1995 МЕЖДУНАРОДНАЯ РАБОЧАЯ ГРУППА ВОЗ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ МЕТОДОВ ГЕНОМНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ КРОВИ И ЕЕ ПРОДУКТОВ НА ВИРУСНУЮ И БАКТЕРИАЛЬНУЮ БЕЗОПАСНОСТЬ WHO INTERNATIONAL WORKING GROUP ON THE STANDARTIZATION OF GENOMIC AMPLIFICATION TECHNOLOGIES FOR THE VIROLOGICAL SAFETY TESTING OF BLOOD AND BLOOD PRODUCTS (So. GAT) NAT – NUCLEIC ACIDS AMPLIFICATION TECHNOLOGY
Концентрации вирусов в международных NAT-стандартах ВОЗ 1)HIV-1 100 000 МЕ/мл 2)HCV 100 000 МЕ/мл 3)HBV 1 000 МЕ/мл 4)B 19 1 000 МЕ/мл 5)HAV 100 000 МЕ/мл
НОВОЕ НАЗВАНИЕ So. GAT Standartization of qualitative and quantitative nucleic acids tests to contribute to the safety of blood, tissues and organs with regard to blood borne pathogens
НОВЫЕ ЦЕЛИ So. GAT (обсуждены и одобрены участниками 16 -ой конференции So. GAT 1 -3. 07. 2003) 1. Международные стандарты на все патогены; 2. Международное сотрудничество по воспроизводимости; 3. Обмен информацией по научным и техническим аспектам в контролирующих организациях, академических лабораториях, производствах препаратов крови и диагностических наборов, диагностических лабораториях, банках крови; 4. Новые поколения реагентов и стандартов; 5. Стандарты для тестирования новых патогенов; 6. Мультиплексное тестирование и микрочипы; 7. Корреляция между концентрацией нуклеиновых кислот и инфекционностью; 8. Методы для оценки уменьшения патогенов.
Калибровка национального NATстандарта на HCV по международному ВОЗ-стандарту 98/790 и Италии (Karen Cristiano, So. GAT XV, 2002, Афины) Mean log 10 IU/ml=4. 93 Mean log 10 IU/ml=3, 66 Istituto Superiore di Sanita, 2002
Определение лимита детекции HCV-RNA в национальном Центре крови Италии при помощи рабочего NATстандарта на HCV с титром 1698 МЕ/мм для 4 способов экстракции РНК Экстракция Амплификация нуклеиновых (тест-система) кислот Лимит детекции Qiagen Roche 1. 0 85 ME/мл (534 г экв/мл) Organon Roche 1. 0 42 ME/мл (267 г экв/мл) In house Roche 1. 0 17 ME/мл (107 г экв/мл) Roche 2. 0 7, 9 ME/мл (50 г экв/мл) M. Testi et. al, VI Eur. Congr. of ISBT. May 9 -13, 1999, p. 73
Остаточный риск (число инфицированных донаций на миллион) трансфузионной передачи ВГС, ВИЧ-1 и ВГВ после скринирования крови или плазмы Остаточный риск Вирус До введения NAT После введения NAT Плазма Цельная кровь ВГС 33 -36 10 не определялось 1. 6 -3. 2 ВИЧ-1 1. 5 2 не определялось 1. 3 -1. 4 ВГВ 19 -256 6. 3 -15 не определялось 6. 7 Из статьи Tabor E. and Epstein J. C. NAT screening of blood and plasma donations: evolution of technology and regulatory policy. – Transfusion 2002, v. 42, p. 1230 -1236.
NAT в национальной службе крови Англии Roger Eglin, XVI So. GAT, 03. 07. 2003
Преимущество технологиии минипул-генотестирования для вируса гепетита В по сравнению с иммунохемилюминесцентным* определением Hbs. Ag Minegishi et al Japanese Red Cross Vox sang 2003 84: 287 W. H. Gerlich, XVI So. GAT, 03. 07. 2003, PEI • >11 million donations tested in pools of 50 • Prescreened with RPHA for HBs. Ag* and high anti-HBc • 181 HBV DNA positive donations found (early phase) ---------------------------copies/m. L** N HBs. Ag* neg. <100 14 13 100 – 1000 28 24 1000 - 104 59 26 >104 80 6 total 181 76 ---------------------------*Abbotts Prism *ca 13500 positive **Taqman
Sixth Engelhardt conference on molecular biology, 2003 Diagnosis of Viral Hepatitis in the Blood Transfusion Services: NAT or NOT? Howard A. Fields. , Ph. D. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) NAT or NOT? Are We Going to Live in a NAT World? It Depends: For resource-adequate regions: YES For resource-challenged regions: NAT NOT YET
NAT в отличие от ИФА является прямым и количественным методом и позволяет концентрировать патогены путем: 1. связывания моноклональными антителами 2. гибридизационного захвата 3. фильтрации 4. центрифугирования 5. увеличения объема материала для экстракции ДНК или РНК 6. использования многокопийных генов, например, гена 16 S р. РНК
Материал для NAT-тестирования может храниться: 1. в лизирующем растворе 2. высушенном состоянии (на фильтровальной бумаге) 3. в замороженном состоянии NAT позволяет определять: 1. концентрацию патогена в крови 2. генотип патогена (штамм) 3. возможно мультиплексное тестирование нескольких патогенов
Скачать презентацию 1995 МЕЖДУНАРОДНАЯ РАБОЧАЯ ГРУППА ВОЗ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ МЕТОДОВ
361748f431f88b6555fd18c1fe381b46.ppt