Санитарно-микробиологическое исследование объектов окружающей среды 1. Задачи и принципы санитарномикробиологического исследования объектов окружающей среды. 2. Прямые методы оценки биологического загрязнения объектов патогенными микроорганизмами. 3. Косвенные критерии (показатели) оценки санитарного состояния среды 4. Группы санитарно-показательных микроорганизмов.
Задачи санитарно-микробиологических исследований: n гигиеническая и эпидемиологическая оценка объектов внешней среды по микробиологическим показателям; n разработка нормативных документов, определяющих соответствие микрофлоры исследуемых объектов гигиеническим требованиям; n разработка и экспертиза методов микробиологических исследований разнообразных объектов окружающей среды; n разработка рекомендаций по оздоровлению объектов внешней среды путём воздействия на их микрофлору и оценка эффективности проводимых мероприятий; n изучение закономерностей жизнедеятельности микрофлоры окружающей среды как в самих экосистемах, так и во взаимоотношениях с человеком; n раннее обнаружение патогенных микроорганизмов во внешней среде.
Объекты санитарно-микробиологических исследований: вода, воздух, почва, пищевые продукты, производственное оборудование, предметы быта, др. Принципы санитарно-микробиологических исследований: n правильное взятие проб, n проведение серийных анализов, n повторное взятие проб, n применение стандартных методов исследования, n использование одновременно комплекса тестов, n проведение оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов, n ответственность специалистов за точность обоснования выводов и заключений.
Методы определения санитарно-эпидемиологического состояния объектов окружающей среды Прямое обнаружение патогенных микроорганизмов во внешней среде Косвенная индикация возможного присутствия патогенов во внешней среде
Методы непосредственного обнаружения патогенных микроорганизмов: n микроскопия; n прямой посев исследуемого материала в селективные питательные среды; n предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления; n биопроба (обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных); n ускоренные методы: серологические, люминесцентно-серологические, радиоизотопный.
Трудности, возникающие при непосредственном обнаружении патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды: n непостоянство нахождения в окружающей среде; n невысокая концентрация в сравнении с непатогенными микроорганизмами, неравномерное распределение; n конкуренция с сапрофитной флорой при выделении на питательных средах; n изменчивость во внешней среде; n широкий диапазон исследований.
Критерии косвенной оценки санитарного состояния объектов окружающей среды Качественный Общее микробное число Количественные Концентрация санитарно-показательных микроорганизмов Титр Индекс Наиболее вероятное число (НВЧ)
Общее микробное число (ОМЧ) – количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАн. М), которые способны образовывать колонии на плотной питательной среде при температуре +30°С – +37°С в течение 24 часов (в расчете на 1 см 3 или 1 г субстрата). Методы определения: n Оптический метод прямого подсчёта бактерий под микроскопом (в счетных камерах Горяева). n Метод количественного посева проб исследуемого объекта или его разведений на питательные среды. n Бактериологический метод. n Измерение биомассы.
Требования к санитарно-показательным микроорганизмам: 1. Постоянное обитание в естественных полостях человека (животных), постоянное выделение в большом количестве во внешнюю среду. 2. Отсутствие другого природного резервуара, кроме организма человека и животных. 3. Длительность выживания и устойчивость во внешней среде не меньше, чем у патогенных микроорганизмов, выводимых из организма теми же путями; 4. Отсутствие размножения во внешней среде. 5. Отсутствие «двойников» и наличие достаточно типичных признаков для дифференциальной диагностики; 6. Относительно низкая изменчивость биологических свойств во внешней среде. 7. Наличие простых в исполнении и надёжных методов индикации.
Концентрация санитарно-показательных микроорганизмов: n Титр - наименьший объем исследуемого материала (в см 3 ) или весовое количество (в граммах), в котором еще обнаруживается хоть одна особь санитарно-показательного микроорганизма. n Индекс - количество особей санитарно-показательного микроорганизма, обнаруженного в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта (для воды, молока, других жидких продуктов в 1 дм 3, для почвы и пищевых продуктов - в 1 г). n Наиболее вероятное число (НВЧ) - доверительные границы, в пределах которых может колебаться индекс с вероятностью 95%. (для жидких субстратов) (для почвы и пищевых продуктов)
Группировка санитарно-показательных микроорганизмов 1 -я группа индикаторы фекального загрязнения – представители микрофлоры кишечника человека и животных 2 -я группа 3 -я группа индикаторы воздушно-капельного загрязнения – комменсалы верхних дыхательных путей индикаторы процессов самоочищения – обитатели внешней среды
1 -я группа: n бактерии группы кишечных палочек (БГКП) (р. р. Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Klebsiella); n сульфитредуцирующие клостридии (Clostridium perfringens); n энтерококки (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium); n кишечные бактериофаги; n бактерии группы протея (Proteus vulgaris); n грибы рода Candida.
2 -я группа: n стрептококки (р. Streptococcus); n стафилококки (р. Staphylococcus). 3 -я группа: n n n термофилы; аммонификаторы и нитрификаторы; грибы и актиномицеты; Необходимо помнить: протеолиты; О массивности свежего фекального загрязн судят по количеству БГКП и энтерококк целлюлозобактерии. О давности фекального загрязнения судя соотношению БГКП, энтерококков и клостр О характере загрязнения судят по соотнош фекальных бактерий и термофилов.
Бактерии группы кишечных палочек: n представители родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Serratia, Klebsiella; n короткие палочки, не образующие спор; n грамотрицательны; n оксидазоотрицательны; n сбраживают глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37± 0, 5 °С в течение 24 -48 ч. n характер роста на среде Эндо (лактозный тест) – колонии темно-красные с металлическим блеском (или без него);
Е. coli — показатель свежего фекального загрязнения n Палочки 0, 5 -1 мкм. n По всей поверхности клетки расположены жгутики. n Спор не образуют. n Некоторые штаммы образуют капсулу. n Г (-) n Оксидазонегативны. n Факультативные анаэробы. n Температурный оптимум - +37°С. n Оптимум р. Н - 7, 2 -7, 8.
n На плотных средах (МПА) - слегка выпуклые, мутные, слегка желтоватые колонии. n На среде Эндо - темно-красные, малиновые колонии с металлическим блеском (лактозоположительные штаммы). n Ферментируют лактозу при температуре 44± 0, 5°С в течение 24 ч. и не растут на средах с цитратом. n Хорошо сохраняются во внешней среде: при температуре 60°С погибают в течение 15 мин; 1 % раствор лизола или 5 % раствор хлорамина убивает через 10 -15 мин.
Недостатки кишечной палочки как санитарнопоказательного микроорганизма: n Обилие аналогов во внешней среде. n Изменчивость во внешней среде. n Недостаточная устойчивость к неблагоприятным воздействиям. n Недостаточно длительное выживание в продуктах по сравнению с шигеллами, сальмонеллами, энтеровирусами. n Способность к размножению в воде. n Нечёткий индикатор даже в отношении присутствия сальмонелл.
Clostridium perfringens (сульфитредуцирующие клостридии) n Палочки полиморфные, крупные (1 -1, 5 x 4 -8 мкм) с обрубленными концами. n В организме человека образуют капсулу. n Образуют овальные или круглые споры более крупного диаметра, чем клетка. n Г (+), в старой культуре - Г (-). n Оксидазонегативны. n Облигатные анаэробы. n Растут на мясных питательных средах с добавлением сахаров. n Температурный оптимум - +37°С. n Оптимум р. Н - 7, 0 -7, 4. n редуцируют сульфит натрия на железо-сульфитном агаре (среда Вильсона-Блера) при температуре +44 С в течение 16 -18 часов.
Характеристики Clostridium perfringens как санитарнопоказательного микроорганизма: n не постоянно обнаруживается в кишечнике человека; n длительно сохраняется во внешней среде за счёт спорообразования, поэтому о свежем фекальном загрязнении свидетельствует обнаружение вегетативных форм, а о давнем – обнаружение спор; n на эти бактерии губительно действует сопутствующая микрофлора; n споры устойчивы к концентрациям активного хлора 1, 2 - 1, 7 мг/дм 3 воды; n для прорастания спор необходим температурный шок (прогревание при температуре +75 °С в течение 15 -20 мин с последующим быстрым охлаждением после посева в питательную среду). n Определение п е р ф р и н г е н с-титра рекомендовано для пищевых продуктов; при текущем санитарном надзоре за состоянием почв, лечебных грязей, воды открытых водоемов.
Энтерококки (р. Enterococcus) n Клетки полиморфные: в мазках круглые, овальные, ланцетовидные: располагаются парами, небольшими скоплениями. n Спор не образуют. n Иногда синтезируют капсулу. n Г (+) n Факультативные анаэробы. n Оптимум р. Н - 9, 6, (диапазон устойчивости р. Н 3 – 12). n Растут при +10°С и +60°С, что позволяет применять его как показатель качества пастеризации. n Устойчивы к концентрации поваренной соли 6, 5 % – 17% , желчи – 10 % – 40%. n Долго выживают в почве. Устойчивы к высушиванию, свету, низкой температуре.
Преимущества Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium как санитарно-показательных микроорганизмов: n постоянно находятся в кишечнике человека и постоянно выделяются во внешнюю среду. При этом Е. faecalis в основном обитает в кишечнике человека, поэтому обнаружение его свидетельствует о загрязнении фекалиями людей. E. faecium в основном обнаруживается в кишечнике животных. n Не способны размножаться во внешней среде. n Не изменяют своих свойств во внешней среде. n Не имеют аналогов во внешней среде. n Устойчивы к неблагоприятным воздействиям внешней среды. n Для индикации энтерококков разработаны высокоселективные среды. Обнаружение энтерококков всегда свидетельствует о свежем фекальном загрязнении почвы, каковы бы ни были остальные показатели.
Необходимо помнить: n О массивности свежего фекального загрязнения судят по количеству БГКП и энтерококков. n О давности фекального загрязнения судят по соотношению БГКП, энтерококков и клостридий. n О характере загрязнения судят по соотношению фекальных бактерий и термофилов.
Скачать презентацию Санитарно-микробиологическое исследование объектов окружающей среды 1 Задачи и
Сан_микр_иссл.ppt