Регенерация тканей.pptx
- Количество слайдов: 147
Регенерация тканей
ПЛАН • Понятие о регенерации. Виды регенерации. • Принципы регенерации. • Особенности регенерации разных тканей организма. • Механизмы гибели клеток. • Методы определения живых и мёртвых клеток в ткани и определение форм гибели клеток.
• Регенерация является универсальным свойством всех живых организмов, так всем клеткам и тканям свойственно восстановление. Считают, что ткани низших животных обладают большей регенерационной способностью, чем ткани высокоорганизованных форм. Например, такие беспозвоночные, как губки, гидроидные полипы, многие виды плоских, ленточных и кольчатых червей, мшанок, иглокожих и оболочников способны к регенерации значительной части тела из небольшого фрагмента.
• Регенерационная способность ограничивается: у них возможна регенерация только отдельных органов. • Например, у речных раков могут регенерировать клешни, у тараканов в процессе их линьки ‒ конечности. У хвостатых амфибий ‒ тритонов, аксолотлей, саламандр к регенерации способны конечности, хвосты, плавники, жабры, глаза и другие органы. • У высших позвоночных ‒ млекопитающих и человека способность к регенерации органов, таких, как конечности, пальцы, глаза, уши и другие, крайне ограничена: после ампутации этих органов возникает только рубец и культя заживает.
• В онтогенезе наблюдается снижение регенерации, повторяя в какой то мере эволюционную закономерность
Регенерация – универсальное свойство • Ткани низших животных обладают большей регенерационной способностью, чем ткани высокоорганизованных форм, но это не абсолютно и ошибочно! • Например, круглые черви и коловратки, практически не способны к регенерации, а у более высокоорганизованных ракообразных и амфибий эта способность хорошо выражена.
• Некоторые близкородственные виды животных различаются регенерационными способностями. Так, у многих видов дождевых червей только из передней половины тела может полностью регенерировать новая особь, тогда как пиявки не способны восстановить даже отдельные утраченные органы. • У хвостатых амфибий на месте ампутированной конечности образуется новая, а у бесхвостых культя просто заживает и ее регенерации не наблюдается.
Бластотема –скопление клеток прогениторов различных тканей, из которых образуются специфические ткани.
• Нет также чёткой связи между характером эмбрионального развития и способностью к регенерации. • Так, у некоторых животных со строго детерминированным развитием (гребневики, полихеты) во взрослом состоянии регенерация развита хорошо (целая особь может восстановиться из небольшого участка тела), а у некоторых животных с регулятивным развитием (морские ежи, млекопитающие) ‒ достаточно слабо.
• по мере повышения организации в процессе эволюции и в процессе онтогенеза происходит, с одной стороны, усложнение организации, усовершенствование строения и функции животных, с другой — утрата ими приспособления ‒ высокой способности к регенерации органов. • Животные «расплачиваются» потерей способности к регенерации за приобретение ими высокой степени усовершенствования в их организации и функциях.
• Термин «регенерация» был предложен в 1712 году французским учёным Р. Реомюром, изучавшим егенерацию р конечностей речного рака. в процессе регенерации лежат закономерности, сходные с таковыми при нормальном развитии организма, то регенерация представляет собой явление повторного развития.
• Регенерация (от лат. regeneratio ‒ возрождение, возобновление) – это способность организмов восстанавливать дифференцированные гистологические элементы ткани, а иногда и целые органы, при их старении или повреждении.
• У большинства животных и человека выделяют • физиологическую (образование гистологических элементов ткани взамен стареющих в процессе жизнедеятельности) • репаративную (образование гистологических структур взамен удалённых или погибших при повреждении) регенерацию.
Физиологическая регенерация • встречается в самых различных органах и тканях, но в разной степени и форме; • принято подразделять клетки тканей животных и человека на три основные группы: • лабильные, • стабильные, • статические.
• К лабильной группе относят такие клетки, которые быстро и легко обновляются в процессе нормальной жизнедеятельности организма (например, клетки крови, эпителия слизистой желудочно кишечного тракта, эпидермиса и др. ).
• К стабильной группе относят клетки таких органов, как печень, поджелудочная железа, слюнные железы и др. Обладают ограниченной способностью к делению, которая проявляется обычно при повреждениях данного органа.
• К статическим относят клетки поперечнополосатой мышечной и нервной тканей.
• В процессе физиологической регенерации участвуют камбиальные клетки – малодифференцированные или неспециализированные, дающие начало постепенно дифференцирующимся или специализирующимся клеткам. Например, камбиальными клетками эпидермиса кожи являются клетки базального слоя.
• Под репаративной регенерацией понимают восстановление органов или тканей после их повреждения, например, ампутации или другого воздействий. • После повреждения всегда образуется очаг повреждения или рана, резко нарушается нормальное соотношение и состояние тканей в области раны. • Репаративная регенерация характеризуется совокупностью разных явлений: гипертрофией, рубцеванием, полиплоидией и другими.
Физиологическая Репаративная Патологическая происходит в течение происходит в случае повреждения клеток и тканей или части органов происходит при всей жизни и нарушениях типичная атипичная утраченная часть замещается механизмов характеризуется путём развития точно такой же структурой, которая количественно регенерации постоянным обновлением клеток, части. Например, у ящериц или качественно отличается от (нарушение волокнистых структур регененрирует часть хвоста и первоначальной структуры. иннервации основного вещества Например, у регенерировавшей кровоснабжения, ткани. Например, у конечности головастика число хроническое пальцев может быть меньше воспаление и т. д. ). человека обновляется исходного, а у креветки вместо Например, наружный слой кожи, у ампутированного глаза может гиперпродукция птиц – перья, у вырасти антенна. животных – шерсть и соединительной т. д. ткани с образованием келоида, избыточная регенерация периферических нервов и Полная регенерация или Неполная регенерация или избыточное реституция субституция образование возмещение дефекта тканью, дефект замещается соединительным костной мозоли при которая идентична погибшей. рубцом. Субституция характерна для срастании перелома Например, в собственно органов и тканей, в которых соединительной и костной преобладает внутриклеточная форма опухолеобразовани (гипо- или тканях, эпидермисе кожи и регенерации (например, сердечная е гиперрегенерация) слизистых оболочках путем мыщца, нервная ткань). деления клеток повреждённая часть ткани замещается тканью, идентичной погибшей.
• Регенерация — процесс; способность к регенерации — возможность протекания процесса. • Способность к регенерации может быть, а процесса регенерации может не последовать, если исключить какое то необходимое условие, например, денервировать орган или зашить рану кожей. • Отсутствие способности к регенерации не означает, что нельзя создать такие условия, при которых будет возможно получить процесс регенерации, восстановить утраченную регенерационную способность.
• Регенерационная способность у высших животных и, в частности, у человека характеризуется значительным разнообразием своих проявлений. • Внутренние органы млекопитающих и человека обладают способностью к регенерационной гипертрофии, при этом, например, печень в течение 3 4 недели после резекции 70% её паренхимы восстанавливает исходный вес и в полном объёме функциональную активность.
• В центральной нервной системе и миокарде структурное и функциональное восстановление ткани происходит за счёт увеличения количества органелл в сохранившихся клетках и их гипертрофии, т. е. регенерационная способность выражается только в форме внутриклеточной регенерации.
• Гипертрофией и гиперплазией называются компенсаторно приспособительные процессы, обусловленные повышенным функциональным стимулом, проявляющимся увеличением количества и величины структурных элементов ткани и усилением их функции. • Структурно функциональные изменения при гипертрофии и гиперплазии связаны с повышением интенсивности обмена веществ.
• Гипертрофия ‒ увеличение объема и массы органа, ткани, клеток. • Гиперплазия ‒ увеличение количества структурных элементов органа, тканей и клеток в результате их деления (пролиферации).
• Если увеличивается специализированная ткань органа, то развивается истинная гипертрофия или гиперплазия. • Увеличение органа за счёт соединительной, жировой ткани или объема полости определяется как ложная гипертрофия.
• При гипертрофии клеток происходит гиперплазия внутриклеточных органелл (ядрышек, ядер, митохондрий, рибосом, цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса, лизосом и др. ), а при гиперплазии клеток, тканей и органов отмечают отдельные гипертрофированные структурные элементы (например, полиплоидные клетки).
• При гипертрофии клеток происходит гиперплазия внутриклеточных органелл (ядрышек, ядер, митохондрий, рибосом, цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса, лизосом и др. ), а при гиперплазии клеток, тканей и органов отмечают отдельные гипертрофированные структурные элементы (например, полиплоидные клетки).
• В одних органах и тканях преобладает гипертрофия с внутриклеточной гиперплазией (миокард, скелетные мышцы, нервная ткань), в других гиперплазия клеток (костный мозг, лимфоузлы и селезенка, соединительная ткань, покровный эпителий кожи и слизистых оболочек) или сочетание гипертрофии с гиперплазией (печень, почки, легкие и др. ).
В зависимости от механизмов возникновения выделяют следующие виды гипертрофии: • рабочая гипертрофия, например гипертрофия скелетных мышц, развивающаяся при физической нагрузке, или гипертрофия миокарда ‒ при артериальной гипертензии; • заместительная (викарная) гипертрофия, возникающая в одном из парных органов при гибели или удалении части или всего другого органа (лёгкие, почки, надпочечники, семенники);
• корреляционная (нейрогуморальная) — возникает в одном из органов, входящих в единую физиологическую систему (например, гипертрофия молочной железы ‒ при удалении яичника или семенника, гипертрофия гипофиза — при удалении надпочечника, гипертрофия миокарда ‒ при длительном спазме артериальных сосудов и т. д. ); • регенераторная ‒ возникает в оставшейся части органа при частичном повреждении другой части (например, частичная гепатэктомия, спленэктомия, нефрэктомия);
• вакатная гипертрофия ‒ происходит разрастание опорной ткани (например, костной, хрящевой, жировой) при атрофии паренхимы органа (например, при атрофии мышц между мышечными волокнами разрастается жировая ткань, при атрофии мозга происходит утолщение костей черепа); • гипертрофические разрастания ‒ обычно возникают в тканях и органах при хроническом воспалении, например разрастание слизистых оболочек с образованием полипов (например, желудок, кишечник).
Физиологическая гипертрофия
Патологическая гипертрофия • Если причина, вызвавшая гипертрофию, действует, то нервно гормональная регуляция гипертрофированного органа ослабевает и истощается, в нем нарастают дистрофические, атрофические и склеротические изменения, наступает декомпенсация.
Патологические гипертрофические разрастания в органах и тканях, вызванные длительным раздражающим действием на них патогенных факторов, ещё более ослабляют и нарушают работу повреждённых органов.
• По механизму развития восстановление структуры и функции может происходить на молекулярном, субклеточном, тканевом и органном уровнях. • Самая древняя в эволюционном отношении и наиболее универсальная форма регенерации, свойственная всем без исключения живым организмам ‒ внутриклеточная регенерация.
• биохимическое обновление молекулярного состава клеток (молекулярная или биохимическая регенерация), • ядерного аппарата и цитоплазматических органелл (внутриорганоидная регенерация), • увеличение числа и размеров ядерного аппарата и цитоплазматических органелл (митохондрий, рибосом, пластического комплекса и др. ). миокард и нервные клетки
• Клеточная форма регенерации характеризуется делением клеток (пролиферацией). • Активность пролиферации клеток каждой ткани контролируется факторами роста, гормонами, цитокинами, кейлонами, характером функциональных нагрузок. • Клеточная форма регенерации присуща следующим органам и тканям: костная, кроветворная, рыхлая соединительная, эндотелий, мезотелий, слизистые желудочно кишечного тракта, мочеполовой системы, органов дыхания, кожа, лимфоидная ткань.
Влияние общих и местных условий, при которых протекает процесс регенерации, может приводить как к количественным, так и качественным его изменениям. • Регенерация скелетных мышц осуществляется за счет образования на концах сохранившихся волокон мышечных почек, деления миобластов и миосателлитоцитов, дифференцирующихся в мышечные волокна. • Важнейшим условием полноценной регенерации поврежденного нерва является соединение центрального его конца с периферическим.
• Регенерация осуществляется под воздействием различных регуляторных механизмов: • гуморальные (например, гормоны, фактор роста, кейлоны и др. ); • иммунологические (установлен факт переноса лимфоцитами «регенерационной информации» , стимулирующей пролиферативную активность клеток различных внутренних органов); • нервные и функциональные (дозированная функциональная нагрузка).
• Истощение, гиповитаминоз, нарушение иннервации и кровообращения, возраст, обмен веществ и другие оказывает влияние на ход репаративной регенерации, ингибируя её и переводя в патологическую.
Принципы регенерации • стадийность, которая характеризуется морфологическими особенностями: • эпителизация раневой поверхности органа; накопление гистологически недифференцированного регенерата; рост и дифференцировка регенерата. • Кроме этого, в процессе регенерации можно выделить следующие физиологические стадии, которые различаются по типу обмена веществ: • 1) стадия разрушения и дедифференцировки, которая биохимически характеризуется протеолизом, т. е. преобладанием распада белка над его синтезом, снижением нуклеинового обмена, гликолизом, снижением р. Н или активной реакции внутренней среды. В этот период в очаге повреждения происходит накопление гистологически недифференцированного материала; • 2) стадия роста и дифференцировки, которая биохимически характеризуется преобладанием синтеза белка над его распадом, повышением нуклеинового обмена, аэробным типом дыхания, увеличением р. Н.
• Сначала в повреждённый участок ткани врастают капилляры, идёт восстановление сосудистой системы и нормализация обмена веществ. • Поврежденные ткани фагоцитируются микро и макрофагами. • Затем в результате деления размножаются соединительнотканные клетки, и формируется грануляционная ткань, восстанавливаются нервные волокна и образуются тканеспецифические клетки.
Механизм регенерации очень сложен и недостаточно изучен. • Механизм регенерации разных тканей определяется наследственным аппаратом клеток. • Молекулы ДНК определяют возникновение молекул РНК, которые, в свою очередь, определяют синтез специфических белков при наличии определённых ферментов и условий среды.
• Для развития регенерационного процесса в клетках и тканях большую роль играют сдвиги в обмене веществ (например, гипоксия, повышенный гликолиз, ацидоз и др. ) в поврежденной ткани или органе, стимулирующие регенераторные процессы, например, понижение поверхностного натяжения мембран клеток и их миграцию, вход клеток в митотический цикл. Образующиеся при повреждении клеток нуклеотиды, ферменты, продукты распада белков, липидов и углеводов и другие наряду со стимулирующим влиянием эндокринной, нервной и иммунной системы могут быть повторно использованы для обеспечения регенераторных процессов.
Метаплазия
Теория резервных клеток • При регенерации у представителей ряда беспозвоночных были установлены особые малодифференцированные резервные клетки. • Например, у планарий и дождевых червей были обнаружены клетки индифферентного типа, подобные эмбриональным клеткам, которые получили название необластов.
• Камбиальные клетки ‒ это герминативные клетки, которые детерминированы Резервные клетки индифферентны, недетерминированы, способны к превращению в разнородные клеточные элементы. К резервным клеткам относят гемапоэтические и мезенхимальные стволовые клетки.
• Дифференцировку клеток связывают с процессом синтеза специфических белков клетки или ткани, например миозина в мышечной ткани или коллагена в соединительной ткани.
• Дедифференцировка сопровождается потерей клетками и тканями органа их специфических признаков (например, мышцами миофибрилл, хрящом основного вещества), упрощение организации, т. е. возврат их к более ранней стадии. • Дедифференцированные клетки приобретают признаки, характерные для клеток и тканей эмбрионального типа, они приобретают способность к активному размножению.
• У низших позвоночных регенерация может осуществляться и за счёт дедифференцировки. • Например, хрусталик у тритонов регенерируют из дифференцированных клеток радужной оболочки глаза, а сетчатка – из клеток пигментного эпителия. • Источником регенерации конечности у земноводныхявляются дедифференцированные клетки костной и мышечной тканей, а также клеточные элементы соединительной ткани, в том числе и крови.
• Т. Морган (1901 г. ) выделил два основных способа регенерации: морфаллаксис и эпиморфоз. • Морфаллаксис восстановление путем реорганизации, перестройки тканей, без клеточного деления. Морфаллаксис был установлен у гидр, планарий, асцидий и других животных. • Эпиморфоз ‒ это регенерация, происходящая путем роста тканей от раневой поверхности. Примерами эпиморфоза могут быть регенерация конечности или хвоста у тритонов и аксолотлей, регенерация скелетной мышцы при удалении её участка и другие. • Регенерация путём индукции, которая осуществляется при действии индуктора (например, белков, гормонов и других).
• в регенерации разных органов и тканей принимают участие как малодифференцированные, так и дифференцированные клеток • Например, регенерация костной ткани у всех позвоночных животных и человека обеспечивается мезенхимальными стволовыми клетками и остеогенными клетками предшественниками, а регенерация мышечной ткани – миосателлитоцитами и миобластами.
Регуляция регенерации
• Особенности регенерации разных тканей организма.
Тромбоциты и лейкоциты восстанавливаются в течение нескольких дней, эритроциты ‒ несколько дольше (до 2 2, 5 недель)
• при кровопотерях происходит путём усиления функции красного костного мозга губчатого вещества позвонков, грудной кости, рёбер и трубчатых костей, а также селезёнки, лимфоузлов и лимфоидных фолликулов миндалин, кишечника и других органов.
• при репаративной регенерации объём миелоидного кроветворения возрастает также за счёт превращения жировой ткани костного мозга в красный костный мозг. Жировые клетки вытесняются растущими островками кроветворной ткани, которая заполняет костномозговой канал. • Костный мозг может восстанавливаться даже при больших разрушениях.
• Очаги экстрамедуллярного (гетеротопического) кроветворения формируются в результате выселения из костного мозга стволовых клеток во многие органы и ткани (например, селезенку, печень, лимфатические узлы, слизистые оболочки, жировую клетчатку). Печень Окр. : гематоксилин эозин Очаг экстрамедуллярного крове творения
патологическая регенерация крови
• Костный мозг обладает очень высокими пластическими свойствами и может восстанавливаться даже при значительных повреждениях. • Лимфатические узлы хорошо регенерируют только в тех случаях, когда сохраняются связи приносящих и выносящих лимфатических сосудов с окружающей их соединительной тканью. • Селезенка при повреждении бывает, как правило, неполной, погибшая ткань замещается соединительнотканным рубцом (тип регенерационной гипертрофии).
Регенерация кровеносных и лимфатических сосудов протекает неоднозначно в зависимости от их диаметра. • Микрососуды обладают большей способностью регенерировать, чем крупные сосуды. Регенерация микрососудов может происходить путём аутогенно. При этом в стенке микрососудов появляются боковые выпячивания за счёт усиленно делящихся эндотелиальных клеток (ангиобластов). Образуются тяжи из эндотелия, в которых возникают просветы и в них поступает кровь или лимфа.
• Крупные сосуды не обладают достаточными пластическими свойствами. Поэтому при повреждении их стенки восстанавливаются лишь структуры внутренней оболочки, её эндотелиальная выстилка; элементы средней и наружной оболочек обычно замещаются соединительной тканью, что приводит к сужению или облитерации просвета сосуда.
• Физиологическая регенерация волокнистой соединительной ткани происходит путём деления мезенхимальных клеток, фибробластов, миофибробластов, адвентициальных клеток, тучных клеток, перицитов и эндотелиальных клеток микрососудов. • Из малодифференцированных клеток дифференцируются зрелые, активно синтезирующие коллаген и эластин фибробласты (коллагенобласты и эластобласты). • Фибробласты сначала синтезируют основное вещество соединительной ткани (гликозоаминогликаны), тропоколлаген и проэластин, а затем в межклеточном пространстве из них образуются ретикулярные (аргирофильные), коллагеновые и эластические волокна.
• • При репаративной регенерации соединительной ткани сначала образуется грануляционная ткань. Гранулы петли образованных тонкостенных сосудов. Между сосудами много недифференцированных лимфоцитоподобных клеток соединительной ткани, лейкоцитов, плазматических клеток и тучных клеток. Созреваниее грануляционной ткани, в основе которой лежит дифференцировка клеточных элементов, волокнистых структур, сосудов. В связи с синтезом фибробластами коллагена в межклеточных пространствах образуются аргирофильные, а затем и коллагеновые волокна. Синтез фибробластами гликозаминогликанов служит образованию основного вещества соединительной ткани. Созревание грануляционной ткани завершается образованием грубоволокнистой рубцовой ткани.
• Регенерация соединительной ткани происходит не только при её повреждении, но и при неполной регенерации других тканей, а также при инкапсуляции, заживлении ран, воспалении. • Воспаление, развивающееся в грануляционной ткани, приводит к задержке ее созревания, а чрезмерная синтетическая активность фибробластов к избыточному образованию коллагеновых волокон с последующим резко выраженным их гиалинозом. • В таких случаях возникает рубцовая ткань в виде опухолевидного образования в виде келоида. • Келоидные рубцы образуются после различных травматических поражений кожи, особенно после ожогов.
• Регенерация жировой ткани происходит за счет камбиальных жировых клеток ‒ липобластов и увеличения объема липоцитов с накоплением жира, а также за счет деления недифференцированных соединительнотканных клеток и превращения их по мере накопления липидов в цитоплазме в так называемые перстневидные клетки ‒ липоциты. • Жировые клетки образуют дольки, окруженные соединительнотканной стромой с сосудами и нервными элементами.
• Регенерация костной ткани происходит в результате размножения остеогенных клеток ‒ остеобластов в периосте и эндосте. • Репаративная регенерация при переломе костей определяется характером перелома, состоянием костных отломков, надкостницы и кровообращения в области повреждения.
• Патологическая регенерация костной ткани связана с общими и местными нарушениями восстановительного процесса, длительным расстройством кровообращения, отмиранием костных отломков, воспалением и нагноением ран. • деформации кости, появлению костных выростов (остеофитов и экзостозов), преимущественному образованию волокнистой и хрящевой ткани в связи с недостаточной дифференциацией костной ткани.
• Гладкие мышцы, клетки которых обладают способностью к митозу и амитозу, при незначительных дефектах могут регенерировать достаточно полно. • Значительные участки повреждения гладких мышц замещаются рубцом, при этом сохранившиеся мышечные волокна подвергаются гипертрофии. • Образование гладких мышечных волокон может происходить путем превращения (метаплазии) элементов соединительной ткани.
• Физиологическая регенерация многослойного плоского ороговевающего эпителия кожи происходит постоянно за счет деления клеток камбиального (мальпигиева) слоя. • При повреждении эпидермиса и стромы кожи клетки росткового слоя по краям раны делятся, располагаются на восстановленной мембране и строме органа и покрывают дефект (заживление раны под струпом и по первичному натяжению). • Однако вновь образованный эпителий утрачивает способность к полной дифференциации характерных для эпидермиса слоев, покрывает дефект более тонким пластом и не образует производных кожи: сальных и потовых желез, волосяного покрова (неполная регенерация).
• Неполная регенерация пищевода, желудка, кишечника, протоков желез и других трубчатых и полостных органов с образованием соединительнотканных рубцов может вызывать сужение (стеноз) и расширение их, появление односторонних выпячиваний (дивертикулов), спаек (синехий), неполное или полное зарощение (облитерация) органов (полости сердечной сумки, плевральной, брюшинной, суставных полостей, синовиальных сумок и т. д. ).
• Ганглиозные клетки головного и спинного мозга в течение жизни интенсивно обновляются на молекулярном и субклеточном уровнях, но не делятся. • При разрушении их происходит внутриклеточная компенсаторная регенерация (например, гиперплазия органелл) оставшихся клеток. • К компенсаторно приспособительным процессам в нервной ткани относится образование многоядрышковых, двухъядерных и гипертрофированных нервных клеток.
• Клеточная форма регенерации свойственна нейроглии. • Погибшие глиальные клетки и небольшие дефекты головного и спинного мозга, вегетативных ганглиев замещаются делящимися клетками нейроглии и соединительной ткани с образованием глиальных узелков и рубцов. • Нервные клетки вегетативной нервной системы восстанавливаются путем гиперплазии органелл, а также не исключается возможность их деления. • Периферические нервы полностью регенерируют при условии сохранения связи центрального отрезка нервного волокна с нейроном и незначительного расхождения перерезанных концов нерва. • При нарушении регенерации нервов (значительное расхождение частей перерезанного нерва, расстройство крово и лимфообращения, наличие воспалительного экссудата) образуется соединительнотканный рубец с неупорядоченным разветвлением в нем осевых цилиндров центрального отрезка нервного волокна.
Механизмы гибели клеток
• Регенерация в многоклеточном организме, гистогенез и функционирование тканей предполагают наличие баланса между клеточной пролиферацией, клеточной дифференцировкой и гибелью клеток. • Динамическое равновесие между процессами гибели клеток и физиологической регенерацией обеспечивает постоянство клеточных и тканевых популяций в организме.
Некроз • характеризуется разрывом цитоплазматической и внутриклеточных мембран, что приводит к разрушению органелл, высвобождению лизосомальных ферментов и выходу содержимого цитоплазмы в межклеточное пространство, при этом развивается воспалительный процесс.
Причины некроза • резкое падение содержания АТФ в клетках до такого уровня, который не совместим с их жизнью; • связывание белков с убихиноном, • Генерация активных форм кислорода, • нарушение кальциевого обмена, • потеря селективной проницаемости клеточных мембран. «Энергетическая катастрофа» может быть вызвана, например, токсинами или физическими повреждениями.
Убихинон состоит из 76 аминокислотных оснований, широко распространен во всех клетках эукариотов. • В присутствии АТФ формирует ковалентные связи с лизиновыми основаниями других белков. Синтез убихинона инициируется различными видами повреждений. Связываясь с белками, убихинон уменьшает длительность их жизни, вероятно, путем их частичной денатурации. при болезни Альцгеймера, Паркинсона, при алкогольном поражении печени (тельца Маллори) обнаруживаются цитоплазматические тельца, построенные из комплекса белков с убихиноном.
• Генерация активных форм кислорода происходит постоянно в клетках при гликолизе и связана с переносом одного электрона на молекулу кислорода. • При этом образуются синглетный кислород, супероксидный анион радикал, гидроксильный радикал, пероксид водорода и др. • Вступая во взаимодействия с липидами мембран, молекулами ДНК, вызывают оксидативный стресс, активные формы кислорода повышают проницаемость мембран, ингибируют катионные помпы, потенцируют дефицит АТФ и избыток внутриклеточного кальция, что приводит к развитию повреждения клеток и тканей. Наибольшую роль активные формы кислорода играют в патогенезе некроза пневмоцитов при дистресс синдроме, при инфаркте миокарда и некрозе гепатоцитов при передозировке парацетамола.
Некроз гепатоцитов на фоне приема парацетамола
• Нарушения кальциевого гомеостаза характеризуются накоплением внутриклеточного кальция в гибнущих клетках. • Инициальные изменения при повреждении обусловлены нарушением работы катионных помп в связи с дефицитом АТФ. • При этом кальций накапливается внутри клеток, прежде всего в митохондриях. • Происходит активация Са 2+ зависимых протеаз и фосфолипаз, что приводит к необратимым повреждениям мембран (митохондриальных, цитоплазматических), еще большим нарушениям их проницаемости и смерти клеток.
• Потеря селективной проницаемости цитоплазматических мембран является одним из характерных признаков некроза при воздействии комплемента, вирусных инфекциях и гипоксических повреждениях. • повреждение трансмембранных протеинов, рецепторов и ферментных систем, регулирующих прохождение в клетку определенных веществ. • При воздействии комплемента и перфоринов в цитоплазматическую мембрану в область липидного бислоя встраиваются протеиновые полимеразы. • Литические вирусы также взаимодействуют с липидами мембран, встраивают в них белки вирусных капсидов, что приводит к разрушению цитоплазматических мембран в момент выхода вируса из инфицированной клетки. • При ишемии нарушается располо жение трансмембранных белков с формированием характерных белковых «гипоксических» уплотнений.
• Некроз проходит ряд морфогенетических стадий: • паранекроз ‒ подобные некротическим, но обратимые изменения; • некробиоз ‒ необратимые дистрофические изменения, характеризующиеся преобладанием катаболических реакций над анаболическими; • гибель клетки – необратимое её повреждение; • аутолиз ‒ дегенерация «мертвого» субстрата под действием гидролитических ферментов погибших клеток и клеток воспалительного инфильтрата.
• Морфологическими признаками некроза являются: • 1) кариопикноз (сморщивание ядра), кариорексис (распад ядра на глыбки) и кариолизис (лизис ядер); • 2) набухание клеток и их мембранных органелл; • 3) неспецифическая компактизация хроматина; • 4) вакуолизация цитоплазмы; • 5) нарушение целостности плазматической мембраны; • 6) фрагментация фибрилл; • 7) образование в митохондриях агрегатов в виде отложения солей кальция; • 6) выход содержимого клеток во внеклеточное пространство.
• Изменения в ядре при некрозе связаны с активацией гидролаз, например, рибонуклеаз и дезоксирибонуклеаз. • В цитоплазме происходит денатурация и коагуляция белков, что приводит к распаду цитоплазмы на глыбки (плазморексис) и лизисом органелл (плазмолизис). • В результате в многоклеточном организме при некрозе развивается воспалительная реакция. • Некроз развивается не только в паренхиматозных элементах тканей и органов, но и в их строме. • При этом разрушаются как клетки стромы, так и нервные окончания и компоненты экстрацеллюлярного матрикса. • Расщепление ретикулярных, коллагеновых и эластических волокон происходит с участием нейтральных протеаз (например, коллагеназы, эластазы), липаз и других.
• По механизму некроз может быть прямым и непрямым. • Прямой некроз может быть травматическим, токсическим. • Непрямой некроз ‒ трофоневротическим, аллергическим и сосудистым.
• Травматический некроз является результатом прямого действия на ткань физических (механических, температурных, вибрационных, радиационных и др. ), химических (кислот, щелочей и др. ) факторов. • Токсический некроз развивается при воздействии на ткани токсичных факторов бактериальной и другой природы. • Трофоневротический некроз обусловлен нарушением циркуляции и иннервации тканей при заболеваниях центральной и периферической нервной системы. Примером трофоневротического некроза могут служить пролежни. • Аллергический некроз является результатом иммунного цитолиза тканей в ходе реакций гиперчувствительности немедленного или замедленного типа. Иммунный цитолиз с участием Т лимфоцитов киллеров и макрофагов приводит к развитию некроза ткани печени при хроническом активном гепатите. • Сосудистый некроз связан с абсолютной или относительной недостаточностью циркуляции в артериях, венах и лимфатических сосудах.
• • • Формы некроза Коагуляционный некроз развивается при низкой активности гидролитических процессов, высоком содержании белков и низком содержании жидкости в тканях. Примером могут служить восковидный, или ценкеровский, некроз мышц при брюшном и сыпном тифе; творожистый некроз при туберкулезе, сифилисе, проказе и лимфогранулематозе, аллергических и аутоиммунных заболеваниях. Колликвационный некроз развивается в тканях, богатых жидкостью с высокой активностью гидролитических ферментов. Классическим примером размягчение головного мозга. Гангрена некроз тканей, соприкасающихся с внешней средой. Ткани имеют черную окраску в результате образования сульфида железа из железа гемоглобина и сероводорода воздуха. Секвестр ‒ участок мертвой ткани, который не подвергается аутолизу, не замещается соединительной тканью и свободно располагается среди живых тканей. Секвестры обычно вызывают развитие гнойного воспаления. Инфаркт ‒ это сосудистый некроз (ишемический). Причинами инфаркта являются тромбоз, эмболия, длительный спазм артерий и
• К программируемой клеточной гибели относят несколько типов: программируемый некроз, • апоптоз, • аутофагическую гибель.
• Понятие программированный некроз сформировалось на основании данных о том, что существует сигнальный путь инициации некроза в ответ на связывание рецепторами таких молекул, как TNF (англ. tumor necrosis factor или фактор некроза опухоли, ФНО), на фоне подавления апоптоза.
• Индуцировать программу некроза можно: • путём активации программы апоптоза при связывании, например, лиганда Fas (англ. free antigen soluble ligand) или TRAIL (англ. TNF related apoptosis inducing ligand) со специфическими рецепторами; • гиперэкспрессией проапоптотического белка Bax (англ. Bcl 2 associated X protein) одновременно с ингибированием активности каспаз или гиперэкспрессией антиапоптотических белков. Программированный некроз можно ингибировать, если на клетку подействовать антиоксидантами или подавить активность протеинкиназы RIP (receptor-interacting protein kinase), которая является мишенью для каспаз, участвующих в гибели клеток путём апоптоза. Таким образом, инициация апоптоза подавляет развитие некроза в клетках.
Апоптоз • механизм программированной клеточной гибели обеспечивает регуляцию численности клеток, а именно – установление нужного равновесия между процессами пролиферации и гибели клеток, что, в одних ситуациях, обеспечивает стабильное состояние организма, в других – рост или атрофию тканей и органов.
• Программа апоптотической гибели (энергозависимый процесс) состоит из следующих основных этапов: • 1) индукция, или запуск программы апоптоза; • 2) хроматин конденсируется по периферии ядра и происходит фрагментация ядра; • 3) фрагментация ДНК энонуклеазами в местах, связывающих отдельные нуклеосомы, что приводит к развитию большого количества фрагментов, в которых число пароснований делится на 180 200 (фрагменты дают характерную картину лестницы при электрофорезе); • 4) активация проапоптотических белков; • 5) каскад каспаз, расщепляющих белки мишени; • 6) уплотнение цитоплазмы; • 7) разрушение внутриклеточных органелл или их перестройка; • 8) фрагментация клетки на апоптотические тельца; • 9) подготовка клетки и её фрагментов к фагоцитозу макрофагами или соседними клетками.
• Фагоцитоз апоптотических телец макрофагами и другими клетками активируется рецепторами на этих клетках, которые захватывают и поглощают апоптотические клетки. • Одним из таких рецепторов на макрофагах является рецептор витронектина, который является b 3 интегриноми активирует фагоцитоз апоптотических нейтрофилов.
• Индукция апоптоза и активация проапоптотических белков ведёт к активации каспаз (цистеиновых протеаз) – инициаторных и эффекторных, которые функционируют как протеолитические каскады. • Это приводит к разрушению структурных белков, белков регуляторов клеточного цикла и других. • Активированные каспазой ферменты (например, эндонуклеазы, гельзолин и другие) участвуют в разрушении ядерной ламины, нарушении целостности ДНК, компактизации хроматина, разрушении аппарата Гольджи, митохондрий, элементов цитоскелета и других органелл.
• Некаспазный механизм апоптотической гибели. При этом происходит выход из митохондрий и миграция в ядро флавопротеина AIF (apoptosis inducing factor) и эндонуклеазы G, вызывающих распад ядерной ДНК на крупные фрагменты. • Конденсация хроматина и экспозиция фосфатидилсерина во внешнем монослое плазматической мембраны соответствуют признакам апоптоза.
Конечными этапами апоптоза является уплотнение цитоплазмы, фрагментация ядер и самих клеток с образованием апоптотических телец, в которых могут быть фрагменты ядер, элементы аппарата Гольджи, митохондрий и т. д. Апоптотические клетки и тельца экспонируют на поверхности сигнальные и адгезивные молекулы, которые узнаются соседними клетками или макрофагами и способствуют фагоцитозу. К таким молекулам относятся фосфатидилсерин, лизофосфолипиды, витронектин, тромбоспондин и другие. Процессу фагоцитоза способствует также инактивация на поверхности умирающих клеток молекул типа CD 31 (англ. cluster of differentiation), необходимых для распознавания не подлежащих поглощению жизнеспособных клеток.
• Многие из этих генов сохранились в ходе эволюции ‒ от круглых червей до насекомых и млекопитающих. Некоторые из них обнаруживаются также в геноме вирусов. К активации апоптоза также приводят вирусные инфекции, нарушение регуляции клеточного роста, повреждение клетки и потеря контакта с основным веществом ткани. Апоптоз — это защита организма от персистенции поврежденных клеток, которые могут оказаться потенциально опасными для многоклеточного организма.
• ингибиторы апоптоза: факторы роста, клеточный матрикс, половые стероиды, некоторые вирусные белки; • активаторы включают недостаток факторов роста, потеря связи с матриксом, глюкокортикоиды, некоторые вирусы, свободные радикалы, ионизирующая радиация.
• Выделяют два вида механизма апоптоза: апоптоз «изнутри» и апоптоз «по команде» . • В первом случае задача процесса – убрать поврежденные клетки. Апоптоз запускается сигналами, возникающими внутри самой клетки при неудовлетворительном её состоянии – повреждении хромосом, внутриклеточных мембран и т. д. • Второй вариант апоптоза наблюдается, например, при разделении пальцев на руках или ногах зародыша, при инволюции мюллерова и вольфова протоков, разделении локтевой и лучевой костей предплечья, формировании суставов, имплантации зародыша, образовании полостей сосудов, резорбции личиночных органов животных при метаморфозе, которые с позиции целого организма оказываются ненужными или вредными. В этом случае клетка получает из внеклеточной среды сигнал «погибнуть» , который передаётся через мембранные или цитоплазматические рецепторы. Иногда сигналом для начала апоптоза может быть и отсутствие необходимого сигнала.
• При апоптозе усиливается экспрессия генов, контролирующих пролиферацию и дифференцировку клеток из группы клеточных онкогенов (c-fos, c-myc, bcl-2) и антионкогенов (р53). • Активация клеточных онкогенов должна вести к усилению пролиферации клеток, однако при одновременной активации антионкогена р53 наступает апоптоз. • Механизмы апоптоза многообразны и представляют собой сложнейшие молекулярные каскады.
• Белки семейства Bcl 2 проявляют широкий спектр активности от ингибирования апоптоза до его индукции. Семейство белков Bcl 2 включает в себя субсемейства, которые различаются по структуре и функциям: • субсемейство белков Bcl 2 (Bcl 2, Bcl xl (B cell lymphoma – extra large), Bcl w (Bcl 2 like protein), Mcl 1, аденовирусный E 1 B 19 K, Эпштейн Барр вирусный BHRF 1 и другие) – ингибиторы апоптоза; • субсемейство белков Bax и BH 3 (Bax like BH 3 protein), Вak, Nbk/Bik 1, Bad, Вcl x. S – промоторы апоптоза.
Мутации гена p 53 обнаруживаются примерно в половине опухолей, независимо от их происхождения или типа
• Митотическая катастрофа – это реализация апоптотической программы собственно в процессе митоза. • При этом сегрегация хромосом отсутствует и клетка блокируется в одной из фаз митоза. В митотической клетке нарушены организация веретена и выстраивание хромосом, как при колхициноподобном митозе. • Далее происходит активация каспаз и последующие деструктивные события по типу апоптотических. • Завершается апоптоз образованием апопточеских телец и фагоцитозом.
• Митотическая катастрофа может приводить к гибели клеток, перешедших после аномального митоза в следующую G 1 фазу без нормальной сегрегации хромосом и образования дочерних клеток, т. е. постмитотическая гибель полиплоидных клеток. • Данный способ митотической катастрофы может называться апоптозом клетки, прошедшей полиплоидизирующий митоз.
• Причиной митотической катастрофы считают нарушение процессов контроля в клетках при повреждении ДНК или нарушении сборки веретена деления. • экспрессия гена р53, который служит фактором транскрипции для р21 – ингибитора G 1 – фазы клеточного цикла и для ряда проапоптотических белков. • Митотическая катастрофа отличается от апоптоза одноядерных клеток тем, что нарушение её программы может существенно влиять на хромосомный состав клеток.
• Стимулами к запуску процессов аутофагии в клетках многоклеточных животных являются: 1) отсутствие факторов роста или нехватка питательных веществ; • 2) наличие в цитоплазме повреждённых органелл, например, митохондрий, пероксисом и т. д. ; • 3) в клеточных культурах возникновение монослоя приводит к контактному торможению пролиферации клеток.
• При недостатке питательных соединений клетка начинает утилизировать часть своих цитозольных белков и органелл с помощью аутофагии. • 1) частичная конденсация хроматина; • 2) иногда пикноз ядра; • 3) отсутствие фрагментации ядра и клетки на поздних стадиях гибели; • 4) отсутствие деградации ДНК до нуклеасомного уровня; • 5) увеличение числа аутофагосом и аутофаголизосом; • 6) увеличение лизосомной активности; • 7) увеличение протяженности аппарата Гольджи, и иногда, расширение цистерн эндоплазматического ретикулума; • 8) длительная сохранность микротрубочек и промежуточных филаментов; • 9) иногда возрастание проницаемости митохондрий; • 10) отсутствие активации каспаз. • Следует отметить, что апоптоз может запускаться в разных фазах клеточного цикла, а аутофагическая гибель развивается преимущественно в непролиферирующих клетках (G 0 -фаза и терминальная дифференцировка).
Макроаутофагия. • Обеспечивает поглощение элементов цитоплазмы и целых органелл аутофагосомами, имеющими двойную мембранную структуру, или первичными аутофаговыми вакуолями (AV I). • После слияния с лизосомами аутофагосомы формируют одномембранную структуру – аутолизосому или позднюю аутофаговую вакуоль (AV II), содержимое которых деградируется, и получившиеся элементы возвращаются в цитоплазму для метаболических реакций. • Основным регулятором макроаутофагии является киназа m. TOR (англ. Мammalian target of rapamycin), запускающая образование аутофагосом. Её ингибирование, например, при помощи рапамицина или при отсутствии питательных веществ запускает макроаутофагию.
Микроаутофагия. • Обеспечивает поглощение органелл непосредственно в лизосомных мембранах. Этот механизм также является путём деградации органелл и долгоживущих белков, но, в отличие от макроаутофагии, он не отвечает за адаптацию к недостатку питательных веществ. • Одной из конкретных форм микроаутофагии является избирательная деградация пероксисом в дрожжевых клетках (microperoxophagy) как механизм адаптации к оксидативному стрессу.
Шаперон-ассоциированная аутофагия. • Белки, участвующие в шаперон ассоциированной аутофагии, содержат конкретные пентапептидные мотивы, распознаваемые лизосомами (консенсус последовательность KFERQ (one-letter code for the amino acid sequence Lys (K) –Phe (F) – Glu ® – Arg ® – Gln (Q)), которые узнаются комплексом белков шаперонов (в том числе белком теплового шока 73 к. Да – белок, Hsc 73 (heat shock proteins)) и направляются к лизосомной мембране, где они взаимодействуют с белками, связанными с мембраной лизосом (LAMP)2 A (lysosomeassociated protein 2 A). • Затем субстратные белки разворачиваются и транспортируются в люмен лизосом для деградации. Некоторые посттрансляционные изменения субстратов (например, окисление или денатурация) могут сделать пентапептидные мотивы более доступными для шаперонов, повышая уровень их лизосомального поглощения.
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ • Микроскопическое исследование живых и мёртвых клеток и тканей широко применяется в гистологии для самых различных целей: • для изучения изменений, происходящих в клетках и тканях при разнообразных внешних воздействиях, • для выяснения закономерностей обмена веществ в клетках, • для изучения клеточных структур, токов цитоплазмы, клеточной проницаемости и т. д.
Приготовление препаратов Прижизненные красители – это органические соединения ароматического ряда, обладающие относительно небольшой токсичностью для живых клеток. Из кислых красителей наиболее часто используется трипановый синий (0, 5 процентный раствор) и литиевый кармин в виде 20 процентного раствора Из основных красителей чаще всего употребляется нейтральный красный в разведении 1 : 200000 или более крепкий раствор – 1 : 50 000; метиленовый синий в растворах 1 : 1. 000 или 1: 10000.
Флюорохромы количество красителя, поглощенного неповрежденными и поврежденными путем какого либо воздействия клетками (например, высокой температурой), можно точно определить и выразить количественно. Разница в количестве красителя, поглощенного неповрежденными и поврежденными клетками, свидетельствует о характере и степени изменений, возникающих под влиянием различных внешних воздействий.
• К микрохимическим относятся те методы, с помощью которых производится определение от 10 до 0, 01 мг вещества. Эти методы широко используются для определения содержания в клетках белков, фосфора, аминокислот, нуклеиновых кислот, сахаров и т. д.
• Метод рентгеносруктурного анализа основан на явлении дифракции рентгеновских лучей. • Он применяется для изучения строения молекул белков, нуклеиновых кислот и других веществ, входящих в состав цитоплазмы и ядра клеток. • Метод дает возможность определить пространственное расположение молекул, точно измерить расстояние между ними и изучить внутримолекулярную структуру.
• Меченые атомы (авторадиография) широко применяются в цитологии и гистологии для изучения разнообразных химических процессов, протекающих в клетке, например для изучения синтеза белков и нуклеиновых кислот, проницаемости клеточной оболочки, локализации веществ в клетке и т. д.
Методы исследования апоптоза достаточно разнообразны. Первоначально наиболее распространенным способом определения апоптоза является электрофорез экстрагируемой фракции ДНК, который позволяет выявить дискретность низкомолекулярной ДНК по мол. массе межнуклеосомной деградации ДНК
• для регистрации апоптоза лимфоцитов все чаще применяют методы, основанные на проточной цитофлуориметрии. К этой группе относится метод, основанный на выявлении потери клетками части ДНК (гиподиплоидных клеток) с помощью флуоресцентного красителя – пропидиума йодида.
• Апоптоз можно обнаружить уже на ранних этапах с помощью меченого флуорохромом аннексина V, который связывается с фосфатидилсерином, появляющимся на мембране клеток, подвергающихся апоптозу. В апоптотических клетках фосфолипид фосфатилдисерин переориентируется и локализуется на поверхности клеточной мембраны. Локализация фосфатилдисерина на поверхности мембраны наблюдается начиная с ранней стадии апоптоза до полной деградации клетки. Рекомбинантный аннексин V белок (35 36 к. Д), обладающий высокой аффинностью к фосфатилдисерину в присутствии ионов Са+2. Связываясь с фосфатилдисерином на поверхности клетки аннексин V, конъюгированный с флуорохромом, служит маркером апоптоза.
• Обычно аннексин V используется в комбинации с пропидием иодидом (PI), что позволяет одновременно распознавать интактные клетки (отрицательные и по аннексину V, и по PI), клетки, находящиеся в «раннем» апоптозе (положительные по аннексину V, отрицательные по PI), • клетки, находящиеся в позднем апоптозе или в некрозе (положительная и по аннексину V и по PI).
• Ориентировочное представление о «склонности» клеток к развитию апоптоза можно получить, определяя экспрессию на их поверхности Fas-рецептора (CD 95) и в митохондриях – протонкогена bcl-2. • СD 95 Fas, или APO 1 ‒ трансмембранный гликопротеин (45 к. Д), являющийся членом семейства рецепторов к фактору некроза опухолей (TNF α).
• Связывание CD 95 Fas лигандом (Fas L, CD 95 L) индуцирует апоптоз в клетках, его экспрессирующих. • Моноклональные антитела к CD 95 позволяют с использованием метода проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии выявить популяцию клеток, готовящихся к апоптозу.
• CD 95 L (Fas L) –Fas лиганд является мембранным белком (40 к. Д), растворимая форма которого является разновидностью рецепторов к фактору некроза опухоли (TNF α). Этот антиген экспрессируется цитотоксическими лимфоцитами и клетками – натуральными киллерами, а также выявлен на многих опухолевых клетках. Связывание Fas L с рецептором CD 95 индуцирует процесс апоптоза в клетках мишенях. Моноклональные антитела к CD 95 L позволяют с использованием метода проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии выявить популяцию клеток, готовящихся к апоптозу. • Bcl 2 – внутриклеточный белок, локализующийся на митохондриях, сверэкспрессия которого блокирует апоптоз.
Литературные источники • • • • Зайнулин В. Г. Роль апоптоза в возрастных патологиях / В. Г. Зайнулин, А. А. Москалёв // Онтогенез. – 2001. – Т. 32, № 4. – С. 249– 251. Меньшикова Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е. Б. Меньшикова, В. З. Ланкин, Н. К. Зенков и др. – М. : Слово, 2006. – 556 с. Новик А. А. Введение в молекулярную биологию канцерогенеза / А. А. Новик. – М. : ГЭОТАР МЕД, 2004. – 224 с. Программированная клеточная гибель / [под ред. В. С. Новикова]. – СПб. : Наука, 1996. – 275 с. Ярыгин В. Н. Роль циркулирующих стволовых клеток в физиологической и репаративной регенерации. Патологическая физиология / В. Н. Ярыгин // Онтогенез. – 2007. – Т. 38, № 2. – С. 1– 15. Beausejour C. M. Ageing: balancing regeneration and cancer / C. M. Beausejour, J. Campisi // Nature. – 2006. – Vol. 443. – P. 404– 405. Carlson M. E. Loss of stem cell regenerative capacity within aged niches / M. E. Carlson, I. M. Conboy // Aging Cell. – 2007. – Vol. 6. – P. 371– 382. Hipp J. Sources of stem cells for regenerative medicine / J. Hipp, A. Atala // Sci. China Life. – 2010. – Vol. 53, № 1. – P. 154– 156. Orlic D. Bone marrow stem cells regenerate infarcted myocardium / D. Orlic, J. Kajstura, S. Chimenti et al. // Pediatr Transplant. – 2003. – Vol. 7. – P. 86– 88. Walters B. J. Postnatal development, maturation and aging in the mouse cochlea and their effects on hair cell regeneration / B. J. Walters, J. Zuo // Inner. Ear Development and Regeneration. – 2013. – Vol. 297. – P. 68– 83. Yarygin V. N. Regeneration of the rat spinal cord after thoracic segmentectomy: Growth and restoration of nerve conductors / V. N. Yarygin, V. V. Banin, K. N. Yarygin, et al. // Neurosci. Behav. Physiol. – 2007. – Vol. 37, № 2. – P. 97– 105. Zhao T. p 53 and stem cells: new developments and new concerns / T. Zhao, Y. Xu // Trend in Cell Biology. – 2010. – Vol. 20, № 3. – Р. 170– 175.