Выживание клеток и способы его оценки принципы, методические подходы
В настоящее время цитометрию принято подразделять на проточную и статическую. Первый вариант цитометрии осуществляется с помощью специальных приборов - проточных цитометров и сортеров. Для статической цитометрии могут быть использованы конфокальные микроскопы, а также более простые системы анализа изображений, смонтированные на обычных люминесцентных микроскопах.
Проточная цитометрия или флоу - цитометрия метод оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов
Принцип метода Клеточная суспензия, предварительно меченная флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями, попадает в поток жидкости, проходящий через проточную ячейку
Иммуногистохимия- метод идентификации и определения локализации в клетке и тканях структур, имеющих антигенные свойства, основанный на реакции антиген- антитело
Положительная реакция с антителами к лизоциму Положительная реакция с антителами к CD 4+ Тлимфоцитов
Вид исследования: гистологический анализ Что позволяет оценить метод: оценивает экспрессию белка Вид результата: качественный субъективный тест Оборудование для детекции результата: световой микроскоп
Антиген- любое вещество, которое при попадании в ткани восприимчивого организма вызывает иммунный ответ, в результате которого формируются специфические антитела, которые затем связываются с данным веществом
Антитела – белки плазмы крови (иммуноглобулины, Ig)
Схема прямого метода
Схема непрямого метода
Моноклональные антитела методика получения
Поликлональные антитела методика получения
Гистохимия
Оценка состояния клеточной культуры: подсчёт общего количества клеток, а также выявление в их числе мертвых и живых клеток
Для этих целей существует простой метод подсчета клеток в гемоцитометре (камере Горяева)
Подсчет живых клеток в гемоцитометре (по R. L. P. Adams) Подсчитывают количество клеток в четырех больших квадратах в углах каждой из двух заштрихованных областей.
Одним из преимуществ клеточной культуры перед другими объектами исследования является возможность продолжительного наблюдения за жизнедеятельностью клеток
методы избирательного окрашивания структурных компонентов клетки Окрашенные митохондрии в культивируемых фибробластах (краситель Родамин 123). Флюорисцентная микрография
Скачать презентацию Выживание клеток и способы его оценки принципы методические
В.В.В.нано.ppt