Лекция 3 по микре 28.02.15г..ppt
- Количество слайдов: 31
Питательные среды
Питательные среды. • • Питательные среды – это субстраты, предназначенные для: накопления выделения изучения сохранения микроорганизмов
Требования к питательным средам. 1. Питательность (содержание всех веществ, необходимых для жизнедеятельности микроорганизмов). 2. Оптимальный ( 7, 2 -7, 4 -7, 6 ) (исключения: р. Н холерный вибрион (р. Н 8 -8, 6), дрожжи и плесень при р. Н 5, 0 -5, 5). 3. Изотоничность % (концентрация солей 0, 9 должна обеспечивать (осмотические услови 4. Стерильность и прозрачность. 5. Влажность не менее 20%
О влажности питательной среды (не менее 2 %), необходимой для жизнедеятельности микроорганизмов судят по наличию конденсата на ней. конденсат
Классификации питательных сред I. По происхождению (по исходным компонентам): 1. Натуральные • • состоят из продуктов растительного и животного происхождения не имеют определенного химического состава 2. Синтетические • • имеют строго определенный химический состав. используются в научно-исследовательско деятельности
Классификации питательных сред II. По консистенции: 1. Жидкие(бульоны)(0% агара для: ) § § § определения ферментативной активности накопления микробной массы. определения типа дыхания 2. Полужидкие (желатиновые и агаровые 0, 2 -0, 7 агара % ) для § определения ферментативной активности § подвижности микроорганизмов. 3. Твёрдые(плотные) среды (1, 5 -3% агара )
Тип дыхания микроорганизмов определяется жидких средах на • Поверхностно (пленкой) – растут аэробы • Придонно (осадком) – анаэробы • Диффузно (равномерная муть) – факультативные анаэробы.
Подвижность микроорганизмов • определяется на полужидких средах при посеве «уколом в столбик» • подвижные вызывают помутнение всей толщи среды • неподвижные растут по «уколу» , оставляя остальную среду прозрачной.
3. Плотные( 1, 5 -3 %агара ) • Пластинчатые среды (в чашках Петри) для ü выделения чистой культуры ü определения ферментативной активности üопределения культуральных свойств. • Скошенныесреды (в пробирках) для üнаращивания микробной массы üвыделение чистой культуры протея и определение его подвижности • Комбинированные среды • (в пробирках) для üопределения сахаролитической активности üопределения протеолитической активности
Уплотнители питательных сред: Агар-агар– это • полисахарид • получен из красных морских водорослей • имеет жесткую волокнистую структуру • не используется микроорганизмами для питания • плавится при температуре 80 -86 ° • застывает при 36 -45 ° Желатин– это • белок животного происхождения, • некоторые микроорганизмы используют ег как питательное вещество. • плавится при температуре 30 -34 ° • застывает при 22 -25°
Классификации питательных сред III. По составу: 1. Простые –для: • материала, слабо загрязненного микрофлорой • как основа сложных питательных сред (МПБ, МПА, пептонная вода и т. д. ). 2. Сложныеготовятся: • на основе простых питательных сред • с добавлением различных компонентов для изучения определенных микроорганизмов (кровь, сыворотка, яйцо, картофель, сахара и др. )
Классификации питательных сред IV. По назначению : I. Универсальные (общеупотребительные) – это простые среды: МПБ, МПА, пептоннаявода. II. Специальные для культивирования и изучения определенных видов микроорганизмов
1. Элективные (избирательные) для определенного вида микроорганизмов основаны на принципе подавления роста других микроорганизмов. • Желточно-солевой агар (ЖСА) стафилококков для • Кровяной агар (КА) для стрептококков • Сабуро для грибов • • • Пептонная вода (ПВ) р. Н 8 -8, 6 для холерного вибриона Эндо, Плоскирева, Левина для энтеробактерий Левенштейна-Йенсена для возбудителя туберкулеза Клаубергадля дифтерийной палочки Висмут сульфит агар (ВСА) сальмонелл для и др.
2. Дифференциально-диагностические (для дифференциации видов микроорганизмов п ферментативной активности). • Гисса для сахаролитической активности • Ресселядля сахаролитической активности • Олькеницкого сахаролитической для и протеолитической активности • Клиглерадля сахаролитической и протеолитической активности • и др.
3. Среды накопления (жидкие элективные среды) • Мясо-пептонный бульонв общемслуае • Солевой бульон для стафилококка • Желчный бульон сальмонелл для • Селенитовый бульон энтеробактерий для • Сахарный бульон стрептококков для
В современных технологиях используются: • одноразовые пробирки с транспортными средами • вмонтированные тампоны для взятия материала • все это упаковано в специальные контейнеры.
4. Консервирующие среды • способствуют длительному сохранени микробов • предохраняют от загрязнения (контаминации) • облегчают маркировку взятого материала, • предотвращают выливание материала
Хромогенные диагностиеские среды (современные технологии ) Хромогенные среды позволяют определить несколько видов микроорганизмов. Принцип действия этих сред: В них содержится несколько субстратов, позволяющих выявить высокоспецифичные ферменты у искомых микроорганизмов.
Культуральные свойства микроорганизмов это характер роста микроорганизмов на средах На плотных питательных средах микроорганизмы растут колониями КОЛОНИЯ – Это скопление микроорганизмов, выросших • из одной материнской клетки • (при t° 37) • (за 18 -20 часов )
Выделяют 3 формы колоний: S – форма (классическая форма) круглая, выпуклая, с ровными краями, влажн гладкая, блестящая R – формас неровными краями, шероховатая , сухая М – форма(слизистая) По величине колонии подразделяются: • • мелкие до 1 мм, средние - 2 -4 мм крупные- более 4 мм карликовые (точечные)
Цвет колонии определяется пигментом: • Золотистый St. aureus у • Сине-зеленый у Ps. aeruginosa • Белый у St. epidermidis • Белый на Сабуро у C. albicans • Красныйу S. marcescens • Черный у плесневых грибов • и др.
Культура микроорганизмов – масса микробов в субстрате или среде. Культура микроорганизмов бывает: • «Чистая культура» состоит из одного вида организмов • «Смешанная культура» - состоит из разных видов микроорганизмов • «Жидкая культура» выросшая в бульоне – (бульонная) • «Плотная культура» колонии, выросшие на – плотной питательной среде
Приготовление питательных сред Сухие среды : порошки фабричного производства в различных упаковках с рецептурой приготовления. Этапы приготовления: 1. Взвесить навеску сухого порошка 2. Варка среды вдистилированной воде 3. Установление среды р. Н 4. Разлив питательных сред Преимущества сухих сред: 1. Стандартность; 2. Стабильность; 3. Простота приготовления; 4. Удобная транспортировка.
Пластины Биохимические Дифференцирующие Энтеробактерии (ПБДЭ) Системы Индикаторные Бумажные (СИБы)
Контроль качества лабораторных исследований Контроль готовых сред : 1. на стерильность. 2. биологический контроль. 3. химический контроль.
1. Контроль стерильности питательной сре Питательные среды ставят в термостат на 2 суток При отсутствии на них признаков роста, их считаю стерильными. 2. Химический контроль питательной сред Устанавливается состав химических веществ и р. Н среды. 3. Определение роста эталонной культуры Несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами микроорганизмами. По росту судят о питательных (ростовых) свойствах среды.