Возбудитель бруцеллеза Выполнил студент ФВМ 3 курса 18 группы Генералов Е.
История изучения § Бруцеллез был известен еще древним египтянам и грекам, в IV веке до н. э. Гиппократ описал клиническую картину бруцеллеза. § Небольшой остров Мальта в Средиземном море дал свое имя этой опасной болезни животных и людей. Мальтийская лихорадка с 1886 г. стала именоваться бруцеллезом по имени английского бактериолога Д. Брюса, открывшего на Мальте возбудителя этой болезни. Дальнейшая история изучения бруцеллеза тесно связана с открытием, сделанным на том же острове в 1904 -1907 гг. Исследователи обнаружили, что в молоке местных коз содержатся возбудители бруцеллеза. С этого момента стало ясно, что бруцеллез - это болезнь животных и людей и что животные служат резервуаром инфекции.
Бруцеллез § Бруцеллез - высококонтагиозная хронически протекающая инфекционная болезнь животных и людей, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечении, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства, вызванная различными формами бруцелл. § Наибольшее эпизоотологическое и эпидемиологическое значение имеют возбудители козье-овечьего бруцеллеза, бруцеллеза крупного рогатого скота, бруцеллеза свиней. Возбудители одного вида болезни способны мигрировать на животных других видов. § В настоящее время бруцеллез животных - наиболее значимая угроза для здоровья людей из-за трудностей его полной ликвидации. Борьба с бруцеллезом животных требует высокого уровня организации мероприятий и материальных затрат. Опасность бруцеллеза для потребителей продукции, а особенно контингента лиц, причастных к животноводству, предполагает надежную систему мер защиты.
Бруцеллез - хроническая инфекционная болезнь всех млекопитающих Возбудителем бруцеллеза выступают мелкие бактерии рода Brucella, относящиеся к различным видам. Род Brucella представляет собой компактную, достаточно обособленную генетическую группу.
Корова при бруцеллезе
Род Brucella по систематике Берги относится к родам с неясным систематическим положением. Род включает шесть видов: Br. melitensis, Br. abortus, Br. suis, Br. ovis, Br. neotomae и Br. canis, которые различаются, в основном, по культуральным и биохимическим свойствам. Br. abortus
Br. melitensis Br. abortus
Br. ovis Br. suis
§ ПУТИ ЗАРАЖЕНИЯ ЖИВОТНЫХ БРУЦЕЛЛЕЗОМ § § § § Пути заражения Алиментарный Аэрогенный Контактный -половой - через кожу (при нарушении целостности кожного покрова) - через слизистые оболочки § Болеют животные разных видов, прежде всего мелкий и крупный рогатый скот, являются главным резервуаром и источником инфекции. Вместе с тем очаги бруцелл сохраняются в дикой фауне (прежде всего копытные животные, зайцеобразные, грызуны). Животные, зараженные бруцеллезом, выделяют возбудителя с молоком, мочой, калом, околоплодной жидкостью в течение всего периода болезни. Особую опасность относительно выделения бруцелл во внешнюю среду представляют плод и плацента абортирующих животных, больных бруцеллезом. § К бруцеллезу восприимчивы все собаки, независимо от породы, пола и возраста. Отмечена более выраженная чувствительность у самок в период беременности.
§ РАСПРОСТРАНЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ § Человек заражается бруцеллезом обычно через загрязненные возбудителем сырое молоко и молочные продукты, мясо, шерсть, кожу, плаценту и выделения больных животных, а также загрязненные возбудителем руки. § Естественная восприимчивость людей высокая, не определяется полом или возрастом, но зависит от видовой принадлежности возбудителя. В очагах бруцеллеза коровьего вида из двадцати заразившихся заболевает один, тогда как в очагах козье-овечьего бруцеллеза заболевает каждый заразившийся. § Бруцеллез распространен на всех континентах с преимущественной заболеваемостью в странах с развитым животноводством. Эпидемиологические особенности заболеваемости в значительной мере зависят от видовой принадлежности возбудителя, активности и массивности эпизоотического очага. В очагах бруцеллеза козье-овечьего вида нередки групповые заболевания. В таких очагах характерны два сезонных подъема заболеваемости людей: первый приходится на январь - март и связан с периодом массового ягнения, второй - на май, когда проводятся стрижка овец и упаковка шерсти, инфицированной послеродовыми выделениями; в районах, где употребляют в пищу овечью брынзу, отмечают еще третий подъем - в летне -осенний период, причем часто заболевают горожане. В очагах коровьего бруцеллеза преобладают спорадические заболевания, чаще всего обусловленные повторным инфицированием и возникающие до октября ноября, что связано с продолжительностью периода лактации и длительностью инкубационного периода. Заболевают бруцеллезом в основном лица, в силу своей профессии занимающиеся уходом за животными или употребляющие в пищу инфицированные продукты животноводства. Среди заболевших преобладают взрослые, но в неблагоприятных районах нередко заболевают и дети.
Культуральные свойства § МППГГА, МППГГБ, ПГГА, Эритроцитный агар, сывороточно-декстрозный агар, картофельный агар. § § § рост на жидких средах S-помутнение среды нежный осадок. S-форма выпуклые, бесцветные. зернистая. диаметр 2 мм R-прозрачный, крошковидный R-форма шероховатая,
Культуральные свойства возбудителя бруцеллеза
Строение клетки бруцелл § § § Строение бруцелл типично для большинства грамотрицательных бактерий. В полной мере это относится и к наиболее активной в иммунологическом отношении клеточной стенке Стенка микробной клетки состоит из трех основных для этих бактерий' слоев: цитоплазматической мембраны клетки, пептидогликанового слоя, создающего жесткий остов, и наружной мембраны. Считается, что болезнь вызывает возбудитель, который существует в двух основных формах - гладкой S-форме и шероховатой R-форме. Они различаются между собой по строению клеток и характеру метаболизма. Главным же антигенным отличием является отсутствие у Rвариантов полисахаридной цепи Sэндотоксина, где антигенными детерминантами, определяющими бруцеллезную специфичность, являются структуры алъфа-2 -маннопиранозы. Некоторые виды бруцелл (Br. melitensis, Br. abortus, Br. suis) изначально Br. melitensis, Br. abortus, Br. suis) находятся в S-форме, но при различных неблагоприятных условиях или при паразитировании в нетипичном хозяине могут легко диссоциировать в R-форму. В соответствующих благоприятных условиях они снова реверсируют в S- форму. (Переход бруцелл из S-формы в R носит название диссоциации, а из R в S-реверсии).
Устойчивость § Бруцеллы относятся к микроорганизмам, которые мало устойчивы к неблагоприятным факторам внешней среды. Нагревание до 60 °С убивает их за 30 -40 минут, 80 °С - за 5 минут, кипячение - моментально. Они неустойчивы к фенолу, спирту, формалину, хлорамину и другим дезинфицирующим веществам. Хлорная известь (25% активного хлора), лизол, креолин, хлорамин, карболовая кислота 2 - 3%-ной концентрации убивают бруцелл в течение 5 мин. § Устойчивы к низким температурам и во влажной среде. И воде они сохраняются до 10 - 16 дней, в брынзе - до 45 - 60, в моче коров - до 4, в навозе - до 120, в сухой почве - до 60, во влажной - до 72 дней, в шерсти и коже - до 3 - 4 месяцев. § В фекалиях, моче и других органических материалах при низкой температуре могут сохраняться до трех-четырех месяцев. Прямой солнечный свет действует на них губительно.
§ § § § § ПАТОГЕНЕЗ Хроническое течение болезни. 3 фазы развития -первичная латенция(адаптация)отсутствуют клинические признаки -генерализация – наблюдаются клинические признаки -вторичная латенция- отсутствуют клинические признаки, происходит активное выделение возбудителя в окружающую среду. Формы болезни латентная генитальная генерализованная
Механизм выживания бруцелл в макрофагах
Заражённые орган и животное
ДИАГНОСТИКА Для диагностики бруцеллеза используют бактериоскопию, бактериологический, биологический, серологический и аллергический методы.
Схема диагностики бруцеллеза
Патологический материал § В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками или желудок плода с содержимым, кусочки печени, селезенки, содержимое гигром, абсцессов, молоко; от убитых животных – лимфоузлы, кусочки паренхиматозных органов, костный мозг, матку, яичники, семенники, вымя; от баранов – семенники с придатками. На серологическое исследование направляют кровь или сыворотку крови и молоко.
Бактериологическое исследование § § Бактериоскопия. Мазки фиксируют на пламени, окрашивают по Граму и Козловскому. При микроскопии учитывают, что бруцеллы – мелкие, грамотрицательные бактерии, окрашивающиеся по Козловскому в красный цвет. Бактериологическое исследование. Посевы из патологического материала производят на ПГГБ, ПГГА, МППБ, МППГГА, картофельный агар. С целью подавления посторонней микрофлоры в среды можно добавлять генцианвиолет (1: 200 000) или кристаллвиолет (1: 100 000). При исследовании материала от крупного рогатого скота одну часть посевов инкубируют в атмосфере с содержанием 10 -15 % СО 2. Выделение культур В. ovis проводят на плотных или полужидких печеночно-сывороточном или печеночноаминопептидном агарах в атмосфере с 10 -15 % СО 2. Посевы помещают при температуре 37 -38 C и инкубируют 30 дней. Культуры бактерий, обладающие типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами, дающие положительную РА с позитивной сывороткой, относят к бруцеллам. Виды бруцелл дифференцируют по способности роста в отсутствие повышенной концентрации CO 2, выделению H 2 S, чувствительности к фагу Тб, бактериостатическому действию анилиновых красителей и агглютинации моноспецифическими сыворотками.
Биопроба § Проводят ее на морских свинках (не менее двух), сыворотка которых в разведении 1: 5 отрицательно реагирует в РА с бруцеллезным антигеном. На 15, 25 и 40 -й день после заражения берут кровь и сыворотку, исследуют в пробирочной РА в титрах от 1: 10 до 1: 80. Результат на бруцеллез считается положительным, если сыворотка реагирует в титре 1: 10 и выше. § Для выделения культуры свинок убивают и делают посевы из лимфоузлов, селезенки, печени и костного мозга.
Серологические методы § Для диагностики бруцеллеза животных применяют: § реакцию агглютинации в пробирках (РА), § реакцию связывания комплемента (РСК), § реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), § пластинчатую реакцию агглютинации с розбенгал антигеном (роз-бенгал проба, РБП) § кольцевую реакцию с молоком (КР).
Реакция агглютинации § РА ставят в объеме 1 мл с единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК и РДСК. Сыворотки крови овец, коз, буйволов, оленей и собак исследуют в разведениях 1: 25, 1: 50, 1: 100, 1: 200; крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов – 1: 50, 1: 100, 1: 200 и 1: 400. РА считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов, начиная с разведения 1: 100 (100 МЕ); овец, коз, буйволов, оленей и собак – с 1: 50 (50 МЕ) с оценкой не менее чем на 2 плюса. Сомнительной – при наличии агглютинации только в разведении 1: 50 (50 МЕ) с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и 1: 25 (25 МЕ) – с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на 2 плюса.
Реакция связывания комплемента (РСК) § РСК – специфический и высокочувствительный метод диагностики бруцеллеза животных. Ее показания более постоянны и длительней сохраняются: комплементсвязывающие антитела появляются позже, чем агглютинины. Эта реакция позволяет выявить большее количество больных в стадах с давней инфекцией. РСК применяют при диагностике бруцеллеза у вышеперечисленных животных, а также свиней.
РДСК § РДСК более чувствительный тест, чем РСК. При инфекционном эпидидимите баранов используют только РДСК с овисным антигеном. РСК и РДСК считают положительными при задержке гемолиза на 2 -4 плюса в одном или двух разведениях (1: 5 или 1: 10) и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена). Сомнительной – при задержке гемолиза с оценкой в один плюс.
Роз-бенгал-проба § РБП используют для исследования сывороток крови крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и оленей. Реакцию ставят при температуре 18 -30 C с бруцеллезным антигеном, окрашенным бенгальским розовым, на пластинках с лунками. При положительной реакции в течение 4 мин появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета.
Кольцевая реакция с молоком § КР ставят с цельным свежим или консервированным формалином молоком коров и антигеном – взвесью убитых бруцелл, окрашенных в синий цвет гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител происходит агрегация антигена, образовавшийся комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх, образуя четкое, окрашенное кольцо. Проводится реакция в уленгутовских пробирках, в которые вносят по 0, 05 мл антигена, добавляют 1 мл молока и содержимое тщательно смешивают. Реакция проходит при температуре 37 -38 C в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально и оценивают в плюсах: «+++» четко выраженное синее кольцо в верхней части молока, остальная часть молока белая, «++» - достаточно выраженное синее кольцо, столбик молока синеватого цвета. Пробы, давшие реакцию с оценкой 3 и 2 плюса, считают положительными. Эту реакцию рекомендуют для проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллезу крупного рогатого скота и молока на рынках.
РИФ § Для выявления бруцелл непосредственно в патологическом материале, а также в объектах внешней среды предложен прямой метод иммунофлюоресценции (РИФ), непрямой же метод позволяет обнаружить антитела в сыворотке крови больных, переболевших или привитых животных.
Аллергический метод § Для аллергической диагностики бруцеллеза овец, коз и свиней используют бруцеллин ВИЭВ, изготовляемый из неагглютиногенного и авирулентного штамма. B. abortus B-l. У овец и коз применяют пальцебральную пробу, свиньям препарат вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина развивается воспалительная реакция.
§ КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ § Бруцеллез у собак протекает обычно хронически и очень часто бессимтомно. В отдельных случаях при таком вялотекущем заболевании у кобелей могут развиваться поражения половых органов: эпидидимиты и орхиты с пролиферацией лимфогистиоцитарных элементов. В более тяжелых случаях разрушается паренхима простаты и семенных канальцев семенников и развивается асперматогенез. То есть животные становятся бесплодными. § У сук основные патологические реакции развиваются во время щенности. При этом собаки могут абортировать на 30 -50 день щенности или рождать мертвое потомство. После этого у них длительное время продолжаются воспалительные процессы в матке. Плодные воды и выделения из матки содержат огромные количества возбудителя и животное в этот период представляет собой опасный источник заражения и прежде всего для своих владельцев. § Кроме поражений половых органов у собак иногда могут наблюдаться увеличение лимфоузлов. Очень редко наблюдают лихорадку ремитирующего типа. В литературе встречаются описания артритов у собак при бруцеллезе.
§ ПРОФИЛАКТИКА § Несмотря на большое количество вакцин, предложенных для профилактики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных и человека, проблема специфической профилактики бруцеллеза у собак совершенно не разработана. Гипериммунные противобруцеллезные сыворотки признаны неэффективными и поэтому в настоящее время не выпускаются. § Таким образом, эффективных профилактических мероприятий при бруцеллезе собак не разработано. Особую осторожность при контакте со своими питомцами должны соблюдать владельцы больных собак.
Иммунитет § § § Механизмы иммунитета, которые обеспечивают специфическую невосприимчивость организма к бруцеллезу, пока не известны. Возможно, это какие-то особые, неизвестные пока типы реакций. Установлено, однако, что если бруцеллы могут нарушать бактерицидные процессы в макрофагах восприимчивых животных, то в таких же макрофагах, полученных от иммунизированных животных сделать этого возбудитель уже не в состоянии. В этом случае бруцеллы очень быстро погибают при фагоцитозе. В результате вакцинации организм животного приобретает повышенную устойчивость к последующему заражению, т. е. становится иммунным. Однако напряженность такого иммунитета невелика и доза возбудителя, на два порядка превышающая минимальную заражающую (ИД/100), легко прорывает иммунитет, создаваемый любой современной вакциной. Высказывалось даже мнение, что при бруцеллезе вообще нет специфического иммунитета. Вместе с тем, после проникновения возбудителя в организм уже на 5 -6 день могут быть зарегистрированы специфические антитела. В основном, антитела вырабатываются на бруцеллезные эндотоксины (липополисахариды) и направлены против S- или Rлипополисахариды) эндотоксинов. Таким образом, при воздействии бруцелл, у животных бруцелл, формируется иммунологическая невосприимчивость к бруцеллезу, хотя сила этой реакции (напряженность иммунитета) относительно невелика и повторное заражение не исключено.
Биопрепараты § Профилактические § 1. Вакцина из штамма В. abortus № 19, живая, лиофилизированная § 2. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабо агглютиногенного штамма № 82. § Диагностические § 1. Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК и РДСК § 2. Антиген для кольцевой реакции с молоком. § 3. Роз-бенгал-антиген § 4. Флуоресцирующая бруцеллезная сыворотка § 5. Позитивная бруцеллезная сыворотка § 6. Диагностический аллерген - бруцеллин
§ Литература § 1. Т. С. Костенко, В. Б. Родионова, Д. И. Скородумов «Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии» § 2. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней / Ред. В. И. Покровский. - Том 2. - Медицина: Москва, 1993. - С. 416 -432. 3. Руководство по инфекционным болезням/Ред. Покровский В. И. , Лобан К. М. - Москва: Медицина, 1986. - С. 414 -426. § 4. Вершилова ПА. , Чернышева М. И. , Князева М. И. Патогенез и иммунология бруцеллеза, Москва, Медицина, 1974.
Скачать презентацию Возбудитель бруцеллеза Выполнил студент ФВМ 3 курса 18
Бруцеллез3.ppt