56 ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ Основные положения ДНК-зависимая РНК-полимераза Регуляция экспресии генов на уровне транскрипции и на уровне трансляции. Экспрессия генов – это процесс реализации информации, закодированной в структуре ДНК, на уровне РНК и белков. GUA CGU AAG UAA GUA UGG Инициация трансляции: рамка считывания и код «без запятых» Генетический код: однозначность и вырожденность. тРНК
57 CИНТЕЗ РНК ПО ДНК-МАТРИЦЕ Рибонуклеотиды: A, U, C, G РНК-полимераза расплетает дуплекс ДНК в месте транскрипции РНК-транскрипты и матричные ДНК РНК Смысловая цепь (-) Несмысловая цепь (+), матрица
58 ДНК-ЗАВИСИМЫЕ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ РНК-полимераза E. coli Кор-фермент a2bbw Холофермент a2bbws Thermus aquaticus RNA polymerase holoenzyme
59 ДНК-ЗАВИСИМЫЕ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ «Рабочий цикл» s-субъединицы Участия различных s-субъединиц в споруляции Bacillus subtilis s-факторы E. coli
60 ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ -35 -10 Прибнов-бокс Типичный промотор E.coli Нуклеотидные последовательности смысловой цепи ДНК до сайта инициации транскрипции различных генов E.coli и бактериофагов
61 ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Связывание холоферментной формы РНК-полимеразы с областью промотора Считается, что белок перекрывает область длиной 50 нуклеотидов, начинающуюся немного раньше -35-последовательности и кончающуюся внутри транскрибируемого участка. Связывание стимулирует расплетание спирали и транскрипцию.
62 ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Влияние мутаций в -10- и -35-последовательностях на силу промотора
63 ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Примеры шпилек в r-независимых и r-зависимых терминаторах транскрипции r-зависимый терминатор r-независимые терминаторы GC-богатый участок GC-богатый участок GC-богатый участок Участок из остатков U Участок из остатков U r - ро, rho
ρ-НЕЗАВИСИМАЯ ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ 63.5
pλ pΔ p58.21 Гасанов Е.В. и др. Мол. генетика, микробиол. и вирусол. 2007. № 2. С. 31-32.
64 ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Влияние r-белка (фактора) на остановку РНК-полимеразы в терминаторе, сопровождающуюся терминацией транскрипции с отделением фермента и синтезированной РНК r-белок – геликаза, расплетающая дуплекс РНК-ДНК и использующая для этого РНК-зависимый гидролиз АТФ. r-белок движется медленнее, чем РНК-полимераза