Скачать презентацию Организация контроля качества питательных сред ТНПА по Скачать презентацию Организация контроля качества питательных сред ТНПА по

Методы приготовления и контроля ПС.ppt

  • Количество слайдов: 40

Организация контроля качества питательных сред Организация контроля качества питательных сред

ТНПА по контролю качества питательных сред Инструкция по применению «Хранение, приготовление и контроль качества ТНПА по контролю качества питательных сред Инструкция по применению «Хранение, приготовление и контроль качества питательных сред для санитарной микробиологии» , утв. МЗ РБ 19. 03. 10 г. № 079 -0210; Рекомендации по организации и проведению контроля качества бактериологических исследований № 4 -06/3824; Минск, 1987 г.

Требования к питательным средам Питательные среды должны: содержать все компоненты, необходимые для роста и Требования к питательным средам Питательные среды должны: содержать все компоненты, необходимые для роста и размножения микроорганизмов (источники азота, углерода, кислорода, водорода, неорганических солей, факторов роста); быть достаточно влажными и изотоническими; иметь определенную активную реакцию р. Н и окислительно -восстановительный потенциал; обеспечивать большую буферность; иметь определенную вязкость; быть стерильными; иметь определенную цветность, прозрачность и консистенцию.

Требования к приготовлению питательных сред Посуда для приготовления ПС должна быть достаточно большого объёма, Требования к приготовлению питательных сред Посуда для приготовления ПС должна быть достаточно большого объёма, чтобы среду было удобно перемешивать. Не стоит готовить в одной ёмкости больше 2 дм 3 ПС.

Требования к приготовлению питательных сред Навески сухих ПС всегда следует растворять в чистой свежей Требования к приготовлению питательных сред Навески сухих ПС всегда следует растворять в чистой свежей дистиллированной или полностью деминерализованной воде. Подготовленные навески ПС помещают, приблизительно, в половину необходимого объема воды, тщательным образом перемешивают до получения однородной взвеси, добавляют воду, которая осталась, аккуратно смывая остатки препарата, которые налипли на стенках посуды.

Требования к приготовлению питательных сред Питательные среды, которые не содержат агар-агар, или желатин, растворяют Требования к приготовлению питательных сред Питательные среды, которые не содержат агар-агар, или желатин, растворяют в холодной воде или при слабом нагревании. Питательные среды, в состав которых входит агар-агар или желатин нагревают до полного растворения.

Требования к приготовлению питательных сред Необходимо наблюдать за полнотой растворения сред, которые не подлежат Требования к приготовлению питательных сред Необходимо наблюдать за полнотой растворения сред, которые не подлежат автоклавированию. Признаками полного растворения когда стенках посуды на нерастворенных частиц считается, не препарата, остается после встряхивания жидкость стекает равномерно.

Требования к приготовлению питательных сред Помнить! Все питательные среды чувствительны к нагреванию, поэтому не Требования к приготовлению питательных сред Помнить! Все питательные среды чувствительны к нагреванию, поэтому не следует их нагревать дольше, чем необходимо.

Требования к приготовлению питательных сред Для предотвращения образования конденсат на крышках чашек Петри, готовые Требования к приготовлению питательных сред Для предотвращения образования конденсат на крышках чашек Петри, готовые ПС следует разливать, когда их температура 45 -500 С. Перед тем, как вылить ПС в чашку, ее нужно энергично взболтать, чтоб быть уверенным, что ПС хорошо размешана.

Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Показатель Причины Комкование сухих ПС Излишне высокая влажность Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Показатель Причины Комкование сухих ПС Излишне высокая влажность при хранении. Упаковка оставалась открытой на протяжении длительного срока, или не была плотно закрытой. Превышение срока хранения. Несоответствие р. Н Перегрев в процессе хранения сухого препарата или при его приготовлении, неполное перемешивание, длительная стерилизация, использование щелочного стекла, некачественная вода, повторное расплавление, гидролиз ингредиентов, длительное хранение при повышенной температуре. Превышение срока хранения.

Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Неполное растворение Отклонение от инструкции по нагреванию ПС, Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Неполное растворение Отклонение от инструкции по нагреванию ПС, неудовлетворительное перемещение, перегрев среды, избыточная навеска, неудовлетворительное перемешивание Потемнение Перегрев среды, избыточная навеска, неудовлетворительное перемешивание Мягкий гель Неверная навеска препарата (недостаточное количество), неполное растворение агара, неполное перемешивание, отклонение от инструкции по приготовлению, кислотный гидролиз агара, избыточное разведение агара инокулюмом

Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Потеря ростовых и дифференцирующих свойств Повторное плавление, избыточный Возможные факторы неудовлетворительного качества питательных сред Потеря ростовых и дифференцирующих свойств Повторное плавление, избыточный нагрев, неполное перемешивание, избыточное разведение ПС инокулюмом, неадекватный растворитель инокулюма Несоответствие цвета Непригодность сухой среды, неудовлетворительно вымыта посуда, неочищенная вода Признаки пророста Неправильная/ недостаточная стерилизация, нарушение правил введения добавок и разлива среды

Требования к методам контроля питательных сред (ПС) Включает следующие этапы: -входной контроль закупленной ПС; Требования к методам контроля питательных сред (ПС) Включает следующие этапы: -входной контроль закупленной ПС; -контроль условий и сроков годности; -контроль в процессе приготовления; -контроль в процессе применения;

Входной контроль ПС Паспорт ПС или документ его заменяющий; Копия протокола испытаний, подтверждающего биологические Входной контроль ПС Паспорт ПС или документ его заменяющий; Копия протокола испытаний, подтверждающего биологические свойства;

Контроль качества сухих ПС и добавок Проверка герметичности; Проверка даты первого вскрытия; Визуальная оценка Контроль качества сухих ПС и добавок Проверка герметичности; Проверка даты первого вскрытия; Визуальная оценка содержимого открытых контейнеров;

Контроль условий и сроков годности ПС Приготовленные ПС, готовые к использованию ПС хранят при Контроль условий и сроков годности ПС Приготовленные ПС, готовые к использованию ПС хранят при температуре +6+20 С (4 -120 С); Твердые- до 5 суток; Полужидкие-до 10 суток; Жидкие- до 30 суток; Основы- 3 месяца (либо 1 месяц при комнатной температуре) защищены от света и высыхания; Расплавленную среду расходуют в течение не более, чем 8 часов (по ГОСТ Р ИСО 11133 - не более 4 часов);

Требования к методам контроля питательных сред Каждая приготовленная ПС: -внешний вид -контроль р. Н Требования к методам контроля питательных сред Каждая приготовленная ПС: -внешний вид -контроль р. Н -контроль на стерильность -контроль биологических свойств Результаты контроля должны быть документально оформлены!

Качественный контроль биологических свойств Качественные тесты на каждую партию приготовленной среды из коммерческой сухой Качественный контроль биологических свойств Качественные тесты на каждую партию приготовленной среды из коммерческой сухой среды, не содержащей добавок могут ограничиться использованием одного контрольного положительного штамма.

Качественный контроль биологических свойств плотных сред Тест-микроорганизмы наносят петлей на 1 мкл прямыми штрихами Качественный контроль биологических свойств плотных сред Тест-микроорганизмы наносят петлей на 1 мкл прямыми штрихами на поверхность испытуемой среды Интерпретация результатов: -0 соответствует нулевому росту; -1 соответствует слабому росту; -2 соответствует значительному росту; Целевые микроорганизмы должны быть 2 балла; нецелевые- 0 или 1,

Качественный контроль биологических свойств жидких сред Характеристические реакции оценивают визуально: рабочие культуры инокулируют непосредственно Качественный контроль биологических свойств жидких сред Характеристические реакции оценивают визуально: рабочие культуры инокулируют непосредственно в питательную среду, используя петлю на 1 мкл. ОЦЕНКА: - 0 баллов-нулевая мутность; - 1 балл –очень слабая мутность; - 2 балла- удовлетворительная мутность; Число баллов для целевых микроорганизмов должно быть равно 2.

Количественный контроль биологических свойств Выполняется при поступлении каждой новой серии ПС; Количественный контроль биологических свойств Выполняется при поступлении каждой новой серии ПС;

Количественный контроль биологических свойств ПС Для сред приготовленных в лаборатории: -чувствительность; -скорость роста; -дифференцирующие Количественный контроль биологических свойств ПС Для сред приготовленных в лаборатории: -чувствительность; -скорость роста; -дифференцирующие свойства; -процент всхожести; -показатель ингибиции; -показатель стабильности основных свойств;

Количественный контроль биологических свойств ПС: чувствительность Определяют по максимальному разведению стандартизованной до 10 ЕД Количественный контроль биологических свойств ПС: чувствительность Определяют по максимальному разведению стандартизованной до 10 ЕД рабочей культуры при котором обнаруживается рост (посев каждого разведения- для плотных сред- это 0, 1 мл из 10 -5__10 -8, а для жидких сред – это 1 мл из 10 -4__10 -7 выполняют не менее чем на 3 чашки (пробирки) (рост при посеве не менее 0, 1 мл из 10 -6 для плотных сред и не менее 1 мл из 10 -7 - для жидких сред);

Количественный контроль биологических свойств ПС: скорость роста Время появления роста определяют по минимальному периоду Количественный контроль биологических свойств ПС: скорость роста Время появления роста определяют по минимальному периоду инкубации посевов, через который обнаруживается отчетливый рост культуры (помутнение, осадок для жидких и формирование типичных колоний для плотных питательных сред).

Количественный контроль биологических свойств ПС: дифференцирующие свойства Определяют с использованием РШ с положительными и Количественный контроль биологических свойств ПС: дифференцирующие свойства Определяют с использованием РШ с положительными и отрицательными признаками. Готовят смесь из культуры возбудителя и ассоциантов в соотношении 1: 1: 1 и 1: 10 и по отдельности. Высев по 0, 1 мл. на 3 чашки с питательной средой. Среда должна обеспечивать определенный в инструкции (паспорте) перечень признаков и степень их выраженности.

Количественный контроль биологических свойств ПС: процент всхожести Данный показатель позволяет выявить и оценить наличие Количественный контроль биологических свойств ПС: процент всхожести Данный показатель позволяет выявить и оценить наличие и степень ингибирующего влияния исследуемой ПС на тестовый микроорганизм по сравнению с контрольной ( проверенной неселективной) средой- по 0, 1 мл. из 10 -6 в пяти повторностях. Процент всхожести должен быть не менее 80%

Количественный контроль биологических свойств ПС: показатель ингибиции Степень подавляющего действия среды на постороннюю микрофлору Количественный контроль биологических свойств ПС: показатель ингибиции Степень подавляющего действия среды на постороннюю микрофлору выражают отношением среднего количества колоний микроба-ассоцианта на контролируемой селективной среды к среднему количеству колоний на неселективной (контрольной) среде. Посев 0, 1 мл из 10 -1 в трех повторностях. Ингибирующие свойства удовлетворительны при отсутствии роста микроба-ассоцианта на селективной среде при наличии роста на контрольной среде.

Количественный контроль биологических свойств ПС: стабильность биологических свойств Определяют по отсутствию проявления атипичных свойств. Количественный контроль биологических свойств ПС: стабильность биологических свойств Определяют по отсутствию проявления атипичных свойств. Показатель вычисляют по отношению количества КОЕ с атипичными свойствами к общему количеству КОЕ на контролируемой среде. Свойства культур определяют по тинкториальным, морфологическим, биохимическим и др. признакам.

Расчет количества чашек для проведения контроля -чувствительность-12 чашек; -дифференцирующие свойства- 15 чашек; -процент всхожести-5 Расчет количества чашек для проведения контроля -чувствительность-12 чашек; -дифференцирующие свойства- 15 чашек; -процент всхожести-5 чашек+ 5 неселективных чашек; -показатель ингибиции-3 чашки+ 3 неселективных чашки; ИТОГО: 35 чашек с контролируемой средой + 8 чашек с неселективной средой;

Расчет количества пробирок для проведения контроля -чувствительность-12 пробирок по 9 мл. -дифференцирующие свойства- 6 Расчет количества пробирок для проведения контроля -чувствительность-12 пробирок по 9 мл. -дифференцирующие свойства- 6 пробирок; -показатель ингибиции- 3 пробирки+ 18 чашек неселективой среды; ИТОГО: 21 пробирка с контролируемой средой + 18 чашек с неселективной средой;

Тест-штаммы для контроля питательных сред Для контроля ПС используются РШ, рекомендованные организацией-производителем; РШ хранят Тест-штаммы для контроля питательных сред Для контроля ПС используются РШ, рекомендованные организацией-производителем; РШ хранят в лиофилизированном или замороженном состоянии, на плотных или жидких ПС в холодильнике, раздельно по группам патогенности.

Тест-штаммы для контроля питательных сред Хорошо охарактеризованные микроорганизмы, выделенные в лаборатории, допускается включать в Тест-штаммы для контроля питательных сред Хорошо охарактеризованные микроорганизмы, выделенные в лаборатории, допускается включать в набор контрольных микроорганизмов. Их культуральные характеристики должны быть исследованы и зарегистрированы лабораторией. В контрольном наборе должен находиться штамм с атипичными характеристиками.

Основные принципы ведения тест-штаммов бактериальных культур количество пассажей тестового микроорганизма на питательных средах с Основные принципы ведения тест-штаммов бактериальных культур количество пассажей тестового микроорганизма на питательных средах с момента его возобновления к моменту его целевого использования должно быть, по возможности, минимальной; движение культуры с момента ее возобновления после лиофилизации к целевому использованию должно быть однонаправленным, то есть запасы эталонной культуры не должны пополняться за счет (из) запасов рабочей культуры. Нежелательно пополнять запасы рабочей культуры путем получения ее субкультур;

Тест-штаммы для контроля питательных сред Контрольные микроорганизмы для каждой среды могут включать: -четко положительные Тест-штаммы для контроля питательных сред Контрольные микроорганизмы для каждой среды могут включать: -четко положительные штаммы; -слаборастущие положительные штаммы; -биохимически неактивные штаммы; -полностью ингибированные штаммы;

Основные принципы ведения тест-штаммов бактериальных культур контроль эталонного штамма на соответствие паспортным данным и Основные принципы ведения тест-штаммов бактериальных культур контроль эталонного штамма на соответствие паспортным данным и отсутствие диссоциации проводят перед пополнением запасов рабочей культуры; штаммы с измененными свойствами для последующей работы не используют.

КАЧЕСТВЕННЫЙ КОНТРОЛЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Проводится при каждой варке Исследуется рост основного тест- КАЧЕСТВЕННЫЙ КОНТРОЛЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Проводится при каждой варке Исследуется рост основного тест- штамма и наличие дифферинцирующих признаков. Посев РШ на чашки проводится методом штриха – для получения изолированных колоний. (инкубация -370 С -18 -24 ч). На жидкие и п/ж среды посев производится общепринятым способом Учет: тест-штамм дает хорошо различимый рост (Признаки: помутнение, изменение цвета, образование газа, отличительная форма, структура, окраска колоний, прозрачность, гемолиз)

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ КОНТРОЛЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Проводится при использовании новой серии и продлении срока КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ КОНТРОЛЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Проводится при использовании новой серии и продлении срока годности, если не соблюдались условия хранения. Используются только референс-штаммы рекомендуемые изготовителем ПОСЕВНАЯ ДОЗА – обьем разведения, который содержит необходимое количество жизнеспособного тест -штамма. Расчет дозы выполняют на основе концентрации РШ в 6 и 7 разведениях, исходя из того, что посев на 1 чашку не должен превышать 50 -100 микробных клеток. При правильном разведении 50 -100 микробных клеток –ПОСЕВНАЯ ДОЗА.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИФФЕРИНЦИРУЮЩИХ СВОЙСТВ Используются РШ с положительными и отрицательными признаками. УЧЕТ: структура колоний, 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИФФЕРИНЦИРУЮЩИХ СВОЙСТВ Используются РШ с положительными и отрицательными признаками. УЧЕТ: структура колоний, цвет, изменение цвета среды вокруг колоний, диффузные изменения. Цвет среды. ЧЕТКОСТЬ ДИФФЕРИНЦИАЦИИ КОЛОНИЙ ПРИ ПОСЕВЕ СМЕСЕЙ. Готовят смесь из РШ возбудителя и 2 РШ ассоциантов 1: 1: 1 и 1: 10 (из 6, 6, 6 и 6, 5, 5 степеней) посев по 0, 1 мл на чашки. УЧЕТ: Дифференцирующие свойства считаются удовлетворительными, если совпадают с указанными в паспорте.