВАРИАНТЕ n ИЗМЕНЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПРИ ВОЗМОЖНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ n ВЫСОКИЙ ПРОЦЕНТ СУБЪЕКТИВНЫХ ОШИБОК НК

МЕТОД ПФИА ДОСТОИНСТВА: n АВТОМАТИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА n ОТСУТСТВИЕ СТАДИИ ПРОБОПОДГОТОВКИ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ n МЕНЬШАЯ МЕТОД ПФИА ДОСТОИНСТВА: n АВТОМАТИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА n ОТСУТСТВИЕ СТАДИИ ПРОБОПОДГОТОВКИ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ n МЕНЬШАЯ ПОДВЕРЖЕННОСТЬ ВЛИЯНИЮ ТЕМПЕРАТУРЫ И р. Н СРЕДЫ, ЧЕМ В ИФА n ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ (300 -500 НГ/МЛ) n СЕРИЙНОСТЬ И ЭКСПРЕССНОСТЬ n СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ В ТЕЧЕНИЕ ГОДА НК

НЕДОСТАТКИ: § ВЫСОКАЯ СТОИМОСТЬ РЕАГЕНТОВ § ВОЗМОЖНОСТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ § ГРУППОВОЙ АНАЛИЗ НК НЕДОСТАТКИ: § ВЫСОКАЯ СТОИМОСТЬ РЕАГЕНТОВ § ВОЗМОЖНОСТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ § ГРУППОВОЙ АНАЛИЗ НК

ОДНА ИЗ ОСНОВНЫХ ПРОБЛЕМ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ И ПСИХОТРОПНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРАВИЛЬНАЯ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОДНА ИЗ ОСНОВНЫХ ПРОБЛЕМ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ И ПСИХОТРОПНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРАВИЛЬНАЯ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ЯВЛЯЕТСЯ ЛИ РЕЗУЛЬТАТ ИСТИННЫМ ? ! ИНСТИННОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ ИЛИ ИСТИННООТРИЦАТЕЛЬНЫМ При выборе аналитического метода необходимо сопоставлять и учитывать преимущества и недостатки каждого из НК них.