ПРИНЦИПЫ СОВРЕМЕННОЙ ИММУНОДИАГНОСТИКИ
ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ИММУНОДИАГНОСТИКА ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ: - Определение наличия иммунопатологии - Определение характера иммунопатологии - Определение иммунопатогенетического звена - Определение необходимости иммунокоррекции - Выбор метода иммунокоррекции Клинические исследования - Иммунологический анамнез - Физикальное исследование - Инструментальные и аппаратные исследования Лабораторные исследования - Общий анализ крови - Общий анализ мочи - Биохимическое исследование крови - Цитоскопические исследование биоматериала - Иммунологические исследования: - типовая иммунограмма - дополнительные исследования с определением функциональной активности клеток, цитокинового статуса, антител на аутоантигены и т. д.
МЕТОДЫ ИММУНОДИАГНОСТИКИ • МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ - физического разделения факторов иммунитета(молекулярных или клеточных): электрофорез, центрифугирование в градиентах плотности, иммуномагнитная сепарация, проточная цитофлуориметрия • МЕТОДЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАРТИКУЛЯРНЫХ АНТИГЕНОВ – агглютинация, гемагглютинация, латекс-агглютинация, нефелометрия • МЕТОДЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ ГЕМОЛИЗА – тесты фиксации комплемента, метод Йерне • ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ – иммунофлюоресцентная микроскопия, иммуноферментная микроскопия • МЕТОДЫ ИММУНОАНАЛИЗОВ – радиоиммуноанализ, иммуноферментный анализ • МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ – реакции бласттранформации с митогенами и цитокинами, реакции цитотоксичности, фагоцитарные тесты • МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ – полимеразная цепная реакция, иммуноблоттинг (определяет белки), Southern-блотт (определяет ДНК), Northern-блотт (определяет РНК)
МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ: ПРИНЦИП ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ Центрифугирование гепаринизированной крови в градиенте плотности фиколла Центрифугирование взвеси мононуклеарных клеток, пропущенных через колонку с нейлоновой ватой, в градиентах плотности перколла Плазма крови, содержащая гранулоциты Фиколл 1, 076 Осадок эритроцитов «Кольцо» интерфазы, содержащее мононуклеарные клетки крови Перколл: 37, 5% 40% 42, 5% 45% Взвесь мононуклеарных клеток ЕК Тсtl Тh Отделение моноцитов ( «прилипающих клеток» ) инкубированием в пластиковых чашках Петри и В-лимфоцитов пропусканием через колонку с нейлоновой ватой
МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ: ПРИНЦИП ИММУНОМАГНИТНОЙ СЕПАРАЦИИ Магнитная сепарация Цельная кровь, содержащая лимфоциты Обработка крови антителами к поверхностным рецепторам (CD 4, CD 8 и т. д. ), конъюгированными с парамагнитными полистирольными микрочастицами - Dynabeads Подсчет абсолютного числа клеток в камере Горяева на световом или люминесцентном микроскопе Обработка клеток уксусной кислотой и окраска генцианвио. Позитивно выде- Негативно выделетом или акридиленные клетки новым оранжевым (меченный осадок) (супернатант)
МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ: ПРИНЦИП ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ Суспезия окрашенных клеток Проточная вибрационная камера Несущая жидкость Светоделители Красная флуоресценция Зеленая флуоресценция Лазер Отклоняющие пластины Детектор поперечного (90 о) светорассеяния Сообщение заряда капле + Коллекторы Ненужный материал Детектор прямого светорассеяния (размеры) (гранулярность)
МЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ: ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ ФАКТОРЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ: - морфометрия; - гранулярность; - иммунофенотипирование клеток; - иммуноиндикация молекул ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ: - определение количественного (относительного и абсолютного) состава клеток крови; - определение популяций лейкоцитов; - определение субпопуляционного состава лимфоцитов; - определение стадии дифферецировки и активации клеток; - оценка функциональной активности клеток; - определение внутриклеточных и секретируемых цитокинов; - определение содержания ДНК и анализ клеточного цикла; - обнаружение ДНК-анеуплодии (злокачественности клеток); - определение клеточного апоптоза и некроза; - постадийное исследование фагоцитоза; - исследование активности внутриклеточных ферментов.
МЕТОДЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАРТИКУЛЯРНЫХ АНТИГЕНОВ: РЕАКЦИИ, ОСНОВАННЫЕ НА ФЕНОМЕНЕ АГГЛЮТИНАЦИИ АГГЛЮТИНАЦИЯ – склеивание микробных клеток антителами в присутствии раствора электролита с образованием осадка и просветлением жидкой фазы ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ (пассивная) – склеивание эритроцитов, несущих адсорбированные микробные антигены противомикробными антителами в присутствии раствора электролита с образованием осадка эритроцитов ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИЯ – склеивание частиц латекса, несущих адсорбированные микробные антигены противомикробными антителами в присутствии раствора электролита с образованием осадка латексных частиц и просветлением жидкой фазы
МЕТОДЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАРТИКУЛЯРНЫХ АНТИГЕНОВ: РЕАКЦИИ, ОСНОВАННЫЕ НА ФЕНОМЕНЕ ПРЕЦИПИТАЦИИ Раствор молекулярного антигена Кольцо преципитата Сыворотка, содержащая антитела (преципитирующая) РЕАКЦИЯ КОЛЬЦЕПРЕЦИПИТАЦИИ образование осадка, содержащего иммунные комплексы, на границе двух жидких фаз – раствора антигена и сыворотки с антителами к данному антигену – при оптимальном количественном соотношении антигенов и антител РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ В ГЕЛЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (МЕТОД МАНЧИНИ) - образование кольца помутнения (преципитата) в геле, содержащем сыворотку с антителами к иммуноглобулинам определенного класса, вокруг лунок с испытуемыми сыворотками крови. Кольцо преципитата образуется в эквивалентной зоне «антиген (иммуноглобулин определенного класса в испытуемой сыворотке) – антитело (к иммуноглобулину данного класса в составе геля)» , а диаметр кольца преципитации будет зависеть от количественного содержания Ig в испытуемой сыворотке.
МЕТОДЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕХНОЛОГИИ ГЕМОЛИЗА: ТЕСТЫ ФИКСАЦИИ КОМПЛЕМЕНТА, МЕТОД ЙЕРНЕ Испытуемая система: 1) биоматериал, содержащий предполагаемый антиген + иммунная сыворотка + комплемент или 2) сыворотка больного + раствор известного антигена + комплемент Гемолитическая система: эритроциты барана (ЭБ) + сыворотка с антителами к ЭБ Гемолиз Отрицательная реакция Задержка гемолиза РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА Агар с эритроцитами барана и комплементом, лунки с клеточной суспензией из селезенок животных, иммунизированных эритроцитами барана РЕАКЦИЯ ЙЕРНЕ (ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСЛА АОК) Положительная реакция Испытуемая сыворотка в разных количествах + гемолитическая система ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА В ИСПЫТУЕМОЙ СЫВОРОТКЕ ПО 50% ГЕМОЛИЗУ
МЕТОДЫ ИММУНОАНАЛИЗОВ: ОСНОВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ И ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОАНАЛИЗ – диагностическое исследование, основанное на использовании реакции «антиген – антитело» , воспроизведенной in vitro с применением моноклональных антител (МКА), меченных флюорохромом (реакции иммунофлюоресценции - РИФ), радиоизотопом (радиоиммунный анализ – РИА), ферментом (иммуноферментный анализ – ИФА) ИММУНОАНАЛИЗ Обнаружение антигенов в биологическом материале Оценка иммунного статуса путем определения компонентов иммунной системы в биологическом материале ПРЯМЫЕ МЕТОДЫ Обнаружение антител в биологическом материале НЕПРЯМЫЕ МЕТОДЫ
ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА – препараты иммуноглобулинов, одинаковых по специфичности активного центра ИММУНИЗАЦИЯ Антиген АНТИ-б в сыворотке АНТИ-а в сыворотке а б б а а б Клетки селезенки Иммунный лимфоцит АНТИ-а СЛИЯНИЕ «БЕССМЕРТНАЯ» гибридома АНТИ-а КЛОНИРОВАНИЕ РАЗМНОЖЕНИЕ КЛОНОВ Иммунный лимфоцит АНТИ-б «БЕССМЕРТНАЯ» В-клеточная опухолевая линия (плазмоцитома) «БЕССМЕРТНАЯ» гибридома АНТИ-б Планшет для микротитрования (предельное разведение до 1 клетки на лунку) АНТИ-а МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА АНТИ-б
СПОСОБЫ МЕЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ФИТЦ Родамин Радиоизотоп Фермент Хромоген . . Иммунофлуоресцентный анализ (ФИА) Радиоиммунный анализ (РИА) Иммуноферментный анализ (ФИА)
ПРЯМЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОАНАЛИЗОВ Метка присоединяется либо к заданному антигену, либо к антителу, специфичному к заданному антигену КОНКУРЕНТНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ: ИНГИБИТОРНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ: Меченный антиген конкурирует с антигеном в испытуемой пробе за иммобилизованные на твердой фазе антитела. Результат реакции на твердой фазе обратно пропорционален концентрации определяемого антигена в пробе Антиген из биопробы конкурирует с антигеном на твердой фазе за растворимые меченные антитела. Результат реакции на твердой фазе обратно пропорционален концентрации определяемой метки в пробе
ПРЯМЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОАНАЛИЗОВ Метка присоединяется либо к заданному антигену, либо к антителу, специфичному к заданному антигену СЭНДВИЧ-ИММУНОАНАЛИЗ: ИММУНОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ: Антитела, сорбированные на твер- В пробирку с биопробой вносят избыток зарадой фазе, и меченные раствори- нее сорбированного на мелкодисперсном твермые антитела распознают разные дом носителе антигена и добавляют заведомый эпитопы антигена. Результат реак- избыток меченных антител, центрифугируют, в ции на твердой фазе прямо проор- супернатанте определяют количество метки. ционален концентрации опреде- Результат реакции прямо пропорционален концентрации определяемой метки в супернатанте. ляемой метки в пробе
НЕПРЯМЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОАНАЛИЗОВ Метка присоединяется не к заданному антигену или антителу, а к антителам к иммуноглобулинам человека Антиген (заданный или из биопробы) иммобилизуют на твердой фазе и добавляют заданные или искомые антитела, а затем – меченные антииммуноглобулиновые антитела. Результат реакции на твердой фазе прямо пропорционален концентрации определяемой метки в пробе. Преимущество анализа – в возможности использования одного и того же меченного иммуноглобулина для разных пар конкретных антигенов и антител.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ основан на использовании меченных ферментами моноклональных антител, с помощью которых в биологических средах, внесенных в микропланшеты, количественно регистрируется наличие молекул того или иного биологически активного компонента ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ: - определение фенотипически значимых молекул лимфоцитов и других клеток; - HLA-типирование - определение уровня различных классов иммуноглобулинов; - определение содержание гормонов; - обнаружение онкомаркеров; - обнаружение микробных антигенов (протозойных, грибковых, бактериальных, вирусных) и противомикробных антител; - обнаружение в организме аутоантител; - определение показателей внутриклеточного метаболизма; - определение содержания цитокинов; - определение содержания молекул клеточной адгезии; - определение содержания медиаторов аллергии и белков острой фазы.
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ: РЕАКЦИИ БЛАСТТРАНСФОРМАЦИИ Митогены: PWM – митоген фитоллаки для В-лимфоцитов Суспензия фракциорованных лимфоцитов в питательной среде ЛПС – липополисахариды грам-бактерий для В-лимфоцитов + ФГА – фитогемагглютинин красной фасоли для Т-лимфоцитов и ЕК (CD 2) Кон. А – конканаваллин А плодов клещевины для Тлимфоцитов и ЕК (CD 2) Митоген лаконоса для В- и Т-лимфоцитов % клеток в состоянии митоза Включение 3 Н-тимидина или 14 Стимидина в ДНК лимфоцитов Рост уровня радиоактивности клеток
Смешанная культура лимфоцитов (СКЛ) – определение активности Tctl Тест естественной цитотоксичности - определение активности ЕК Тест антителозависимой цитотоксичности - определение активности ЕК Cуспензия мононуклеарных клеток, полученных методом фракционирования Cуспензия меченных клеток, чувствительных к ЕКцитолизу (К-562 и др. ) Cуспензия меченных клеток, устойчивых к ЕК-цитолизу (P 185), сенсибилизированных Ig. G 51 Сr PKH -26 Уровень флуоресценции среды Cуспензия меченных аллогенных мононуклеарных клеток Уровень радиоактивности среды МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ: РЕАКЦИИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ: ФАГОЦИТАРНЫЕ ТЕСТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ: Микроскопия: Cуспензия клеток, полученных методом фракционирования Инкубация + Взвесь бактерий St. aureus Центрифугирование Фагоцитарный показатель - %клеток, содержащих бактерии Фагоцитарное число – среднее число бактерий, поглощенных одним нейтрофилом В тех случаях, когда культура St. aureus содержит метку (например, ФИТЦ), определение фагоцитарных показателей может производиться автоматически НСТ-ТЕСТ: Cуспензия клеток, обогащенных гранулоцитами + Нитросиний тетразолиевый Контроль Спонтанный тест + Взв есь ба ктери й St. a ureus Индуцированный тест
МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ: ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР) Термическая денатурация ДНК (30 -40 секунд при 93 -95 о) Отжиг праймеров – олигонуклеотидов, запускающих синтез ДНК (20 -60 секунд при 50 -65 о) праймер Синтез комплементарных нитей ДНК (70 -72 о) и формирование ампликона с участием микробной ДНК-полимеразы дезоксинуклеотидтрифосфат Завершение первого цикла После 30 -80 циклов проведение идентификации с помощью реакции ДНК-гибридизации (определение числа гибридов с помощью различных тест-систем, в т. ч. ферментных)
МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ: ПРИНЦИП ИММУНОБЛОТТИНГА I этап Комплекс микробных антигенов подвергается электрофорезу в полиакриламидном геле, при этом отдельные антигены распределяются в геле соответственно их электрофоретической подвижности II этап Распределенные антигены переносятся с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозные полоски. Полосски инкубируют в присутствии сыворотки больного, антитела из которой присоединяются к антигенам АНТИГЕН Пептиды после разделения + + +
МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ: ОЦЕНКА ИММУНОБЛОТТИНГА III этап Полоски с комплексами антигенов и антител из сыворотротки больного обрабатывают меченными ферментом антителами к -глобулинам человека (образуется трехкомпонентный комплекс), а затем добавляют субстрат для фермента и хромогенную смесь, комплексы при этом окрашиваются и становятся хорошо видными -глобулины человека, меченные ферментом Комплекс антигенов и антител из сыворотки больного Субстрат для фермента и хрохромогенная смесь Трехкомпонентный комплекс IV этап По окрашенным участкам полоски и интенсивности окраски судят о наличии в сыворотке антител к отдельным микробным антигенам и их примерном количестве
ТИПОВАЯ ИММУНОГРАММА (ТЕСТЫ 1 -го УРОВНЯ) Лейкоциты 4 -8, 8 x 109/л Нейтрофилы 48 -75 % 2, 1 -5, 6 х109/л Лимфоциты 19 -37 % 1, 2 -3 x 109/л Моноциты 3 -11 % 0, 1 -0, 6 x 109/л CD 3 55 -75 % 0, 9 -2, 2 x 109/л CD 4 35 -65 % 0, 6 -1, 9 x 109/л CD 8 12 -30 % 0, 3 -0, 8 x 109/л CD 4/CD 8 1, 2 -2, 5 CD 19 5 -15 % 0, 1 -0, 45 x 109/л CD 16 10 -20 % 0, 25 -0, 5 x 109/л 0 -5 % CD 56 0 -0, 1 x 109/л 6 -20 % HLA-DR 0, 15 -0, 5 x 109/л ЕКТ СD 38 CD 25 CD 95 CD 54 CD 94 CD 158 CD 45 RO CD 45 RA Ig. M Ig. G Ig. A Ig. E ЦИК НСТ-тест НСТ-стимулир С 1 q С 1 inh С 3 С 4 СH 50 12 -25 % 24 -40 % 0 -5 % 23 -60 % 25 -35 % 30 -45 % 5 -12 % 38 -55 % 25 -47 % 0, 5 -2 г/л 7 -20 г/л 0, 7 -5 г/л 10 -150 МЕ/мл 50 -200 ЕД о. п. 12 -30 у. е. 40 -95 у. е. 10 -25 мг/дл 7, 5 -35 мг/дл 90 -180 мг/дл 10 -40 мг/дл 20 -50 г. е.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (ТЕСТЫ 2 -го УРОВНЯ) Факторы роста: Фактор стволовых клеток (SCF) Эпидермальный фактор роста (EGF) Фактор роста фибробластов (FGF) Васкуло-эндотелиальный фактор роста (VEGF) Трансформирующий фактор роста (TGF- 1) ( ТGF- 2) Интерфероны: ИФН Интерлейкины: ИЛ-1 ra ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-6 ИЛ-8 ФНО Факторы некроза опухолей: Биогенные амины: Серотонин Гистамин Эйкозаноиды: Лейкотриены С 4/D 4/F 4 Простагландин (PG) Е 2 15 -200 пг/мл 10 -150 пг/мл 20 -500 пг/мл 15 -400 пг/мл 31 -210 пг/мл 30 -50 пг/мл 0 -5 Ед/мл 30 -50 пг/мл 30 -50 Ед/мл 30 -100 пг/мл 30 -50 пг/мл 0, 26 -0, 7 мкг/л 0, 2 -0, 52 мкг/л 0, 04 -0, 5 нг/л 19, 5 -1000 пг/л
ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКА - ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ: Подтверждение диагноза аллергического заболевания Определение типа аллергической реакции При атопии определение преобладающей фазы реакции При атопии определение мишени (субпопуляции тучных клеток) Выбор метода лечения и определение показаний для фармакотерапии Клинические исследования - Иммунологический анамнез - Физикальное исследование - Инструментальные и аппаратные исследования Лабораторные исследования - Общий анализ крови - Общий анализ мочи - Биохимическое исследование крови - Цитоскопические исследование биоматериала - Иммунологические исследования: - типовая иммунограмма - специальные исследования (Ig. E и т. д. ) - Кожные пробы - Провокационные пробы
Преобладание реакции ТКСТ КОЖНЫЕ ПРОБЫ Преобладание реакции ТКСО CD 3+ CD 8+ Преобладание реакции поздней фазы ВЫСОКИЙ УРОВЕНЬ ТРИПТАЗЫ КРОВИ Преобладание реакции ранней фазы + Неблагоприятный прогноз ИЗМЕНЕНИЯ ИММУНОГРАММЫ КРОВИ Определение причинных аллергенов Наличие атопического заболевания Гранулематоз Вегенера Пемфигоид ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО Ig. E Целиакия Значительный рост Изолированный дефицит Ig. A Узелковый периартериит Умеренный рост Ig. E-плазмоцитома УРОВЕНЬ ОБЩЕГО Ig. E Гельминтозы Инфекционный мононуклеоз Норма Алкогольный цирроз Атопические заболевания органов дыхания Атопические заболевания ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ СПЕЦИАЛЬНЫХ ТЕСТОВ ПРИ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПРОВОКАЦИОННЫЕ ПРОБЫ + в течение 20 -30 мин. с кромогликатом или ГКС + через 4 -5 час. ПРОГНОЗ ТЕЧЕНИЯ И ВЫБОР СРЕДСТВ ФАРМАКОТЕРАПИИ
ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЦИТОГРАММЫ ПРИ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЦИТОГРАММА В мазках мокроты, отделяемого носа и глаз, смывов и биопсионного материала, полученного при бронхоскопии и эзофагогастродуоденоскопии Состав при атопическом заболевании: Эозинофилы Тучные клетки Гельминтозы При перитонеальном диализе На фоне кортикостероидов Эозинофилия свыше 40% На фоне лучевой терапии Герпетиформный дерматит Узелковый периартериит Эозинофилия от 10% до 40% Цирроз печени Врожденные пороки сердца Эозинофилия до 10% Иммунодефициты Лимфогранулематоз Атопические заболевания Эозинофилии нет ЭОЗИНОФИЛЫ КРОВИ единичные клетки в большом количестве атопия ранней фазы атопия поздней фазы Выявля- Выявляются при фик- при другой сации фикформасации лином ТКСО ТКСК
ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ СПЕЦИАЛЬНЫХ ТЕСТОВ ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ Тест повреждения базофилов (I тип) Прямой базофильный тест: кровь больного + аллерген Непрямой базофильный тест: базофилы + сыворотка больного + аллерген Реакция лейкоцитолиза (II тип) Гепаринизированная кровь Определение ЦИК (III тип) Сыворотка крови Реакция торможения миграции лейкоцитов - РТМЛ (IV тип) Без аллергена Базофилы в N Поврежденные базофилы Окраска нейтральным красным Физ. раствор + (контроль) Микроскопический подсчет числа лейкоцитов Раствор + аллергена Микроскопический подсчет числа лейкоцитов (N – снижение до 10%) 4% р-р + полиэтиленгликоля Плазма крови Нефелометрическое определение оптической плотности (N - 50 -200 ед. о. п) С аллергеном Уменьшение площади зоны распространения лейкоцитов (N–до 10%)
Скачать презентацию ПРИНЦИПЫ СОВРЕМЕННОЙ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ИММУНОДИАГНОСТИКА
ЛЕКЦИЯ-7.ppt