2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 1
Часть 1 Современные представления о возбудителе. Возможности дифференциальной диагностики стадии заболеваний, вызываемых Урогенитальный хламидиоз C. trachomatis. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 2
О чём следует помнить? ØВ настоящее время серологическая диагностика – это выявление СПЕЦИФИЧЕСКИХ антител к СПЕЦИФИЧЕСКИМ антигенам микроорганизмов. Возможности генно -инженерной технологии позволяют получать рекомбинантные и химерные белки, пептиды. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 3
молекула ДНК, искомый специфический ген праймеры для реакции амплификации РНК и-РНК т-РНК + рибосома = специфический белок возбудителя антитела к специфическому белку выявление специфических антител методом ИФА 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 4
Функции антител: Ig. M Ø Ig. M – антитела ранней стадии (дети и подростки). Биологическая функция – лизис бактерий вместе с системой комплимента (преимущественно грамотрицательные бактерии) 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 5
Ig. A Ø Ig. A – ингибиция взаимодействия возбудителя с клетками эпителия дыхательных путей, урогенитального и желудочно-кишечного тракта. (Опсонизация – в меньшей степени) Ø Могут исполнять функцию ранних антител у возрастной категории пациентов, в случае не первого (повторного) взаимодействия с возбудителем. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 6
Ig. G Ø Ig. G – нейтрализация токсинов и антигенов (бактериальных, вирусных). Ø Опсонизация возбудителя – Ø Ig. G 2, Ig. G 4–слабые опсонины (Th 2), Ig. G 1, Ig. G 3–сильные опсонины (Th 1). Ø В зависимости от выбора антигена, также могут быть более ранними или более поздними. Ø Авидность – также временная характеристика антител. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 7
О чём нужно помнить? (2) ØВ зависимости от биологических свойств специфических белков – белки наружных мембран, порины, внутриклеточные белки, токсины, шапероны – временная (и не только) характеристика специфических белков будет различной. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 8
Общие принципы серологической диагностики 1. ИППП – заболевания слизистых – Ig. A, Ig. G 2. Возможность отсутствия Ig. A ( 1: 500) 3. Антительный ответ: а) развитие серорезистентности; б) развитие иммунного ответа с негативацией через 6 -12 мес. (при правильном лечении). 4. Различия в антительном ответе у мужчин и женщин (анатомические, гормональные и иммунологические различия) 5. Волнообразное содержание антител к условным патогенам у женщин на фоне гормонального цикла. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 9
Преимущества современной диагностики (ИФА в том числе) Возможность осуществления контроля исполнения исследования; Ø Возможность автоматизации процесса исследования; Ø Возможность документирования и архивации результатов исследования. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 10
Медико-социальная значимость хламидийной инфекции Высокий уровень заболеваемости как мужчин, так и женщин; Ø Влияние на демографические показатели (бесплодие мужчин и женщин); Ø Стёртость клинической симптоматики; Ø Трудности выявления этиологического возбудителя; Ø Сложность выбора эффективной терапии. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 11
УГХ: заболевания, позволяющие поставить предположительный диагноз больные партнёры НГУ (муж. ) 30% -40% 10% -43% ВЗОМТ 8% -54% 36% Эпидидимит (муж. до 50% 35 лет) 10% -43% Гонорея: мужчины 5% -30% 40% женщины 25% -50% неизвестно 12
Эпидемиологическая характеристика C. trachomatis Ø Инфекция носит медленный характер; Ø Стремится быть неузнанной иммунной системой человека (50% гомология по Hsp 60); Ø Путь передачи – половой, который необходим для сохранения вида хозяина и не может быть разорван. Ø Возбудитель не накапливается в больших количествах (Сиб. Язва - 109 в 1 мл. , ВИЧ – 104 в 1 мл. ) 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 13
2 стратегия паразитирования Микроорганизм, являющийся облигатным внутриклеточным паразитом (C. trachomatis) способен распространяться при невысокой плотности населения и низкой интенсивности передачи. Ø Облигатный паразитизм всегда приводит к упрощению (микро)организма; Ø В результате этой стратегии развиваются либо пролиферативные заболевания (онкология крови), либо поражение иммунитета (СПИД), либо имитация соматического заболевания (атеросклероз) Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 14
ВЗОМТ (воспалительные заболевания органов малого таза) 1 -2 N. gonorrhoeae M. hominis, U. urealyticum, M. genitalium 1 -2 C. trachomatis ВЗОМТ БВ (бактериальный вагиноз)? 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 15
Факторы риска ВЗОМТ Ness et al. 2006 год Ø Ø Ø Ø Возраст начала сексуальной жизни(≤ 15); «текущий» цервицит; «история» ВЗОМТ; Курение; Секс во время менстр. ; Использование контр. «Depo-Provera» ; Ежегодный доход меньше $ 20, 000. 2/10/2018 Westrom et al/ (1960 -1992) Ø Ø Ø Возраст; Сексуальное поведение; Использование контрацептивов; Уровень заботы о собственном здоровье; Менструации. В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 16
Эктопическая беременность (6 -10*риск) Тубоовариальный абсцесс ВЗОМТ Дисфункция фаллопиевых труб Непреднамерен ное бесплодие Реккурентное ВЗОМТ (25%) Тазовые спайки Диспареуния 17
Осложнения беременности при урогенитальном хламидиозе 13%; Ø Самопроизвольные выкидыши – 10%; Ø Преждевременные роды – Ø Несвоевременное излитие околоплодных вод – 32%; 8%. Ø Мертворождение – 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 18
• НГУ, ПГУ • Конъюнктивит • Субклиническая генитальная инфекция • Эпидидимит • Синдром • Рейтера сальпингит ? бесплодие ? 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 19
• Социальные факторы. • Биологические особенности возбудителя; ВЫСОКАЯ РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ ОБУСЛОВЛЕНА: 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 20
Отличительные особенности хламидий Размеры хл. клетки таковы, что она занимает промежуточное положение между бактериями и вирусами; Ø Хламидии не являются нормальными представителями микрофлоры человека. Их обнаружение указывает на инфекционный процесс. Ø Более длительный, чем при других инфекциях, латентный период между моментом инфицирования и появлением клинической симптоматики. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 21
Адаптационные механизмы C. trachomatis Устойчивость к системе комплемента (подавление белков каскада С 3 а и С 5 а). Ø Возможность развития антибиотикоустойчивости. Ø Способность к L- трансформации и персистенции, в том числе и при воздействии низких доз ИФ-гамма. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 22
Адаптационные механизмы C. trachomatis LPS и МОМР, позволяют хламидии существовать как внутриклеточный паразит не будучи уничтоженной в фаголизосоме. Ø Устойчивость клеточной стенки ЭТ за счёт МОМР и omp 2 к воздействию NO, О 2 -, ОNООØ Способность к генетической и белковой мимикрии (Hsp 60). Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 23
Варианты развития C. trachomatis 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 24
Факторы, вызывающие персистенцию Дефицит питательных веществ Все 13 аминокислот, за исключением валина Антимикробные агенты Пенициллин, Ампициллин, D-циклосерин, хлорамфеникол, хлортетрациклин, сульфаниламиды Иф-γ, фактор некроза опухолей-⍺ , макрофаги и т. д. Факторы иммунной системы Другие потенциальные факторы 2/10/2018 Циклические нуклеотиды, ионы кальция, гормоны В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 25
Иммунная система при хламидиозе В иммунной реакции задействованы клеточный (неспецифический) и гуморальный (специфический) ответ. Ø Сами факторы иммунной защиты (ИФ-γ, ФНО-α) могут приводить к персистентной форме хламидийной инфекции. Ø Длительная персистенция и генетическая предрасположенность могут приводить к образованию аутоантител (c-hsp 60 –> h-hsp 60) Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 26
Клеточный иммунитет (КИ) КИ запускается при взаимодействии с LPS-хламидий. Ø Ведущая роль отводится ИФ-γ, который в больших концентрациях уничтожает хламидий, а в малых – переводит в персистирующее состояние. Ø Эффективно КИ «работает» при наличии специфических антител, опсонизирующих возбудитель. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 27
Гуморальный иммунитет Успешная элиминация возбудителя осуществляется при опсонизации возбудителя специфическими иммуноглобулинами. Ø У большинства пациентов иммунитет нестерильный, иммунологическая память не задействована; Ø При эрадикации возбудителя, негативация уровня антител происходит приблизительно через год у ~ 90% заболевших. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 28
Выводы: Таким образом, хламидийная клетка чрезвычайно приспособлена для внутри клеточного выживания с минимальным «узнаванием» со стороны хозяина. Антитела к микроорганизму часто вырабатываются в невысоких титрах! Ø Проблема диагностики – проблема выявления сывороток с невысокими сигналами, усиление сигнала за счёт выявления антител к нескольким антигенным детерминантам (MOMP, Pgp 3, Hsp 60) Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 29
Задачи дифференциальной диагностики Ø Существует ли возможность провести диф. диагностику стадий инфекционного процесса: острой, хронической и персистентного состояния? Ø ДА! Если использовать различные антигенные маркёры C. trachomatis. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 30
Антигенные структуры хламидийной клетки LPS - липополисахарид MOMP - главный белок наружной мембраны OMP 2 - белок наружной мембраны HSP 60 - белок теплового шока 60 HSP 70 - белок теплового шока 70 OMP - белок наружной мембраны CBP - клеточный связывающий белок DNA - ДНК Plasmid- плазмида, pgp 3 плазмидный белок 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 31
Главный белок наружной мембраны - MOMP- трансмембранный белок, составляет 60 % от всех белков наружной мембраны. Ø Обеспечивает жёсткость, гидрофобность и устойчивость к осмотическому давлению наружной мембраны в состоянии ЭТ. Ø Активно экспрессируется в геноме и экспонируется на мембране на острой и хронической стадии заболевания. Ø Антитела к MOMPобразуются примерно через 1 месяц от начала заболевания. Ø 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 32
Pgp 3 C. trachomatis • Pgp 3 – мембрано-ассоциированный , иммунозначимый белок, кодируется общей плазмидой, присутствует только у штаммов и клинических изолятов C. trachomatis; • Антитела к Pgp 3 присутствуют у пациентов с урогенитальным хламидиозом и отсутствуют у здоровых доноров (Comanducci M. 2003); • Комбинация MOMP и Pgp 3 в ИФА позволяет улучшить чувствительность и специфичность диагностических наборов ( Bas S. 2001). 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 33
Hsp 60 C. trachomatis • Hsp 60 C. trachomatis (c-Hsp 60) имеет 50% гомологию с Hsp 60 человека (h-Hsp 60) • H-hsp 60 один из первых белков, синтезируемых во время беременности клетками зародыша на стадии морулы, а также продуцируется эпителиальными клетками децидуальной оболочки • Выявление и лечение хламидийной инфекции приводит к предотвращению развития аутоантител к h -Hsp 60. 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 34
Neuer A. , Rosenwaks. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор В. н. с. Z. , Witkin S. , et al 1998, 2000 2/10/2018 -Бест" 35
Влияние антител к hsp 60 на развитие эмбрионов мыши на 3 день развития Neuer A. , Rosenwaks Z. , Witkin S. , et al 1998, 2000 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 36
СЕФ(сканирующая электронная фотография) нормальной слизистой эпителия Фаллопиевых труб человека (A. Baczynska et al. 2007, “Human Reproduction”) 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 37
Повреждения эпителия Фаллопиевых труб человека вызванные C. trachomatis. (СЭФ) (A. Baczynska et al. 2007, “Human Reproduction”) 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 38
Практические выводы • Своевременное выявление и лечение хламидийной инфекции для предотвращения появления аутоантител к h-Hsp 60. • Выявление антител к C. trachomatis указывает на наличие этого микроорганизма. Наличие антител к c-Hsp 60 свидетельствует о хламидийной инфекции в фаллопиевых трубах (вплоть до окклюзии)(Steven S. Witkin 2002). 2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 39
Pgp 3 Hsp 60 MOMP C. tr. 40
2/10/2018 В. н. с. Кротова В. А. ЛБИ, ЗАО "Вектор -Бест" 41
